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初论免疫组化标准化(二)
2.2.2抗原修复液的选择加热抗原修复缓冲液有多种,如柠檬酸盐缓冲液(pH6.0)、Tris(pH7~8)、EDTA(pH8.0)等,目前首选柠檬酸盐缓冲液(pH6.0),优点是染色背景清晰,适合于大多数抗体.Tris和EDTA两种修复液对部分抗原修复效果较强,但其染色背景同时加深,如使用不当易造成假阳性结果.
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柠檬酸盐抗凝剂对献血者骨代谢平衡的短期影响
本研究旨在探讨单采血小板模式下柠檬酸盐抗凝剂的应用对机体骨代谢平衡的短期影响,为可能的干预手段提供参考,更好地保护献血者健康.采用自身交叉、安慰剂对照的研究模式,对22名健康献血志愿者以标准化的干预方式分别给子1.5 mg/(kg·min)的柠檬酸盐抗凝剂(ACD-A)和相同容量的安慰剂(生理盐水)输注,干预洗脱期为2-3周.干预过程中采集系列血样进行骨代谢相关指标,包括骨形成指标骨钙素(osteocalcin,OC)、骨吸收指标Ⅰ型胶原蛋白C端肽(carboxyterminal telopeptide of type Ⅰ collagen,CTX)、全段甲状旁腺素(intact parathyroid hormone,iPTH),以及游离钙离子(ionized calcium,iCa2+)和无机磷(phosphorus,Pi)的检测,采集系列尿样进行尿钙、尿磷和尿肌酐的检测.结果表明:与对照组比较,柠檬酸盐干预导致:①血清OC和CTX水平大幅升高(p<0.0001),并于干预结束时升高至高点,其中CTX增幅高于OC(p=0.02),OC/CTX比值降低(p<0.01);②血清iPTH水平升高(p<0.0001),Ca2+(p<0.0001)和Pi(p<0.01)水平降低,尿钙排出增加(p<0.0001);③女性iCa2+水平降幅高于男性(p=0.007),但未见iPTH、OC和CTX水平变化的性别间差异;④血清OC水平变化与CTX正相关(r=0.56,p<0.0001),二者均与iCa2+水平变化负相关(rOC=-0.44,rCTX=-0.44,p<0.0001);男性iPTH水平变化与OC相关(r=0.34,p=0.02),女性无此相关性;⑤上述指标24小时后均恢复至初始水平.结论:普通剂量下单次柠檬酸盐抗凝剂的输注可引发机体骨转换率的短暂提升,并以骨吸收增强为主要特征,同时伴随有尿钙排泄的增加,其对长期、频繁单采献血者骨质健康的影响值得关注.
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柠檬酸盐抗凝剂对不同种族和性别人电解质代谢的影响
目的 探讨柠檬酸盐抗凝剂对不同性别和不同种族人电解质代谢的影响,为临床检测干预提供参考.方法 应用自身交叉、安慰剂对照研究模式,对22名年龄匹配的中国人(男女各11名)和10名白人男性志愿者以标准化的干预方案分别给予柠檬酸盐抗凝剂[1.5 mg/(kg·min)]和相同体积生理盐水(安慰剂)的输注(洗脱间隔期为2~3周);同时采集干预过程中的系列血样和尿样进行血、尿相关指标的检测.结果 22名中国男女试验对象间的基础清蛋白[男(43.05±1.81)g/L,女(42.26±2.67)g/L]和游离钙离子浓度[男(1.27±0.04)mmol/L,女(1.26±0.04)mmol/L]相近;柠檬酸盐的输入可导致中国女性较中国男性有更大的离子钙浓度降幅[女-28.68%(-20.00%~-35.2%),男-23.84%(-16.53%~-29.32%),t=3.19,P<0.01],但其对血磷[男-18.81%(-3.16%~-25.09%),女-19.23%(-1.22%~-32.16%)]及清蛋白[男-0.32%(3.27%~-7.