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海南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白2基因的分型研究及序列分析
目的对恶性疟原虫海南株的MSP2基因进行分型和多态性分析. 方法采用套式PCR法特异扩增MSP2基因的中间可变区(第3区),对41株恶性疟原虫分离株进行基因分型,并对部分目的基因片段进行直接测序. 结果 41份血样中有39份共扩增得到55个目的基因片段,以3D7型为主(28份血样,36个基因片段),两种等位基因家族混合感染的情况极少见.序列分析结果表明,海南省恶性疟原虫虫株的MSP2中间重复序列区变异程度大. 结论海南省恶性疟原虫的MSP2以3D7等位基因家族为主,且存在显著的多态性.
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赤道几内亚比奥科岛恶性疟原虫MSP-1和MSP-2基因多态性研究
目的 研究赤道几内亚比奥科岛(Bioko Island)恶性疟原虫分离株裂殖子表面蛋白1(PfMSP-1)基因和裂殖子表面蛋白2(PfMSP-2)基因分型.方法 从比奥科岛采集疟疾患者血样181份,用显微镜法和荧光定量PCR鉴定虫种.采用巢式PCR分别扩增PfMSP-1和PfMSP-2中具有型特异性的片段,进行等位基因分型.结果 PfMSP-1基因分型:181份恶性疟患者血样中有178份扩增出PfMSP-1基因片段(98.34％),其中K1、MAD20和RO33基因型片段分别为171份(94.48％)、175份(96.69％)和126份(69.61％).混合感染率为97.24％;PfMSP-2基因分型:181份血样中有173份PfMSP-2基因片段(95.58％),其中48份(26.52％)单独扩增到3D7型基因片段,4份(2.21％)单独扩增到FC27型基因片段,混合感染率为66.85％.结论 赤道几内亚比奥科岛PfMSP-1和PfMSP-2等位基因型分布范围极广.混合感染是比奥科岛疟疾的主要类型.
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中缅边境恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1,2基因多态性研究
目的 对云南省及边境地区恶性疟原虫的裂殖子表面蛋白(merozoite surface protein,MSP)1,2基因进行分型研究,确定其等位基因的类型和分布特征,结合当地的恶性疟原虫株流行病学信息,为该地区疟疾的防治提供科学依据. 方法 从缅甸拉咱、那威和我国云南省西双版纳勐腊、德宏瑞丽、保山腾冲采集恶性疟患者血样.用巢式PCR (nest-PCR)扩增18S rRNA基因,确定感染疟原虫的种类.对检测为恶性疟原虫以及恶性疟原虫/间日疟原虫混合感染的样本,进行恶性疟原虫MSP-1、MSP-2基因的扩增并作测序、验证与序列分析. 结果 共采集89份恶性疟样本,经18S rRNA基因检测,确定间日疟9例,恶性疟78例和混合感染2例.在检测为恶性疟和混合感染的80份样本中,69例扩增出MSP-1基因片段,77例扩增出MSP-2基因片段.在MSP-1等位基因中,以MAD20型68.75％为主,RO33型23.75％和K1型20.00％次之.来源于勐腊的样本均未检出RO33型和K1型;MSP-2等位基因FC27型和3D7型的感染率均为91.25％,无明显的优势虫株;MSP-1和MSP-2基因多克隆样本所占百分比与多重性感染(multiplicity of infection,MOI)分别为22.50％、1.81和86.25％、3.51.MSP-1和MSP-2等位基因目的片段多样性与其原虫密度之间存在相关性(Spearman's r=0.496,P＜0.05;Spearman's r=0.240,P＜0.05).MSP-1和MSP-2等位基因测序结果表明,在FC27型基因序列3'端发现1个新的APK序列,在3D7基因型序列中检测到1个新的PAT重复序列和其它19个新的序列. 结论 云南省及边境地区恶性疟原虫分离株MSP-1等位基因存在MAD20型、K1型和RO33型3种类型,以MAD20型为优势虫株,勐腊样本未发现K1型和RO33型;MSP-2等位基因存在FC27型和3D7型2种类型,其优势均不明显.
