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DNA微点阵分析丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B对信号传导相关基因表达的影响
目的采用DNA微点阵(DNA microarray)技术检测致癌相关基因的表达水平,研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)非结构蛋白NS4B在HCV致癌中的作用. 方法通过建立稳定表达NS4B的细胞系,用微点阵技术研究NS4B 对细胞基因表达的影响,实时定量RT-PCR分析微点阵结果中的两个上调基因(DKK1,FYN)和两个下调基因(AKR1C1,v-fos)的表达,对细胞中AKR1C1的活性进行酶学分析. 结果在2 308个信号途径相关的基因中,34个基因表达上调,56个基因表达下调.在表达有明显差异的基因中,大部分原癌基因表达上调,而大部分抑癌基因的表达下调;一些基因与细胞压力有关.实时定量RT-PCR和AKR1C1的酶学分析进一步证实了DNA微点阵的结果. 结论 HCV-NS4B在HCV的致癌过程中起一定作用.
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分子靶药物的新发现
肿瘤是由基因异常引起的:包括癌基因激活和抑癌基因的功能失活,直接纠正这些异常是肿瘤治疗的关键.然而,我们还没有发展出任何有效适合这些基因组的技术.分子生物学研究分析论证了异常基因产物、激活的信号转导途径和肿瘤特异的细胞表面抗原在肿瘤中的作用.分子靶药物被用于在mRNA和蛋白水平抑制肿瘤的发展,一些靶药物甚至在主细胞内对肿瘤进行控制.与传统的化疗药物相比,分子靶药物对肿瘤具有很高的特异性和稳定性.这些药物的作用取决于其相应靶位点的功能,而对药物的疗效预测需要依靠合适的分子生物学技术比如DNA微点阵技术.
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软肝冲剂抑制血管紧张素Ⅱ诱导的肝星状细胞上调基因的表达
目的:旨在研究软肝冲剂是否通过抑制血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ) 诱导的肝星状细胞(HSCs)上调基因起作用.方法:用DNA微点阵分析用AngⅡ(10-8M)以及AngⅡ和软肝冲剂(2.5mg/L)处理的HSCs与对照组之间基因的差异性表达,其结果用实时定量RT-PCR证实.用Western blot 分析软肝冲剂对HSCs在AngⅡ诱导下的胶原蛋白的表达,ELISA分析有生物活性的TGF-β1的含量.结果:软肝冲剂能抑制AngⅡ诱导HSCs上调基因的表达,特别是一些细胞外基质和细胞因子如IL-13,IL-15,MCP-2,TGF-1,TGF-2,细胞因子受体基因,如TGF-1受体.分泌到细胞培养基中的胶原蛋白和有生物活性的TGF-β1也被抑制.结论:软肝冲剂抑制AngⅡ诱导HSCs上调的基因的表达,这可能是软肝冲剂治疗肝纤维化和肝硬化的机制之一.