印%),女1.88%(6.03%~-9.31%)]的代谢影响性别间差异无统计学意义(t值分别为0.36,0.47,P均>0.05);柠檬酸盐干预可同时导致中国人尿钙排泄增加[干预前0.34(0.09~0.87),干预后0.96(0.18~1.47),t=6.66,P<0.01].与白人男性相比,中国男性具有较高的离子钙基础水平[中国男性(1.27±0.04)mmol/L,白人男性(1.22±0.02)mmol/L,t=3.7,P<0.01]和较大幅度的清蛋白生理节律性波动[中国男性-11.72%(-5.70%~-14.21%),白人男性-1.74%(2.43%~-7.68%),t=7.43,P<0.01].但两种族男性在柠檬酸盐致血离子钙[中国男性-23.84%(-16.53%~-29.32%),白人男性-21.95%(-18.31%~-30.92%)]、磷[中国男性-19.23%(4.65%~-32.16%),白人男性-12.68%(0.68%~-42.19%)]、清蛋白[中国男性-0.32%(1.05%~-7.60%),白人男性-1.39%(1.87%~-7.26%)]和尿钙排泄[中国男性237.70%(11.8%~935%),白人男性234.37%(5.45%~504.00%)]的代谢变化差异无统计学意义(t值分别为0.32、0.03、0.25和0.04,P均>0.05).2种干预模式下试验对象的镁离子浓度均未见变化.结论 柠檬酸盐抗凝剂对机体镁、磷离子及清蛋白的代谢影响不存在着种族和性别间的差异.但其对钙离子代谢影响的性别差异性预示着在机采过程中女性比男性有更高的低钙血症副反应发生的可能.
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柠檬酸盐抗凝剂对机体代谢的影响
成分血单采技术(又称机采)已广泛应用于各采供血机构及各临床医疗单位.作为一种标准配置的抗凝剂,柠檬酸盐(ACD-A)常规地应用在各机采过程中.有关柠檬酸盐的应用可引起成分血单采过程中献血者低钙血症的现象已有报道[1-5],但至今为止仍缺乏具对照性的动力学研究.
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质粒介导KPC-2型碳青霉烯酶弗劳地柠檬酸盐杆菌的研究
碳青霉烯类抗生素对革兰阴性杆菌具有强大的抗菌活性,是治疗由多重耐药革兰阴性杆菌导致的医院感染的有效药物,尤其适用于产超广谱β内酰胺酶(ESBL4)和AmpC酶的肠杆菌科细菌引起的严重感染.随着碳青霉烯类抗生素在临床上使用增加,革兰阴性杆菌临床株对该类药物的耐药性不断增加,特别是非发酵菌的耐药率升高明显,但在肠杆菌科细菌中少见.
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西地那非的分析方法研究进展
西地那非(Sildenafil)是一种哌嗪类衍生物,于1998年首次在美国上市,它的柠檬酸盐是由美国FDA批准用于治疗性功能障碍的第一个口服药物,商品名Viagra,中文译名为万艾可,是对环磷酸鸟苷(cGMP)特异的5型磷酸二酯酶(PDE5)选择性抑制剂,在临床上已广泛应用,主要用途有:能增强阴茎勃起的生理反应、治疗男性不育与阳痿、妇女性功能障碍以及心血管疾病等.
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稀土离子及其柠檬酸配合物诱导人红细胞的溶血作用
目的:研究稀土离子Ln3+及其柠檬酸根配合物[Ln(Cit)2]3-诱导人红细胞的溶血作用.方法:将不同浓度的Ln3+或[Ln(Cit)2]3-与人红细胞温育后,用分光光度法测定离心上清液中的血红蛋白浓度,计算相对溶血率H%.用外推法确定临界溶血浓度cH0.结果:14种稀土离子对人红细胞的临界溶血浓度cH0已经确定;发现[Ln(Cit)2]3-的H%~c关系曲线为非对称的"钟"型曲线,结论:稀土离子Ln3+具有较低的临界溶血浓度,这说明Ln3+与红细胞有较强的作用及细胞毒性.[Ln(Cit)2]3-诱导的人红细胞相对溶血率H%与稀土离子在介质中的物种分布有关.
