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免疫组化技术(四)
3 免疫组化方法这里有大量用于定位和验证组织抗原的免疫组化染色技术.选择合适的技术应基于各种研究标本的类型、研究的预处理的类型等参数,例如:冷冻切片、石蜡切片、树脂切片或细胞学制品以及所需敏感性的程度.
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自制组织芯片测试GS试剂对组织抗原的保存效果
我们自制组织芯片,通过免疫组化染色,对乳腺疾病组织中vimentin的表达情况进行了回顾性检测,用来测试GS试剂对组织抗原的保存情况,取得较为满意的效果.1 材料和方法1.1 材料 选取河南省人民医院病理科2011年7月至12月资料齐全的乳腺疾病存档蜡块80例,其中乳腺纤维瘤20例,乳腺癌60例;患者术前未进行放疗或化疗.所选取的蜡块当时均是经GS无醛固定液固定、GS系列脱水透明套液试剂制作而成.主要仪器和试剂 Leica染封一体机,Leica-Band全自动免疫组化染色仪,GS系列试剂(哈尔滨格林标本技术开发有限公司),vimentin(即用型)和Maxvision试剂盒均购置于福州迈新生物技术公司,Leica机用Bond Polymer Refine Detection染色试剂盒.
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对照检测GS试剂对组织抗原的影响
目前,经过GS试剂处理制作的蜡块在放置较长时间后对组织抗原的保存效果的报道却较少.因此,我们通过免疫组化染色和分子学检测,对60例标本组织中21种抗体进行了回顾性检测,测试经GS试剂处理制作的蜡块经过2年放置后组织抗原的保存情况.1 材料与方法1.1 材料 选取河南省人民医院病理科2011-07—12间手术切除标本60例,其中乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、宫颈癌、间质瘤、胃癌、前列腺、脑组织、淋巴瘤、扁桃体各6例,所有肿瘤均经病理证实,患者术前未进行化、放疗.将每例标本的同一部位先切取一块较大组织,再将这一块较大组织块从中间切开,一块制作为常规蜡块组,另一块制作为GS蜡块组.两组共120个蜡块在本次实验之前均经过2年的放置.
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回顾性测试GS试剂处理的蜡块组织抗原的保存效果
GS系列环保型病理试剂是一套国内研制的甲醛和二甲苯替代试剂,它可以替代传统的以甲醛二甲苯为主体的石蜡切片技术流程,减少室内有毒有害气体的污染和毒害作用,同时杜绝大量排放此类毒害化学物质对生活环境的污染,随着GS试剂使用的推广,GS试剂处理制作的蜡块放置后组织抗原的保存状况也应该引起大家的重视.
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小鼠肾发育过程中增殖与凋亡相关蛋白在树脂切片上的表达
在石蜡切片或冷冻切片上做免疫组织化学实验经常遇到组织结构不全的问题.树脂包埋的组织可以展示保存良好的形态结构,但树脂包埋所采用的醛类固定剂可以和组织抗原交联,同时环氧树脂也掩盖了抗原的共价键,因此树脂切片上的抗原表达很弱[1].采用适当浓度的强碱溶液(2 g KOH溶于15ml甲醇与环氧丙烷溶液)蚀刻环氧树脂可以充分暴露与固定剂交叉结合并被树脂覆盖的抗原2-4],同时采用高温高压加热可以提高其抗原性[5].但是,在树脂切片上应用强碱溶液或许能极大地影响抗原、固定剂和树脂包埋成分的分子和空间结构.因此,对于形态学和病理学研究者来说,改善树脂切片的免疫显色是一项长期而困难的任务.
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血清鳞状上皮细胞癌抗原在肿瘤中的临床应用价值
1 血清SCC-Ag的分子结构和生物学特性鳞状上皮细胞癌抗原(squamous cell carcinoma associated antigen, SCC-Ag)为组织抗原,属鳞状上皮细胞癌相关抗原TA-4的亚单位,用等电聚焦法对TA-4抗原的不均一性进行研究,揭示酸性TA-4即鳞状上皮癌患者循环中表达的抗原.SCC-Ag是一种分子量为48 000道尔顿[1]的糖蛋白,1977年由Kato和Torigo从子宫颈的鳞状上皮细胞中分离出来,就生物活性而言,属于丝氨酸蛋白酶抑制剂家族,SCC-Ag并不是由单一物质组成,它至少由2个同源性非常高的基因SCCA1、SCCA2编码,位于染色体18q21.3互相串联.
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磷酸盐缓冲液在组织抗原修复中的应用
随着免疫组织化学技术在临床外检及科研方面的广泛应用,对该方法的优缺点都比较了解,要做好一张好的免疫组化切片需注意关键性的几步,其中抗原修复是决定石蜡切片免疫组化结果的重要因素之一.加热温度及修复液的PH直接影响其效果.我们用0.01mL PH 7.2~7.4 PBS液作为修复液,对我们科现有的一些免疫组化试剂进行对比实验,其结果对多数胞浆包膜着色效果好.
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疣鼻栖鸭恒定链(MDIi)多克隆抗体制备及鉴定
目的 制备抗疣鼻栖鸭恒定链(MDIi)多克隆抗体,鉴定其与组织抗原MDIi的反应性.方法 以PCR扩增获得MDIi序列构建原核表达载体pET-32a/MDIi,转化大肠杆菌进行表达;对表达产物鉴定后,免疫小鼠制备抗MDIi多克隆抗体;间接ELISA测定抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性,间接ELISA检测抗体与疣鼻栖鸭组织MDIi的反应强度.结果 成功构建了pET-32a/MDIi原核表达载体,诱导表达了相对分子质量(M)约40 000的包涵体形式的MDIi重组蛋白,免疫小鼠获得效价为1∶128 000的特异性多克隆抗体,抗体与疣鼻栖鸭组织中的MDIi反应滴度为1∶32 000.结论 成功制备了高效价的特异性抗MDIi多克隆抗体,抗体与组织抗原有较强的免疫反应性.