首页 > 文献资料
-
恶性疟原虫PfRNaseⅡ的克隆表达与降解特性的初步分析
目的 利用原核表达系统诱导表达恶性疟原虫融合蛋白pGEX-PfRNaseⅡ,并分析其RNA降解特性. 方法 分析并选取恶性疟原虫3D7株PfRNaseⅡ的活性区,以cDNA为模板PCR扩增目的片段.将目的片段插入到pGEX-4T-1表达载体中,构建pGEX-4T-1-PfRNaseⅡ重组表达质粒,转化至大肠埃希菌BL21-CodonPlus(DE3),利用IPTG诱导表达目的蛋白pGEX-PfRNaseⅡ.应用Glutathione-SepharoseTM 4B树脂纯化目的蛋白.并用pGEX-PfR-NaseⅡ体外分析PfRNaseⅡ的RNA降解特性. 结果 经PCR、双酶切、测序鉴定,pGEX-4T-1-PfRNaseⅡ重组表达质粒构建正确,转化DE3后在IPTG的作用下表达目的蛋白.纯化的目的蛋白pGEX-PfRNaseⅡ在体外可降解单链RNA,但不能降解双链RNA.pGEX-PfRNaseⅡ在低浓度的Mg2+条件下降解活性较强,高浓度Mg2+条件下活性受到抑制,在5 mmol/L EDTA存在下活性降低. 结论 克隆表达的pGEX-PfRNaseⅡ重组蛋白能水解单链RNA,且该水解活性具有二价金属离子依赖性.
-
通过促进poly A和PABP蛋白结合抑制mRNA降解:小檗碱作用的新机制
小檗碱(BBR)是一种天然小分子药物,具有多种药理活性,作用于多个靶点.我们在之前的研究中发现,小檗碱具有稳定mRNA、避免其降解的活性,并初步证实这与它和mRNA 3'端polyA尾部的结合有关,然而其具体机制尚不清楚.本文首次报道了相关的机制研究.研究结果表明,小檗碱结合于poly A、避免mRNA降解的这一过程需要PABP(poly A结合蛋白)参与.利用RNA-EMSA(RNA凝胶电泳迁移)、RIP(RNA免疫共沉淀)和荧光光谱等多项技术证明了小檗碱能够促进PABP与poly A的结合,从而增强mRNA的稳定性.此外利用二维核磁共振技术揭示BBR与AMP结合的特异性.本文结论是小檗碱促进蛋白表达的机制与其作用于polyA、稳定mRNA,从而促进蛋白翻译、上调蛋白表达相关.
-
LPS炎性刺激对SAF基因编码区外显子e4B保留和剪切的影响
目的 探讨LPS刺激对血清淀粉样蛋白A转录激活因子 (SAF) 外显子e4B保留和剪切的影响.方法 LPS刺激不同时间THP-1细胞和去除刺激后放线菌素D处理THP-1细胞的cDNA作模板进行半定量和定量聚合酶链式反应.结果 LPS刺激2h SAF基因外显子e4B保留的转录子表达下降、e4B剪切的转录子表达增高, 延长刺激至24h, 二者的表达呈下降趋势.LPS刺激12h和24h后去除刺激给予放线菌素D初始, 上述转录子表达增高;延长放线菌素D作用至2h, 二者表达下降.结论 延长LPS刺激SAF基因外显子e4B保留和剪切的转录子表达下降可能和RNA降解有关.
关键词： 血清淀粉样蛋白A转录激活因子 外显子e4B RNA降解 LPS THP-1细胞 -
血浆丙型肝炎病毒核酸稳定性的研究
目的:建立血浆丙型病毒性肝炎病毒(HCV)核酸的稳定保存方法,提高荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测的准确性.方法:HCV混合血浆以TRIZOL提取病毒核酸,分别保存于70%乙醇溶液及溶解于焦碳酸二乙酯(DEPC)水中,在4℃放置不同时间后,以FQ-PCR检测HCV RNA拷贝数.HCV RNA冻干质控品溶解于DEPC水并提取核酸后同时测定作为对照.另外,对保存的HCV RNA稀释后作线性分析.结果:未提取核酸的病毒血浆及70%乙醇溶液中的HCV RNA在4℃保存8 d后,病毒核酸拷贝数无明显改变.HCV RNA DEPC水溶液在4℃放置30 min后即发现拷贝数降低,5 h后下降为零.质控品测定值无明显降低.在70%乙醇溶液中保存的HCV RNA稀释后测定值具有线性(r=0.999 1).结论:病毒在血浆及70%乙醇溶液中保存,其核酸可以在4℃稳定保存至少8 d并具有良好的线性.病毒核酸DEPC水溶液在4℃易发生降解.
关键词： 丙型肝炎病毒 RNA降解 荧光定量聚合酶链反应 -
RNA干扰及其干扰技术
目前在哺乳动物中使用RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术对细胞基因的靶向性有效抑制已经慢慢被人们所认识.当导入一段大于19个碱基对的双链RNA(dsRNA)入细胞中不仅可以导致导入的目的dsRNA降解,而且可以引起细胞内的与之同源的单链RNA(ssRNAs),即mRNA共同降解.这是细胞本身的固有的现象.基于以上这些因素,RNAi技术不仅可作为研究功能基因的强大武器,并且可以抑制致病基因的表达并作为一种潜在的治疗方式用于疾病的治疗.
-
现场生物斑迹遗留时间推断研究进展
就现场提取的生物检材而言,我们除了需要准确获得DNA STR分型进行个体识别和亲子鉴定,还希望能够通过技术手段获知其遗留时间、空间定位等更多信息.本文以血迹为主要研究对象,就国内外采用光学、细胞生物学、分子生物学等方法推断生物斑迹遗留时间进行总结,并对法医微生物学这一法庭科学新领域在时空线索推断中的应用做以介绍,为现场生物斑迹遗留时间推断研究提供参考.