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武汉市输入性恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1、2基因分型研究
目的 了解武汉市输入性恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)裂殖子表面蛋白1(merozoite surface protein 1,MSP1)和MSP2的等位基因型特征. 方法 于2010-2015年采集武汉市从非洲疟疾流行区回国人员中恶性疟现症患者血样,收集患者流行病学资料.提取患者血样中的恶性疟原虫DNA,采用巢式PCR分别扩增恶性疟原虫MSP1、MSP2基因型特异性片段,分析各等位基因型的构成比和不同感染来源地患者的基因型频数分布,分析重症患者不同基因型的相关性.不同基因型的重症患者比例差异采用x2检验. 结果 共采集输入性恶性疟患者血样175份,其中轻度症状患者血样137份,重症患者血样38份.巢式PCR结果显示,MSP1等位基因K1、RO33、MAD20型分别扩增出260～390、270和150 bp目的条带;MSP2等位基因3D7、FC27型分别扩增出200～330、330～500 bp目的条带.MSP1和MSP2基因均未检出的有9份.检出MSP1等位基因136份,检出率为77.7％,等位基因MAD20、K1、RO33、MAD20+ K1、MAD20+ RO33、K1+RO33、MAD20+ K1+RO33型的构成比分别为5.1％ (7/136)、37.5％ (51/136)、20.6％ (28/136)、5.9％ (8/136)、4.4％ (6/136)、16.9％ (23/136)、9.5％ (13/136).检出MSP2等位基因143份,检出率为81.7％,FC27、3D7和FC27+3D7型的构成比为20.2％(29/143)、39.9％ (57/143)、39.9％ (57/143).MAD20型和K1以南非多,分别占10.5％ (4/38)和34.2％ (13/38);RO33型以东非多,占2/7;FC27型东非和北非均未检出,南非占比高,为18.4％ (7/38);3D7型以东非多,占4/7.MSP1基因MAD20、K1、RO33、MAD20+ K1、MAD20+ RO33、K1+RO33、MAD20+ K1+RO33型的重症患者分别占1/7、19.6％ (10/51)、32.1％ (9/28)、1/8、4/6、13.0％ (3/23)、46.2％ (6/13),MAD20+ RO33、MAD20+K1+ RO33和RO33 (P＞ 0.05),与其他4种基因型间差异有统计学意义(P＜0.05).MSP2基因3D7、FC27、FC27+3D7型的重症患者比例分别为19.3％ (11/57)、20.7％ (6/29)、24.6％ (14/57),各基因型间差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 武汉市输入性恶性疟原虫MSP1存在MAD20、Kl和R033等3种单基因型以及4种多基因型,以K1型和R033型为优势基因型;MSP2存在FC27、3D7和FC27+ 3D7型,3D7型的比例大于FC27型.
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云南和海南两省不同地区恶性疟原虫裂殖子表面蛋白2基因型的研究
目的分析云南和海南两省恶性疟原虫的基因型及其分布.方法采用套式PCR法特异扩增MSP2基因中间多态区,对恶性疟原虫群体进行基因分型.结果检测云南省31例和海南省29例恶性疟原虫患者血清,其中分别有14和18种不同的MSP2等位基因型,其等位基因株存在高度的多态性,基因片段大小及分布频率具有地区差异.海南省不同等位基因型虫株混合感染及多重感染现象比云南省严重.结论云南和海南两省恶性疟原虫分离株MSP2基因型组成具有明显差异.
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恶性疟原虫海南分离株(FCC1／HN)裂殖子表面蛋白2(MSA2)真核表达载体的构建
目的 构建恶性疟原虫海南分离株(RCC1/HN)裂殖子表面蛋白MSA2的真核表达质粒pcDNA3/MSA2，为疟疾核酸疫苗及蛋白疫苗的研制奠定基础。方法 采用PCR技术对F℃C1／HN基因组DNA MSA2基因进行扩增，扩增产物经纯化后用BamHI和EcoRI双酶切，然后定向克隆入真核表达质粒pcDNA3，连接产物转化大肠杆菌TG1，再用相同的内切酶酶切和PCR扩增对重组子进行鉴定。结果 筛选出的重组子为编码FCC1/HC MSA2基因片段的重组质粒pcDNA/3MSA2。结论 编码FCC1/HN MSA2基因片段真核表达质粒pcDNA3/MSA2的构建，为疟疾核酸疫苗及蛋白疫苗的研制奠定基础。
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套式PCR用于海南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1和2的分型研究
目的了解海南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1(pfMSP1) 和表面蛋白2(pfMSP2)等位基因型的分型特征.方法采用套式PCR法分别扩增pfMSP1基因第2区与第3区部分片段和pfMSP2基因的中间可变区(第3区),对海南省恶性疟原虫分离株进行基因分型. 结果 55份血样中有52份恶性疟疾患者扩增出pfMSP1基因片段,以MAD20型为主导型(84.6%),K1型为次要型,未检出RO33型, 两种不同等位基因混合感染率为15.4%.同时,55份血样中有53份恶性疟疾患者扩增出pfMS P2基因片段,以3D7型为主导型(83%),FC27型为次要型,混合感染率为17%.结论海南省恶性疟原虫的MSP1存在MAD20型和K1型两种等位基因型,以MAD20型为优势虫株;其MSP2存在3D7型和FC27型两种等位基因型,以3D7等位基因家族为主.
