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滋养干细胞转录因子叉头蛋白D3过表达在人绒癌细胞株JAR的恶性生物学特性中的作用研究
养细胞相比，绒癌细胞株JAR中叉头蛋白D3的转录和蛋白水平表达均显著增高。短发夹RNA干扰叉头蛋白D3表达抑制了体外JAR的细胞增殖、迁移和侵袭功能，同时抑制了裸鼠体内肿瘤的生长，降低了肿瘤细胞β-人绒毛膜促性腺激素分泌。通过初筛和后期验证，发现7个受叉头蛋白 D3调控的局部黏附分子(ITGA5, ITGB6, THBS4, COL6A3, VTN, NRXN3和NLGN1)，同时短发夹RNA干扰叉头蛋白D3表达后，JAR细胞内局部黏附激酶活性降低。提示过表达的叉头蛋白D3通过调控局部黏附分子表达和局部黏附激酶活性进而增强JAR的恶性生物学特性。
背景：绒毛膜细胞癌是一种具有高度侵袭能力的滋养细胞肿瘤。叉头蛋白 D3作为胚胎干细胞和滋养干细胞的转录因子，在胚胎发生、肿瘤发生和进展等很多生理、病理状态下发挥着重要作用。
目的：研究叉头蛋白D3在绒毛膜细胞癌恶性生物学特性中的作用及可能作用机制。
方法：利用短发夹 RNA 干扰叉头蛋白D3在人绒毛膜细胞癌细胞株JAR 中的表达，体外细胞增殖、迁移/侵袭实验检测JAR的细胞功能学改变，体内动物成瘤实验检测肿瘤生长情况。Agilent转录表达芯片初筛叉头蛋白 D3调控下游基因并通过定量实时PCR验证。
结果与结论：与原代培养的正常妊娠滋养细胞相比，绒癌细胞株JAR中叉头蛋白D3的转录和蛋白水平表达均显著增高。短发夹RNA干扰叉头蛋白D3表达抑制了体外JAR的细胞增殖、迁移和侵袭功能，同时抑制了裸鼠体内肿瘤的生长，降低了肿瘤细胞β-人绒毛膜促性腺激素分泌。通过初筛和后期验证，发现7个受叉头蛋白 D3调控的局部黏附分子(ITGA5, ITGB6, THBS4, COL6A3, VTN, NRXN3和NLGN1)，同时短发夹RNA干扰叉头蛋白D3表达后，JAR细胞内局部黏附激酶活性降低。提示过表达的叉头蛋白D3通过调控局部黏附分子表达和局部黏附激酶活性进而增强JAR的恶性生物学特性。 -
它莫西芬对绒毛膜癌细胞株JAR补体调节蛋白表达的影响
为探索抗肿瘤药物Tamoxifen对绒毛膜癌细胞株JAR表面补体调节蛋白表达的影响,实验以绒毛膜癌细胞株JAR为研究对象,用流式细胞术和RT-PCR分别检测Tamoxifen作用前后JAR细胞补体调节蛋白在蛋白质和mRNA水平的表达.结果显示:在10-6M Tamoxifen作用3 d后,JAR细胞补体调节蛋白DAF和CD59的蛋白质表达水平明显降低,而MCP无明显改变;在10-6M Tamoxifen作用24 h后,JAR细胞DAF和CD59 mRNA表达水平分别降低88%和60%.提示Tamoxifen可能通过降低DAF和CD59的表达,提高肿瘤细胞对宿主补体攻击的敏感性.
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Notch2和Notch3对滋养细胞株迁移与侵袭功能的影响
目的 探讨Notch2和Notch3对BeWo及JAR人胎盘绒毛癌滋养细胞株迁移和侵袭能力的影响.方法 通过对BeWo及JAR细胞Notch2和Notch3基因的过表达及干扰,观察两种滋养细胞株迁移、侵袭生物学功能的变化.结果 在BeWo细胞中对Notch2干扰后细胞迁移能力在48 h明显减弱,而72 h的迁移能力及Notch2干扰后的细胞侵袭能力无显著变化;Notch3过表达后细胞迁移能力在48 h显著增强,而72 h则显著减弱;Notch3过表达后细胞侵袭能力在48 h、72 h均显著加强.在JAR细胞中对Notch3干扰后细胞迁移能力在48 h、72 h均明显减弱;而Notch3干扰后细胞的侵袭能力及Notch2过表达后细胞迁移能力、侵袭能力均无明显变化.结论 Notch2、Notch3影响BeWo及JAR细胞迁移、侵袭功能.
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马鞭草提取液C部位对人绒毛膜癌JAR细胞增殖的影响
目的:探讨马鞭草(Verbena officinalis)提取液C部位对人绒毛膜癌JAR细胞增殖的影响.方法:通过相差显微镜观察活细胞贴壁程度、细胞形态改变;MTT法测定不同浓度C部位在不同时段对JAR细胞的增殖抑制率,结果用方差分析进行统计学检验:流式细胞仪检测细胞阻滞周期.结果:马鞭草C部位可引起细胞数目减少并萎缩;细胞增殖抑制率随着时间的延长和浓度的增加逐渐增大,72 h的40 mg/ml剂量组抑制明显,抑制率为65%;流式细胞仪检测结果显示阻滞周期在G2/M期之间.结论:马鞭草提取液C部位对人绒毛膜癌JAR细胞增殖有明显抑制作用,其作用机制有待进一步探索.
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马鞭草C部位使人绒癌JAR细胞阻滞于G2/M期并诱导细胞凋亡
目的:观察马鞭草C部位(Verbena officinalis C)对人绒癌JAR细胞周期分布和凋亡的影响,探讨其诱导凋亡机制.方法:采用MTT比色法测定马鞭草C部位对JAR细胞增殖的影响;流式细胞仪检测其对JAR细胞周期分布和细胞凋亡的影响:RT-PCR检测药物作用前后Bax和Bcl-2 mRNA表达变化.结果:马鞭草C部位抑制绒癌JAR细胞增殖,并呈明显时间和剂量效应关系.流式细胞仪结果显示,与对照组比较,40g/L马鞭草C部位处理48 h后,使JAR细胞G2/M期增加154.3%,S期比例降低41.6%;JAR细胞凋亡率增加6.74倍.不同剂量马鞭草C部位处理JAR细胞48 h后,Bax表达水平增加,Bcl-2表达水平下降,并呈剂量依赖性.结论:马鞭草C部位阻滞绒癌JAR细胞于G2/M期,通过改变Bax和Bcl-2表达,诱导JAR细胞凋亡.
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Ki67在绒毛膜癌5-氟尿嘧啶化疗中的作用观察
目的:探讨增殖细胞核抗原(Ki67)在绒毛膜癌5-氟尿嘧啶(5-FU)治疗中的作用.方法:用绒毛膜癌JAR细胞株进行培养传代,以不同浓度5-FU作用于JAR细胞,MTT方法观察5-FU对JAR细胞生长的抑制情况,用逆转录聚合酶链(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western-Blot)方法检测Ki67基因和蛋白的表达.结果:①5-FU对JAR细胞的生长具有抑制作用,并有浓度和时间的依赖性;②5-FU作用于JAR细胞后Ki67基因和蛋白表达减少,随浓度增加而减少.结论:Ki67可以指导绒毛膜癌5-FU的化疗;也可以反映绒毛膜癌5-FU化疗的效果.