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常食洋葱益健身
洋葱为百合科葱属多年生草本植物.洋葱的鳞茎,与葱同科属.洋葱鳞茎粗大,近球形至扁球形;外皮紫红色、褐红色、淡褐红色、黄色至淡黄色;内皮肥厚,肉质;叶圆筒状,中空,具强烈香气.洋葱含挥发油、气体物质(如硫醇、二甲硫化物等),还含少量柠檬酸盐、多种氨基酸、桂皮酸、咖啡酸、阿魏酸、芥子酸、栎精、槲皮素、蛋门质、粗纤维、维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素C、烟酸、脂肪、黏液汁、钙、磷、铁等.洋葱含有的多种有效成分,故对人体具有较广的作用.
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柠檬美容吃用两便
柠檬味酸微甘,性微寒,其果汁内富含柠檬素、柠檬酸盐、黄酮类、鞣质及多种维生素等.柠檬不仅有生津止渴、清热消暑、和胃降逆、化痰止咳的作用,而且能促进血液循环,消除皮肤色素沉着,有美容养颜,减肥瘦身的功效.以下是专家推荐的利用柠檬美容的10种妙方,爱美的女士不妨自己动手去做.
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哌嗪抗实验性心律失常作用的研究
哌嗪(piperazine),又称六氢哌嗪.许多治疗心脑血管疾病的药物如脑益嗪、西比林、芳哌嗪酚等均含有哌嗪的基本结构,所以推测哌嗪可能具有抗心血管疾病的作用.通过查阅文献发现,国内研究的绝大多数是哌嗪衍生物的合成和药理作用,哌嗪衍生物具有镇痛、抗菌、抗心律失常、促进成骨细胞的增殖、肾脏保护、抗高血压等多种生理活性,但尚未发现国内研究哌嗪抗心律失常作用的报道.Onuaguluchi等[1]研究发现,在哇巴因致蟾蜍死亡动物模型上,利多卡因(lignocaine)盐酸盐的保护作用比哌嗪柠檬酸盐强10倍,但是在半数致死量(LD50)上,lignocaine的毒性要比哌嗪高56~60倍.故哌嗪比lignocaine更安全,更具开发的潜质.
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锰在人类前列腺癌细胞中作为铁的拮抗剂而阻碍线粒体中顺乌头酸梅的表达
目的:探讨锰在调节人类前列腺癌细胞系PC-3细胞系中线粒体顺乌头酸酶(mACON)的活性过程中可能发挥的作用.方法:用还原性烟草酰酸腺嘌呤二核苷酸配对法测量PC-3细胞中的mACON酶活性.运用免疫印迹法与暂时基因表达实验测定mACON的基因表达.用定点突变报告基因分析法与核酸胶体位移法确认以前公认的基因反应元件.结果:体外实验确认二氯化锰(MnCl2)处理16 h后可抑制mACON的酶活性而影响了柠檬酸的有效利用并抑制了PC-3细胞的细胞增殖.尽管暂时基因表达实验结果显示MnCl2通过铁反应元件路径使mACON基因的转译增加了五倍,但免疫印迹法报告基因分析结果却显示MnCl2处理抑制了mACON的蛋白与基因表达.若同时加入柠檬酸氨铁,MnCl2的抑制效果可被逆转.定点突变报告基因分析法与核酸胶体位移法实验结果表明一个以前公认的位于mACON基因的促进子序列上的金属反应元件参与了MnCl2对mACON基因表达的调控.结论:本研究结果指出锰可作为铁的拮抗剂破坏mACON的酶活性和基因表达,进而干扰前列腺细胞的柠檬酸代谢.
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络合滴定法测定复方碳酸钙泡腾颗粒剂中钙含量方法考察
目前,由于碳酸钙具有价格低廉,副作用较小等特点,已被国内广泛地用作补钙剂原料,中国药典也已将碳酸钙作为补钙原料收载[1,2].但是碳酸钙为不溶于水的无机化合物,通过在胃中溶解后吸收,长期使用可影响消化功能,为提高碳酸钙的生物利用度和减少不良反应,在处方中加入适量柠檬酸和维生素D3制成了复方碳酸钙泡腾颗粒剂,由于颗粒剂在水中溶解后形成柠檬酸盐,有缓冲作用,导致络合滴定的终点突变不明显,影响结果的准确性,为此,我们对测定方法进行了改进.
