首页 > 文献资料
-
大鼠大脑组织中谷氨酸脱羧酶GAD67基因的克隆和序列测定
目的克隆大鼠脑组织中谷氨酸脱羧酶GAD67基因.方法采用RT-PCR方法,大鼠脑组织中的mRNA逆转录成cDNA,再以cDNA为模板,扩增谷氨酸脱羧酶GAD67基因片段,克隆入T载体,并经序列测定.结果 RT-PCR法扩增出一特异产物与预期长度1795bp相符,T载体克隆测序与大鼠谷氨酸脱羧酶GAD67 100%同源.结论采用RT-PCR和T载体技术获得了大鼠脑组织中的谷氨酸脱羧酶GAD67基因克隆,为该基因的体外表达打下基础.
-
电针对帕金森病大鼠的治疗作用及对基底节输出核团活性的影响
目的：了解高频电针刺激对帕金森病（PD）模型大鼠的治疗效果，以及电针对特定作用靶点---基底节输出核团神经元功能的影响。方法采用机械损毁内侧前脑束的方法制备PD模型大鼠，高频电针治疗后检测大鼠运动行为的改变、纹状体内酪氨酸羟化酶（ TH）纤维的表达分布变化，以及基底节环路中的输出核团内谷氨酸脱羧酶（GAD67）的表达情况。结果电针可缓解 PD 模型的运动行为，同时对纹状体内 TH 表达有一定的增加；电针可降低模型大鼠黑质网状部内的 GAD67表达的增多，但对苍白球内的 GAD67无显著影响。结论电针治疗对 PD模型大鼠具有症状改善和神经保护效应，其作用可能是通过抑制基底节的主要输出核因活性而实现的。
-
异氟醚麻醉所致认知损害的微清蛋白中间神经元相关机制初步研究
目的 观察神经调节蛋白-1受体亚型(ErbB4)、微清蛋白(PV)及谷氨酸脱羧酶67(GAD67)在异氟醚麻醉所致小鼠认知损害中的表达变化,并探讨其可能机制.方法 40只14月龄雄性C57BL/6小鼠随机均分为四组:对照1d组(C1组)、对照7d组(C7组)、异氟醚1d组(Iso1组)和异氟醚7d组(Iso7组).C1、C7组持续吸入O2 2 h;Iso1、Iso7组以1.8％异氟醚+O2麻醉诱导15min,随后持续吸入1.5％异氟醚+O22 h.气体吸入后1、7d,采用旷场实验检测小鼠的运动距离及中心区域活动时间;采用条件恐惧性实验检测环境和声音诱发僵直时间百分比.行为学结束后取小鼠海马组织,采用Western Blot法检测ErbB4、p-ErbB4、PV及GAD67蛋白表达水平.结果 在旷场实验中,各组小鼠的运动距离和中心区域活动时间差异无统计学意义.在条件恐惧性实验中,与C1组比较,Iso1组环境诱发僵直时间百分比显著下降(P＜0.05);与C7组比较,Iso7组环境诱发僵直时间百分比显著下降(P＜0.05).与C1组比较,Iso1组小鼠海马中的p-ErbB4、PV和GAD67表达水平显著下降(P＜0.05);与C7组比较,Iso7组p-ErbB4、PV和GAD67表达水平显著下降(P＜0.05).结论 异氟醚麻醉所致小鼠认知损害可能与海马p-ErbB4、PV和GAD67表达水平下降有关.
关键词： 异氟醚 认知损害 神经调节蛋白-1受体亚型 微清蛋白 谷氨酸脱羧酶67 -
携带人类GAD67基因真核表达载体的构建及转染骨髓基质细胞
目的:构建携带人类谷氨酸脱羧酶67(GAD67)基因的真核表达载体pDC316-CMV-EGFP-GAD67,并转染大鼠骨髓基质细胞(BMSCs).方法:利用基因重组技术,构建pDC316-CMV-EGFP-GAD67真核表达载体;利用脂质体将其转染通过贴壁方法分离培养出来的BMSCs,荧光显微镜下观察并经流式细胞仪检测其转染效率,免疫组化检测GAD67蛋白在BMSCs中的表达.结果:成功构建pDC316-CMV-EGFP-GAD67真核表达载体,转染BMSCs后荧光显微镜下观察可见绿色荧光细胞,流式细胞仪检测转染后48 h的转染效率为37.3%,免疫组化检测转染后48 h,BMSCs内GAD67蛋白呈阳性表达.结论:构建pDC316-CMV-EGFP-GAD67真核表达载体并成功转染BMSCs.
