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EPEC粘附素IntiminC280抗血清的制备及其中和能力测定
目的 制备EPEC粘附素IntiminC280抗血清,检测其中和EPEC对Hep-2细胞粘附作用.方法 用基因克隆技术构建IntiminC280表达载体pET32 (α)-intiminC280,转化表达宿主菌BL21,用IPTG诱导His-IntiminC280融合蛋白的表达,SDS-PAGE分析其表达形式;用NI柱亲和层析法纯化融合蛋白,并辅以佐剂免疫家兔,4次免疫后采血,分离血清,对流免疫电泳法检测抗血清效价;以该抗血清作为一抗,采用Western blot检测EPEC粘附素Intimin的表达;用不同稀释度的抗血清中和EPEC,显微镜下观察细菌被中和后对Hep-2细胞的粘附情况.结果 成功构建BL21/pET32 (α)-intiminC280原核表达系统,表达蛋白的分子质量单位为50 ku,与预期相符.用纯化的His-IntiminC280免疫家兔获得高效价抗血清,16倍稀释后仍能有效抑制EPEC对Hep-2细胞的粘附.结论 IntiminC280抗血清具有抑制是EPEC粘附Hep-2细胞作用,可作为EPEC疫苗研发的备选抗原.
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肠致病性大肠埃希菌eae基因及编码蛋白紧密素
肠致病性大肠埃希菌是引起婴儿腹泻的一类重要病原菌，主要病理学变化是引起肠黏膜A／E损伤。cae基因编码的紧密素是引起A／E损伤的主要毒力因子。本文主要是对eae基因和紧密素的分子结构、作用及其表达调控进行综述。
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通用引物检测志贺毒素和紧密素多个基因亚型
目的 旨在建立同时检测stx2和intimin两个基因多个变型的双重PCR快速检测技术,更好满足实验室和临床检测的需求.方法 以stx2主要的6个亚型和intimin主要的27个基因亚型为靶序列,设计引物,建立双重PCR方法,分析其敏感性、特异性,并检测模拟制备的阳性样品.结果 stx2-intimin双重PCR扩增片段分别为388 bp和609 bp,检测大肠杆菌纯培养物低限介于10～100 CFU/mL,增菌样品低检测限介于1～10 CFU/g,特异性检测intimin和stx2的多个亚型.结论 Stx2-Intimin二重PCR技术灵敏、特异、通用和高效.
