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Notch3诱导人小细胞肺癌H446细胞G0/G1期阻滞及其机制
目的 探究Notch3对人小细胞肺癌H446细胞增殖和细胞周期的影响及其分子机制.方法 将人Notch3真核表达质粒、人HES1真核表达质粒、人鼠双微基因2(MDM2)基因沉默表达质粒及其空质粒分别转染H446细胞,采用流式细胞术检测细胞周期,采用RT-PCR法检测Notch3和MDM2的mRNA水平,采用Westernblotting方法检测Notch3、HES1、MDM2、Rb和P21蛋白表达水平.结果 Notch3可抑制H446细胞增殖并导致Go/G1期阻滞(P＜0.05),上调HES1蛋白表达水平和下调MDM2蛋白表达水平(P ＜0.05);HES1高表达也能使MDM2蛋白表达水平下降(P＜0.05),但对其mRNA水平无影响;沉默MDM2基因可抑制H446细胞增殖(P＜0.05),并使H446细胞中Rb和P21蛋白表达水平升高(P＜0.05).结论 Notch3可通过HES1抑制MDM2蛋白表达,进而上调Rb和P21蛋白表达水平,抑制H446细胞增殖并阻滞H446细胞于G0/G1期.
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PI3K/Akt/mdm2信号通路活化对胃癌细胞阿霉素敏感性的影响
目的 研究PI3K/Akt/mdm2信号通路活化对胃癌细胞阿霉素(DOX)敏感性的影响.方法 分别用DOX和PI3K特异性抑制剂wortmannin处理胃癌细胞株SGC7901,采用流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡,免疫沉淀法检测PI3K活性,Western blot法检测PI3K-p85、phospho-Akt(S473)、phospho-mdm2(S166)、Akt和p53的表达.结果 DOX能诱导胃癌细胞SGC7901凋亡,且凋亡率与作用时间密切相关,联合应用wortmannin后,可促进胃癌细胞凋亡.DOX作用SGC7901细胞3、6、12和24 h后, PI3K活性逐渐增强,分别为(8.4±1.7)%、(12.7±2.1)%、(17.4±3.2)%和(16.8±2.4)%;同时,还促进Akt、mdm2磷酸化和p53表达.wortmannin可以抑制mdm2磷酸化,进一步增强p53的表达.结论 DOX可以诱导PI3K/Akt通路异常激活,并通过促进mdm2磷酸化降低胃癌细胞化疗敏感性.
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MDM2/p53通路与心血管疾病的研究进展
鼠双微基因2(MDM2)是一原癌基因,因mRNA的不同剪切可形成多种不同相对分子质量的变异体,如p57、p64、p85、p90等.在正常细胞中,MDM2和野生型p53有着精细的平衡,其相互调节形成负反馈回路:p53诱导MDM2表达,MDM2与p53结合形成p53-MDM2复合物,使p53泛素化而被蛋白酶降解.MDM2-p53反馈体系与其他信号转导途径一起形成调控网络,参与细胞生长抑制、凋亡、细胞周期调控等各种生物进程.现对MDM2/p53途径在心血管疾病中的研究进展进行综述.
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MDM2-p53信号通路在结直肠癌发生和发展中的作用
目的 探究MDM2-p53信号通路在结直肠癌发生和发展中的作用机制,以及p53表达与临床病理参数间的关系,进一步分析其对长期预后的影响.方法 收集86例患者的结直肠癌组织及癌旁正常组织.分别通过免疫组化、蛋白印迹、实时荧光定量法测定结直肠癌及癌旁正常组织中p53和鼠双微基因2(MDM2)的表达.采用Kaplan-Meier生存曲线对患者进行预后分析.结果 在结直肠癌组织中p53和MDM2的蛋白表达与mRNA表达水平均明显高于癌旁组织(均P<0.01),且二者表达呈现正相关(r=0.785).结直肠癌组织中p53的表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移、浸润深度临床病理特征有关(均P<0.05).p53高表达组平均总生存时间为(53.92±1.56)个月,明显低于p53低表达组的平均总生存时间(69.16±3.72)个月,差异有统计学意义(χ2=14.78,P<0.01).结论 结直肠癌的发病风险及预后与MDM2-p53信号通路密切相关,p53可作为结直肠癌预后和治疗效果的潜在靶点.
