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实验感染C57 BL/6N小鼠粪内蓝氏贾第鞭毛虫tim基因检测
建立蓝氏贾第鞭毛虫感染动物模型,用PCR技术对感染动物粪内该虫tim基因进行检测,探讨蓝氏贾第鞭毛虫基因检测方法.用人源蓝氏贾第鞭毛虫河北株(CD)和江苏株(XZ)的包囊分别接种两组C57BL/6N小鼠,于接种后第6天、10天和14天收集粪便标本,采用酚-氯仿法提取总DNA.将提取液分别按10°、10-1、10-2和10-3稀释并纯化.根据该虫磷酸丙糖异构酶(Triose phosphate isomerase,tim)基因合成1对特异性引物,采用PCR技术分别扩增各个稀释度的样本.结果贾第虫阳性样本均被扩增出相应基因的1条683bp长的片段,纯化后的各个稀释度样本的PCR检测阳性率随稀释倍数的增加而增高.本研究结果为贾第虫感染基因检测方法的进一步研究提供了实验资料.
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蓝氏贾第鞭毛虫C57BL/6N小鼠动物模型的建立
目的建立人源蓝氏贾第鞭毛虫C57BL/6N小鼠动物感染模型.方法用分离自河北和江苏两地蓝氏贾第鞭毛虫感染者的包囊(河北株,CD和江苏株,XZ)分别感染两组C57BL/6N小鼠,收集受染鼠粪便,用蔗糖梯度离心法分离纯化包囊,计算排囊数量 ,分析排囊规律;观察小肠病理组织学改变.结果 C57BL/6N小鼠对此2 株蓝氏贾第鞭毛虫具有很高的易感性,接受具有活力的1×104个包囊/只的36只小鼠,均获得感染,其中呈间歇性排囊者为32只(88.9%),连续性排囊者4只 (11.1%).排囊潜伏期为接种后第3d,高峰期为第7d.2小时所排粪便含包囊数高可达2. 3×107个/g粪. 小肠粘膜出现表面分泌物增加,间质充血、水肿,炎性细胞浸润,粘膜坏死脱落等病理变化.结论 C57BL/6N小鼠可用做建立蓝氏贾第鞭毛虫感染的良好动物模型.
关键词： 蓝氏贾第鞭毛虫 C57BL/6N小鼠 动物模型 -
JNK信号通路对亚急性帕金森病MPTP模型小鼠黑质iNOS表达的影响
目的:研究JNK在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致小鼠帕金森病(PD)模型中对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的调控作用,探讨PD黑质多巴胺(DA)能神经元变性失活的可能机制.方法:采用神经毒素MPTP制备亚急性PD小鼠模型,健康雄性C57BL/6N小鼠随机分为模型组、JNK抑制剂组和对照组,采用行为学观察、免疫组织化学和免疫印迹法,观察模型小鼠行为学变化及中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)、 iNOS和磷酸化c-Jun(p-c-Jun)的表达变化;观察给予JNK通路特异性抑制剂SP600125对上述变化的影响.结果:与对照组相比,模型小鼠出现典型PD样症状.中脑黑质区TH阳性神经元下降约65%,中脑黑质TH表达水平显著降低约75%;黑质区iNOS和p-c-Jun阳性细胞明显增加,且p-c-Jun特异性表达于细胞核,中脑黑质iNOS与p-c-Jun表达水平明显升高.经SP600125处理后,模型小鼠PD样症状减轻,与对照组比较,TH阳性细胞数和TH表达水平仅下降约15%和25%,与模型组比较,黑质区iNOS与p-c-Jun阳性细胞减少,且p-c-Jun仅表达于胞质,中脑黑质iNOS与p-c-Jun表达水平明显下降.结论:JNK通路在MPTP诱导的亚急性PD小鼠黑质iNOS表达中可能起重要的调控作用;JNK通路特异性抑制剂SP600125可能对帕金森病小鼠具有一定的神经保护作用.
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人参皂苷Rg1对MPTP所致亚急性帕金森病模型小鼠中脑黑质p-c-Jun与COX-2表达的影响
本文研究了人参皂苷Rg1(Ginsenoside Rg1,Rg1)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6.四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)所致亚急性Parkinson病(PD)模型小鼠中脑黑质磷酸化c-Jun(p-c-Jun)与环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达的影响,以期探讨Rg1保护PD中脑黑质多巴胺(DA)能神经元可能的分子机制.实验采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型.通过行为学观察,免疫组织化学SP法和免疫蛋白印迹法,观察PD模型小鼠行为学变化,中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)、COX-2和p-c-Jun表达水平的变化,并观察给予人参皂苷Rg1对上述变化的影响.结果显示,模型小鼠出现典型PD样症状.与对照组小鼠相比,黑质区TH阳性神经元数下降约65%(P＜0.001),TH表达水平显著降低约75%;黑质区COX-2阳性细胞明显增多,p-c-Jun特异性表达于黑质区细胞核内,且COX-2与p-c-Jun表达水平均明显升高.经Rg1(10 mg/kg)处理后,模型小鼠PD样症状减轻,与对照组比较,在MPTP第5次注射后7 d,TH阳性细胞数和TH表达水平仅下降约15%和20%;与模型组比较,黑质区COX-2阳性细胞明显减少,p-c-Jun主要表达于细胞浆,部分表达于细胞核,表达水平也明显降低.以上实验结果表明,人参皂苷Rg1对MPTP诱导的亚急性Parkinson病小鼠中脑黑质细胞的神经保护作用可能是通过阻抑p-c-Jun核内表达,从而减弱COX-2表达及其介导的黑质区炎症反应.