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补钙干预对柠檬酸盐抗凝剂所致机体代谢变化的影响
[目的]了解不同补钙干预方式对柠檬酸盐抗凝剂(ACD-A)所致的机体代谢变化的影响,为预防ACD-A所致低钙血症提供参考.[方法]采用自身交叉、安慰剂对照研究模式,对22名志愿者分别给予4种干预:A.输注生理盐水为安慰剂;B.仅输注ACD-A;C.ACD-A输注+口服钙片;D.ACD-A输注+静脉补钙.每一干预过程中同时采样进行血、尿电解质分析.[结果]静脉补钙可有效减缓ACD-A所致的钙离子下降趋势;口服补钙仅明显提升干预末钙离子浓度.2种补钙方式均未对血磷的变化造成影响,但均导致游离钙、磷离子浓度恢复进程加快及24 h后血磷检测值升高.B、C、D法干预模式下血磷与血钙的变化密切相关,血钾与血氯的变化相关.[结论]口服补钙和静脉补钙均对ACD-A所致的血钙和磷的代谢变化有影响.用口服钙剂预防时应考虑服用时间和剂量的影响.
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24小时尿样使用防腐剂对尿酸及钙、镁、磷检测的影响
临床上24小时尿液检测用于多种疾病的诊断和随访,例如24小时尿蛋白定量用于肾病综合征等疾病的诊断,24小时尿中某些离子检测可用于尿路结石病人的随访.尿液中钙(Ca2+)、磷(P3-)、镁(Mg2+)、草酸盐、柠檬酸盐、钠离子、钾离子和尿酸等指标可用于尿路结石病人的实验室检查,因为这些物质在结石形成中起重要作用[1].
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痰液中分离出产β-内酰胺酶发光致病杆菌1例报告
患者男,76岁,反复咳、痰、喘40年,每年发作3个月以上,症状加重7天入院.查体:T37.2℃,P95次/min,R21次/min,Bp135/70mmHg.血Rt:WBC6.5×109/L,RBC4.45×1012/L,Hb147g/L,PLT128×109/L;血气分析:pH7.44,PaO273.4mmHg,PaCO2256.4mmHg,HCO-338.6mmol/L,BE12.5mmol/L; CT示慢性支气管炎、两肺气肿征、双肺上叶结核灶.将患者痰液接种于血平板,37℃24小时后,菌落呈中等大小、圆形、灰色光滑,涂片检查证实为G-杆菌.生化反应:氧化酶,靛基质,赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、ONPG、V-P、甘露醇、柠檬酸盐、苯丙氨酸、肌醇、山梨醇、乳糖、葡萄糖、木糖、棉子糖、鼠李糖、阿拉伯糖、水杨酸、蔗糖、侧金盏花醇、精氨酸双水解酶阴性.触酶、动力、尿素、明胶液化、丙二酸盐阳性,与相关菌区别:本菌动力阳性,精氨酸双水解酶和鸟氨酸脱羧酶均阴性,可与不动杆菌属相区别,培养三次结果相同.根据以上生长特性及生化反应结果符合发光致病杆菌的特征,且同上海FORTUNE.2000细菌鉴定仪结果相同,其鉴定可信度98.79%.