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MDM2与P16在大肠癌中的表达及临床意义
目的 探讨鼠双微基因2(MDM2)和多肿瘤抑制基因(P16)在大肠癌中的表达及临床意义.方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P)法,对67例大肠癌、30例癌旁组织、20例腺瘤组织,20例正常黏膜的MDM2和P16基因蛋白进行检测.结果 MDM2在大肠癌组织中的阳性表达率为71.7%(48/67),明显高于结肠腺瘤组织、癌旁组织及正常黏膜,差异有显著性意义(P＜0.05).P16在大肠癌组织中的阳性表达率为38.8%(26/67),与结肠腺瘤组织的75%、癌旁组织的83.3%及正常黏膜组织的90%比较,差异均有显著性意义(P＜0.05).大肠癌组织中,MDM2在不同分化程度中表达差异无显著性意义(P＞0.05).P16在不同分化程度中表达差异有显著性意义(P＜0.05),MDM2和P16在不同Dukes分期中有无淋巴转移之间表达,差异有显著性(P＜0.05).MDM2与P16基因蛋白,在不同年龄组、不同性别组中,表达差异无显著性(P＞0.05).在大肠癌中,MDM2蛋白与P16蛋白表达无明显相关性(P＞0.05).结论 MDM2和P16的异常表达,与大肠癌的发生发展有关.联合检测MDM2和P16,对大肠癌的临床诊断、治疗和判断预后,有实际意义.
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miRNA940调控MDM2/p53通路抑制胶质瘤的增殖
目的 探讨微小核糖核酸940(miRNA940)在胶质瘤组织及细胞株中的表达及其对人胶质瘤细胞增殖的影响.方法 采用微阵列芯片技术和荧光定量PCR技术检测miRNA940在胶质瘤组织和细胞中的表达水平.用miRNA940寡聚核苷酸分别转染胶质瘤细胞U87(p53野生型)和U251(p53突变型)细胞系,通过CCK-8增殖检测法和Western blot观察其对胶质瘤细胞增殖能力以及鼠双微基因2(MDM2)、p53和p21蛋白的影响.结果 miRNA940的表达随着胶质瘤恶性程度增加而降低.上调miRNA940后,胶质瘤细胞U87细胞活力降低,MDM2降低,p53和p21升高(P＜0.01);但是胶质瘤细胞U251细胞活力和p21未发生明显变化.结论 miRNA940通过调控MDM2/p53从而抑制胶质瘤细胞的增殖能力,提示miRNA940可能参与胶质瘤的发生和发展.
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POK红骨髓性致癌因子和鼠双微基因2蛋白在大鼠肺鳞状细胞癌发生中的表达及意义
目的 探讨POK红骨髓性致癌因子(Pokemon)和鼠双微基因2(MDM 2)蛋白在大鼠肺鳞状细胞癌发生、发展中的关系及意义.方法 90只大鼠分为实验组75只和对照组15只,通过建立大鼠不同阶段肺组织鳞状细胞癌模型,采用免疫组织化学法检测肺鳞状细胞癌、癌前病变及正常肺组织中Pokemon和MDM 2蛋白的表达.结果 Pokemon和MDM 2蛋白从正常组织到鳞状细胞癌呈现逐渐增高的趋势.对照组的Pokemon和MDM 2蛋白表达与增生组比较差别无统计学意义(P>0.05),但低于非典型增生组及鳞状细胞癌组,差别有统计学意义(P<0.05);鳞状细胞癌组的Pokemon和MDM 2蛋白表达明显高于增生组和非典型增生组,差别有统计学意义(P<0.05).转移癌组的Pokemon和MDM 2蛋白表达高于非转移癌组,差别有统计学意义(P<0.05).Pokemon与MDM 2蛋白表达呈正相关(r=0.692,X2=43.080,P<0.05).结论 Pokemon和MDM 2蛋白在大鼠正常肺组织到肺鳞状细胞癌组织的演变过程中表达逐渐增高,Pokemon和MDM 2蛋白可能共同参与了肺癌的发生、发展和转移过程.
关键词： 大鼠 肺鳞状细胞癌 POK红骨髓性致癌因子 鼠双微基因2 免疫组织化学
