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糜蛋白酶基因文献资料
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蚊抗药性相关糜蛋白酶基因稳定转染细胞系的建立与表达鉴定
目的建立抗药性相关糜蛋白酶基因稳定转染细胞系. 方法采用PCR方法,以淡色库蚊抗药性品系cDNA文库为模板,扩增出抗药性品系高表达的糜蛋白酶基因编码区;经T/A克隆测序鉴定后,亚克隆到真核表达载体pIE1-3,构建重组昆虫细胞表达载体pIE1-3/chy,经酶切和PCR鉴定后,与带有筛选标记的pIE1-neo质粒共转染蚊细胞C6/36,通过G418选择培养,建立转染细胞系;用RT-PCR、Western blotting鉴定糜蛋白酶基因的转录表达. 结果成功构建了真核表达载体pIE1-3/chy,证明糜蛋白酶基因已转入C6/36细胞,建立了稳定转染细胞系,表达产物分子质量单位约30 ku,与理论值相符. 结论稳定转染细胞系的建立和基因表达为进一步研究糜蛋白酶基因与抗药性的关系奠定了基础.
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抗药性相关糜蛋白酶基因真核表达载体的构建和鉴定
目的:构建抗药性相关基因真核表达载体.方法:采用PCR方法,以淡色库蚊抗药性品系cDNA文库为模板,扩增出抗药性品系中高表达糜蛋白酶(chymotrypsin)基因,经T/A克隆测序鉴定后,扩增、纯化质粒,经双酶切后纯化目的片段,克隆到真核荧光表达载体pEGFP-C3中.结果:PCR和酶切鉴定表明,构建成功真核荧光表达载体pEGFP-C3/chymotrypsin.结论:PCR加双酶切鉴定的方法构建表达质粒,迅速省时,结果可靠.
