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编码恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1的17区片段的核酸疫苗诱导小鼠体液免疫反应的研究
目的初步研究编码恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1(MSP1)的17区片段的核酸疫苗(VR1012/MSP1-17)诱导小鼠的体液免疫反应.方法 BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠分别经每次每只200μg/100μl和100μg/100μl的VR1012/MSP1-17三闪肌注免疫后,用ELISA间接法检测免疫鼠血清中抗MSP1 17区的抗体.结果两种小鼠均产生明显的抗MSP1 17区的抗体,BALB/c小鼠较C57BL/6小鼠产生的抗体略高,但总体抗体水平不是很高.结论该核酸疫苗具有一定的免疫原性,其保护性仍需进一步研究.
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套式PCR用于海南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1和2的分型研究
目的了解海南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1(pfMSP1) 和表面蛋白2(pfMSP2)等位基因型的分型特征.方法采用套式PCR法分别扩增pfMSP1基因第2区与第3区部分片段和pfMSP2基因的中间可变区(第3区),对海南省恶性疟原虫分离株进行基因分型. 结果 55份血样中有52份恶性疟疾患者扩增出pfMSP1基因片段,以MAD20型为主导型(84.6%),K1型为次要型,未检出RO33型, 两种不同等位基因混合感染率为15.4%.同时,55份血样中有53份恶性疟疾患者扩增出pfMS P2基因片段,以3D7型为主导型(83%),FC27型为次要型,混合感染率为17%.结论海南省恶性疟原虫的MSP1存在MAD20型和K1型两种等位基因型,以MAD20型为优势虫株;其MSP2存在3D7型和FC27型两种等位基因型,以3D7等位基因家族为主.
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间日疟原虫MSP1 C重组蛋白的制备及其在血清学诊断中的应用
目的在大肠埃希菌(E.coli)中表达、纯化间日疟原虫裂殖子表面蛋1 C端重组蛋白(rGST-PvMSP1C)作为诊断抗原,评价其在间日疟血清学诊断中的应用价值. 方法将含有重组质粒pGEX-4T-2/PvMSP1C的工程菌E.coli BL21(DE3) 以IPTG进行诱导表达,表达产物以SDS-PAGE与Western-blot免疫印迹进行鉴定;采用GST融合蛋白层析柱进行分离纯化;以纯化重组蛋白包被酶标板,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测间日疟患者血清中的特异性IgG抗体. 结果含有重组质粒pGEX-4T-2/PvMSP1C工程菌经IPTG诱导表达的rGST-PvMSP1C重组蛋白大小约63ku,能够被间日疟患者的血清所识别.纯化的重组蛋白SDS-PAGE电泳显示一条预期大小的蛋白条带;以重组蛋白作诊断抗原,67份镜检阳性的间日患者血清标本ELISA均为阳性,55份健康人血清ELISA均为阴性,5份恶性疟患者血清及7份血吸虫患者血清检测结果亦为阴性. 结论在大肠埃希菌中表达纯化的间日疟原虫rGST-PvMSP1C蛋白具有免疫反应性,以其作为诊断抗原建立的血清中特异性IgG抗体ELISA检测方法具有良好敏感性和特异性,在间日疟的免疫学诊断中具有一定的推广使用价值.
