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粪便DNA中X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1基因启动子甲基化状态在结直肠癌筛查中的应用研究
目的 以粪便DNA中X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子(XAF)1基因启动子区域的甲基化状态为靶目标,建立新的有效的筛查结直肠癌的方法.方法 收集需做肠镜检查患者自然排泄粪便,经肠镜或病理学检查确诊后,分为3组,结直肠正常组45例,结直肠腺瘤组30例,结直肠腺癌组24例.使用QIAamp DNA Stool MiniKit自粪便抽提人DNA.应用甲基化特异性的PCR(MSP)检测粪便DNA中XAF1基因启动子区域甲基化状态.结果 经genomic-DNA PCR,证实所提取DNA均含有人基因组DNA.经MSP检测,正常组存在高甲基化15例,阳性率33.33％；腺瘤组18例,阳性率60.00％;腺癌组15例,阳性率62.50％,腺瘤组、腺癌组与正常组比较差异有统计学意义(P＜0.05),但腺瘤组与腺癌组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 使用Qiagen试剂盒抽提粪便中人DNA的方法比较稳定.以粪便DNA中XAF1基因启动子区域甲基化状态为靶目标进行结直肠肿瘤的早期诊断,敏感度、特异度较高,但尚需要大样本研究进一步验证.
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XAF1基因诱导胰腺癌细胞株BxPC3凋亡的实验研究
目的 探讨Ad5/F35腺病毒介导的XAF1基因诱导胰腺癌细胞BxPC3凋亡及其可能的作用机制.方法 将前期构建的重组腺病毒Ad5/F35-XAF1感染胰腺癌细胞BxPc3.采用半定量RTPCR、蛋白质印迹检测法检测感染前后BxPC3细胞XAF1 mRNA和蛋白表达的变化;运用Annexin-V/PI和TUNEL法检测细胞的凋亡率;免疫蛋白印迹法检测细胞Caspase-3、PARP、Caspase-8和Bcl-2蛋白的表达.结果 Ad5/F35-XAF1感染后,BxPC3细胞的XAF1 mRNA和蛋白表达明显增高,与空白组和Ad5/F35-Null对照组比较,差异显著(P＜0.05);两种方法 检测的细胞凋亡率分别为(19.90±3.09)%、(9.29±2.13)%,较Ad5/F35-Null组的(6.72±0.76)%、(2.73±0.51)%和空白组的(7.22±1.53)%、(1.56±0.47)%均有显著差异(P＜0.01);Caspase-3、PARP、Caspase-8蛋白表达显著增强,Bcl-2表达降低.结论 Ad5F35-XAF1重组腺病毒感染胰腺癌细胞BxPC-3能明显诱导细胞的凋亡,其机制可能是激活死亡受体途径和线粒体途径.
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甲状腺乳头状癌中XAF1基因表达及其临床意义研究
2000年Fong等[1]运用酵母双杂交技术首次发现X染色体连锁凋亡抑制因子相关因子 1(X-linked inhibitor of apoptosis protein associated factor-1,XAF1)蛋白.研究显示,XAF1蛋白共有301个氨基酸,7个锌指结构,其在许多肿瘤中表达下调,是一个潜在的抑癌基因[1-2].而关于XAF1基因在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的表达研究,文献鲜见报道.本研究采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对70例PTC及其对应的癌旁非癌组织( non-cancerous epithelium,NCE)中XAF1基因mRNA表达进行检测与分析,探讨其与PTC发生、发展的关系及其临床意义,为PTC的生物学治疗提供理论依据.
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XAF1和XIAP在肺鳞癌中的表达及临床意义
目的 探讨X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)在肺鳞癌发生、发展中的作用.方法 51例肺鳞癌患者术后切除的肺组织标本分为三组:A组为肺癌组织,B组为肺癌旁2 cm组织,C组为肺癌旁5 cm组织.应用免疫组化检测三组XAF1蛋白表达;半定量逆转录-PCR检测51例肺癌组织中XAF1和XIAP mRNA表达,分析其表达与临床病理特征的相关性.结果 A组XAF1的表达强度显著低于B、C组(54.9％vs.78.4％、86.7％)(P＜0.05);低分化和高TNM分期的XAF1表达低于高分化和低TNM分期(P＜0.05).A组中XAF1 mRNA的表达水平低于C组(P＜0.05).结论 XAF1在肺癌发生、发展中具有促凋亡作用.
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非小细胞肺癌患者中XAF1的表达及其临床意义
目的 研究非小细胞肺癌(non-small celllung cancer,NSCLC)患者中XAF1基因的mRNA水平,并分析与NSCLC临床病理特征的关系.方法 采用Real-PCR检测60例NSCLC患者癌组织标本和配对正常癌旁组织的XAF1基因mRNA表达水平,比较癌组织和癌旁组织XAF1基因的表达差异;采用单因素方差分析不同临床病理特征间XAF1基因的表达差异.结果 NSCLC患者癌组织XAF1基因的mRNA水平明显低于正常癌旁组织XAF1基因的表达量,且XAF1基因的mRNA水平随着分化程度降低、TNM分期增加及淋巴结转移而降低;差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 XAF1基因在NSCLC患者中呈低水平表达,其表达水平的降低可能与促进NSCLC的发生、发展有关.
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XAF1基因对肺腺癌细胞A549的作用及机制
背景与目的 XAF1是重要的肿瘤细胞生长抑制因子，其低表达与多种肿瘤细胞有关。研究肿瘤抑制基因XAF1对人肺腺癌细胞株A549的作用及机制。方法利用重组腺病毒Ad5/F35-XAF1和对照腺病毒Ad5/F35-NULL瞬时转染A549细胞，用逆转录聚合酶链式反应（reverse transcriptase polymerase chain reaction, RT-PCR）和Western blot方法检测A549细胞株中XAF1 mRNA和蛋白质的表达；MTT检测细胞增殖率、流式细胞仪检测细胞凋亡率，并用West-ern blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果腺病毒介导的XAF1瞬时转染肺腺癌A549细胞后，XAF1 mRNA及蛋白表达水平明显提高，并能明显抑制该细胞增殖和促进细胞凋亡，蛋白质印记法显示凋亡相关蛋白PARP、Caspase-3、Caspase-8的裂解条带。结论恢复XAF1基因在人肺腺癌A549细胞中表达后，能明显抑制该肿瘤细胞增殖并促进其凋亡，其机制可能与XAF1激活肺癌细胞相关凋亡途径有关。