-
噪声暴露对大鼠 ABR 反应阈及听皮层谷氨酸脱羧酶67表达的影响
目的：研究噪声暴露对大鼠听性脑干反应（auditory brainstem response ，ABR）及听皮层谷氨酸脱羧酶67（glutamic acid decarboxylase -67，GAD67）表达的影响。方法将21只健康雌性SD大鼠随机分为噪声暴露后0、7、14天组，每组7只，每组再随机分为对照组（3只）和暴露组（4只）；将暴露组大鼠暴露于频率4 k Hz以上、100 dB SPL白噪声2小时建立噪声性听觉损伤的动物模型，对照组大鼠不作任何处理；分别于噪声暴露前及暴露后0天（0．5～2小时）、第7天、第14天时检测各组大鼠的 ABR反应阈；取噪声暴露后0天（2～4小时）、第7天、第14天各组大鼠的听皮层切片，用免疫组织化学的方法标记各组听皮层中 GAD67阳性神经元数量。结果①在噪声暴露后0．5～2小时暴露组大鼠的 ABR反应阈明显高于对照组（ P＜0．05），14天时基本恢复正常；②在噪声暴露后2～4小时暴露组大鼠听皮层GAD67阳性神经元数量（78．76±16．11个/mm2）明显多于对照组（38．43±9．27个/mm2）（ P＜0．05），第7天和第14天时暴露组GAD67阳性神经元数量（32．22±8．61个/mm2和29．55±11．61个/mm2）明显低于对照组（43．58±12．87个/mm2和43．14±12．44个/mm2）（均 P＜0．05）。结论噪声暴露使大鼠ABR反应阈发生了暂时性阈移，听皮层GAD67阳性神经元数量在噪声暴露后先增多后减少，可能与噪声性聋发病机制有关。
-
MK-801诱导的精神分裂症大鼠脑组织PV、GAD67和KCC2的表达变化
目的 通过对地佐环平(MK-801)诱导的精神分裂症(SZ)大鼠脑组织小清蛋白(PV)、谷氨酸脱羧酶67(GAD67)以及K+-Cl-协同转运蛋白2(KCC2)表达的比较研究,探讨围产期NMDA受体阻断剂致SZ的γ-氨基丁酸(GABA)机制.方法 36只新生雄性Sprague-Dawley大鼠于出生后(postnatal,P) 6d随机分为2批,每批又随机分为正常对照组、SZ发育模型组和SZ慢性给药模型组.SZ发育模型组于P7～10 d皮下注射0.1 mg/kgMK-801,每日2次；SZ慢性给药模型组于P47 ～ 60 d腹腔注射0.2 mg/kg MK-801,每日1次；对照组和各模型组大鼠于相应时段注射0.9％的生理盐水.P63 d,第1批大鼠断头取脑,多聚甲醛固定后行组织切片,以免疫组化方法检测内侧前额叶皮质(mPFC)和海马CA1区PV及GAD67的表达情况；第2批大鼠处死后取mPFC和海马组织匀浆,以免疫印记方法检测mPFC和海马组织KCC2的表达水平.结果 两模型组mPFC和海马CA1区PV以及GAD67的表达水平显著低于对照组(P＜0.05)；SZ发育模型大鼠mPFC和海马CA1区的KCC2表达水平显著低于慢性给药模型组和对照组(P＜0.05).结论 MK-801诱导的SZ发育模型可模拟SZ患者大脑PV和GAD67的表达改变,并可能通过下调KCC2的表达影响mPFC和海马GABA递质系统的发育.
-
人类GAD67基因转染骨髓基质源性神经干细胞及初步检测
目的 利用转基因技术将人类谷氨酸脱羧酶(GAD)67基因转染骨髓基质源性神经干细胞(BMSCs-D-NSCs),获得GAD67修饰的成体专能干细胞.方法 以PCR、双酶切及测序鉴定pEGFP-C2-GAD67和pcDNA3.1-GAD67重组子;利用密度梯度离心法分离培养大鼠BMSCs并促其向NSCs方向分化,将编码人类GAD67基因的真核表达质粒pEGFP-C2-GAD67及pcDNA3.1-GAD67分别转染BMSCs-D-NSCs,荧光显微镜下观察并用流式细胞仪检测转染效率. 结果 pEGFP-C2-GAD67及pcDNA3.1-GAD67均可扩增出约1 800bp目的条带,经双酶切和基因测序证实.荧光显微镜下观察可见大量绿色荧光细胞,两种载体转染效率分别为39.3%和40.5%.结论 pEGFP-C2-GAD67及pcDNA3.1-GAD67真核表达载体重组正确,利用脂质体介导人类GAD67基因能有效转染BMSCs-D-NSCs,为进一步观察其GAD67基因和蛋白的表达提供了前提条件.
-
利用GAD67-GFP基因敲入方法显示小鼠脊髓内表达GFP的GABA能神经元的分布
γ氨基丁酸(GABA)是脊髓背角、前角内主要的抑制性神经递质.为了更好地观察脊髓背角内GABA能神经元的形态和功能,本研究使用了两种谷氨酸脱羧酶67绿色荧光蛋白(GAD67-GFP)基因敲入小鼠,并观察了敲入小鼠脊髓内的GFP表达状况.用免疫荧光组织化学双标记方法显示脊髓内所有的GFP阳性神经元基本上都呈GAD67和GABA阳性;GFP阳性神经元在脊髓背角的Ⅰ～Ⅲ层为密集,背角深层内侧部及中央管周围呈中等密度分布,而在脊髓背角其它部位及前角则呈散在分布.脊髓内GFP阳性神经元的分布与GABA能神经元的分布一致.本文作者等还进一步在GAD67-GFP敲入小鼠中观察了GFP和神经元标志物神经元核蛋白(NeuN)的共存状况.脊髓背角内GFP阳性神经元分别占Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ层的NeuN阳性神经元的31.5%、33.3%和44.7%,与以往的GABA免疫组化研究结果基本一致.本研究表明GAD67 GFP基因敲入小鼠脊髓内的GFP在GAD67启动子的调节下正确地表达于GABA能神经元,该基因敲入小鼠可用于脊髓GABA能神经元的形态学特征和生理学特性及其发育规律等方面的研究.
