微波修复在冰冻切片免疫组化中的应用

微波修复法多用于石蜡切片,我们在长期的研究生免疫组化教学过程中,实行改良,将微波抗原修复法用于冰冻切片,取得了满意的效果,方法如:1.常规固定取脑组织冰冻切片.2.漂洗后3%H2 O2封闭10分钟,蒸馏水洗2分钟3次.3.微波抗原修复:入柠檬酸盐缓冲液(PH6. 0),用微波或电炉加热,循环3次后入1%BSA孵育15分钟.4.入一抗30分钟,转入二抗 20分钟,三抗20分钟,显色.结果讨论:1.与对照切片成比,阳性细胞染色增强,背景变浅,阳性检出率提高.由于常规的冰冻切片免疫组化方法所用的固定剂多含甲醛,醛基与蛋白质中的氨基交联,使抗原决定簇被掩盖,影响了免疫组化染色结果,使背景染色较深,阳性检出率较低.且这种作用随固定时间的增长而加重,用微波修复抗原的方法,可以使抗原决定簇暴露,有利于抗体结合.此外,部分因固定而被损伤的抗原决定簇也得到修复,因此能提高抗原的阳性检出率,增加染色强度,降低背景的非特异性染色.2.染色时间大大缩短.以往为保证染色效果,常规一抗孵育时间较长(12-24小时),而用微波修复后仅需 30分钟.因为微波修复法可使抗原暴露,利于抗原抗体结合,提高了反应速度,节省了时间 .综上所述,在冰冻切片中使用微波抗原修复的方法值得推广.

122.机采血小板供者柠檬酸盐毒性全国性调查

钙剂补充改善献血者柠檬酸盐抗凝剂相关副反应的研究

目的 了解不同钙剂补充方式对改善献血者柠檬酸盐抗凝剂相关副反应的效果.方法 在获得知情同意后,对22名年龄匹配的志愿者应用自身交叉、安慰剂对照研究模式,在一定的闻隔期内分别实施了3次标准化条件下的临床干预方案,A:持续80 min,按1.5 mg·kg-1·min-1输注柠檬酸盐抗凝剂;B:A+输注前10 min口服1.2 g钙剂;C:A+静脉输注葡萄糖酸钙100 mg/h.在干预实施的同时记录受试者对柠檬酸盐抗凝剂输注的反应,并采集不同观测时间点血样做游离钙离子浓度(iCa2+)检测.结果 柠檬酸盐相关副反应主要表现为口唇、面部、肢体麻木、胸闷、头晕、恶心等轻、中度反应;临床干预40、80和干预结束后120 min时,A组与C组相比,ica2+(mmmol/L)分别为1.00±0.05 vs 1.06±0.05、0.94±0.06 vs 1.04±0.06、1.22±0.05 vs 1.30±0.05(P<0.01),两组副反应发生率对比为54.55% vs 18.18%(P<0.05),而A组 vs B组这2项指标的差异无统计学意义(P>0.05);A组中的男性与女性相比,干预终末点iCa2+(mmol/L)为0.98±0.04 vs 0.90±0.06(P<0.01),副反应发生率为13.64% vs 40.91%(P<0.05).副反应的发生与干预性补钙终末点的iCa2+密切相关(r=-0.52,P=0.01)而与试验对象的体重无关(r=-0.238,P=0.286).结论 本研究模式下,静脉补钙比口服补钙能够更加有效地改善柠檬酸盐所致低钙血症并减少相关副反应的发生;以口服补钙作为预防措施时则需在服用剂量和服用时间上多加考虑.对女性献血者在机采血液前进行常规性的预防性补钙是有益的.

柠檬酸盐抗凝剂对机体电解质和骨代谢的影响

柠檬酸盐自1914年起就被认为是血液的佳抗凝剂,其作用机理是通过螯合血液中的钙离子,形成不能离子化的柠檬酸钙来达到抗凝目的.由于肝脏能够迅速分解柠檬酸盐并通过肾脏排出体外,因此,柠檬酸盐被认为是相对安全的血液抗凝剂并广泛地应用于血液抗凝和单采程序[1].但是目前已知,相对大量柠檬酸盐抗凝剂的应用会引起机体内电解质代谢发生变化,如血钙磷水平下降,同时引发血甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)水平升高[1-6].而钙的代谢变化又是骨代谢中主要的环节,因此柠檬酸盐所致的低钙血症是否引发骨代谢生理变化引起了人们的兴趣[7-11].我们就柠檬酸盐抗凝剂对机体电解质和骨代谢的影响作一综述.