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白纹伊蚊基因组中CYP6家族新成员基因片段的克隆与分析
目的：获得白纹伊蚊CYP6基因家族中新成员的基因片段。方法：根据家蝇CYP6A1、CYP6D1以及致倦库蚊CYP6E1同源区氨基酸序列，设计1对简并引物，分别以白纹伊蚊敏感品系和抗性品系基因组DNA为模板进行PCR，产物经T-A克隆转化至JM109大肠杆菌中，经筛选后测序，获得与设计的细胞色素P450基因片段大小相符合的5个基因片段，并将推导的氨基酸序列进行同源性分析。结果：在白纹伊蚊敏感品系中获得了2个基因片段(AEDG-S1，AEDG-S2)，核苷酸序列长度分别为240bp和236bp；在白纹伊蚊溴氰菊酯抗性品系中获得了3个基因片段(AEDG-R2，AEDG-R3，AEDG-R4)，核苷酸序列长度分别为236bp、236bp和239bp。所得序列与昆虫CYP6家族的同源性在23.1%～53.8%之间，与CYP3家族的同源性在25.6%～43.9%之间，而与CYP4家族同源性较低，为13.9%～24.4%。结论：所得5个序列为CYP6家族中5个新成员的基因片段。
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嗜人按蚊溴氰菊酯抗性分子机理研究Ⅰ嗜人按蚊CYP6基因cDNA片段的克隆与序列分析
目的获得嗜人按蚊CYP6基因家族成员的cDNA片断.方法采用简并引物对嗜人按蚊溴氰菊酯敏感和抗性品系总RNA进行RT-PCR扩增,得到的特异性片断采用T/A克隆法克隆并进行序列测定和分析.结果敏感品系和抗性品系中均扩增得到250 bp左右的片断.进行克隆测序,得到10个CYP6新基因,2个来自敏感品系,8个来自抗性品系,被GenBank收录(登录号:AY273927～AY273936).递交国际细胞色素P450命名委员会,被鉴定为是细胞色素P450超家族中CYP6家族的7个新基因及其3个等位基因,分别属于CYP6Z、CYP6P、CYP6N和CYP6M等4个亚家族.结论得到的10个cDNA新序列为CYP6家族新成员的基因片断.
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白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株基因组中CYP6基因片段的分离与鉴定
目的获得白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6基因家族中某个成员的一个基因片段。方法根据家蝇CYP6A1、CYP6D1以及致倦库蚊CYP6E1同源区氨基酸序列，设计1对简并引物，进行PCR，获得一与设计的细胞色素P450基因片段大小相符合的基因片段。将该片段与pUC19质粒重组，并克隆至JM109大肠杆菌中，经筛选后测序；将推导的氨基酸序列进行同源性分析，并用PC/GENE软件绘制系统树。结果获得了1条长248bp的核酸序列；所得序列与昆虫CYP6家族的同源性在34.2％～44.3％之间，而与CYP4家族同源性较低，与CYP4C1、CYP4D1、CYP4D2同源性分别为22.1％、29.5％和27.6％；所绘制的系统树显示出与同源性分析相一致的结果。结论该序列为CYP6家族中某一成员的基因片段。