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柠檬酸钠对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制
目的 探讨柠檬酸盐对胃癌细胞的影响及其机制.方法 将胃癌细胞株BGC-823和SGC-7901各分成对照组、5mmol/L组、10 mmol/L组,分别用0、5、10 mmol/L柠檬酸钠处理.24、48h后,荧光显微镜下观察细胞增殖变化、进行活细胞计数、计算细胞增殖抑制率;应用4’,6-二.脒基-2-苯基吲哚(DAPI)细胞核染色和流式细胞仪检测细胞凋亡;24h后蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白表达.结果 5、10 mmol/L组活细胞计数均低于对照组,细胞增殖抑制率均高于对照组(P<0.05);DAPI染色显示凋亡细胞核变化特点.流式细胞仪凋亡检测显示,BGC-823/SGC-7901对照组、5、10 mmol/L组,24h后凋亡率分别为(10.68±1.20)%/(11.86±0.20)%,(46.36±0.60)%/(50.72±1.90)%,(58.41±3.50)%/(59.92±2.60)%;48 h后分别为(8.20±1.60)%/(4.99±0.90)%,(76.34±2.70)%/(82.92±2.80)%,(87.18±3.10)%/(95.65±1.30)%.5、10 mmol/L组与对照组比较细胞凋亡率增高(P<0.05),并有浓度和时间依赖性.Western blot法显示两株细胞中多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、活化Caspase-9(cleaved Caspase-9)、活化Caspase-3(cleaved Caspase-3)表达增高,髓细胞白血病基因-1(Mcl-1)表达降低,在SGC-7901中突变型p53( Mtp53)表达降低.结论 柠檬酸钠能有效抑制胃癌细胞增殖,并经线粒体通路诱导凋亡,其作用随浓度和作用时间增加而增强.其机制可能与Mcl-1表达降低有关.
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免疫组织化学抗原修复液PBS与EDTA的比较
免疫组织化学也称免疫细胞化学,是用标记抗体寻找组织细胞抗原的方法,来检测细胞中化学成分的科学技术.由于免疫组织化学技术特异性强,敏感性高,操作简单,设备要求简单,且该技术在组织中定位性能好,因此,常常应用于临床病理诊断及科学研究.影响免疫组织化学技术的因素有许多,其中抗原修复技术是关键步骤.本研究比较抗原修复过程中修复液柠檬酸盐缓冲液与EDTA缓冲液的使用,旨在优化抗原修复过程.
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氟乙酰胺中毒大鼠血柠檬酸盐和尿氟水平的动态研究
目的探讨氟乙酰胺中毒时血柠檬酸盐和尿氟的动态变化.方法经口染毒制备 SD大鼠中毒模型,按预实验的LD50结果设置高、中、低剂量组(剂量分别为21.50、10.00和4.64mg/kg),利用酶法测定血清柠檬酸盐,氧瓶燃烧和氟电极法测定尿氟,对中毒大鼠进行染毒前、染毒后3h、24h、3d、7d的动态监测.结果大鼠染毒后3h的监测点两项生物监测指标均明显升高,其中血柠檬酸盐高剂量组从染毒前(16.0±5.7)mmol/g Cr升至(50.4±13.1)mmol/g Cr,升高了2倍,为3组中升幅大.尿氟的监测中,高剂量组有机氟也从(1.0±0.3)mg/g Cr升至(9.7±2.4)mg/g Cr、无机氟从(1.1±0.2)mg/g Cr升至(5.1±0.9)mg/g Cr,升高了4~8倍,均为3组中升幅大;两项生物监测指标均随着中毒时间的延长而逐渐降低,第7d的监测点降至染毒前水平;抽搐、死亡与柠檬酸盐的含量有关.结论两项监测指标有较好的敏感性和特异性,共同时应用对氟乙酰胺中毒的临床诊断有重要的参考价值,所采用的方法简便、快速,适合推广应用.
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两种肝素抗凝血浆对检测8项生化指标的影响
随着检验医学的不断发展,抗凝血浆的普及推广使检验结果的回报时间大大缩短了,这就为临床治疗赢得了宝贵的时间,目前临床实验室中使用的抗凝剂的种类很多,如抗凝血酶、草酸盐、肝素、EDTA、柠檬酸盐等,这些抗凝剂对保证血浆和细胞的快速分离、缩短患者等候时间具有重要意义,但抗凝剂的作用原理及其所含成分不同,对生化测试项目的影响也会有所不同,所以抗凝血浆的选择不当会造成检测结果不准确.
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037 异柠檬酸盐作为钙离子活性缓冲剂在凝固反应中的应用