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脱玻璃化文献资料
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保护液的玻璃化状态对红细胞冷冻干燥保存后回收率的影响
为了研究保护液的玻璃化状态对红细胞冷冻干燥(简称冻干)保存后回收率的影响,采用含有7%二甲亚砜(v/v)和20%、30%、40%或50%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)(w/v)的缓冲液作为保护液进行保护液的玻璃化测试和红细胞的冻干保存实验.首先检测溶液的玻璃化状态,如果冷冻和解冻过程中任一过程出现白色冰晶即为非玻璃化溶液;再将浓集红细胞和不同的保护液按比例混匀,预冻后移入冻干机内进行冻干处理;冻干完毕后,快速水化样品,测定红细胞回收率、血红蛋白回收率和上清游离血红蛋白浓度,然后对冻干后红细胞形态进行电镜观察.结果表明:20%PVP+7%DMSO和30%PVP+7% DMSO在冷冻和解冻过程中都出现白色冰晶;40%PVP+7%DMSO在冷冻过程中无冰晶出现,但在解冻过程中出现冰晶;而50%PVP+7%DMSO在冷冻和解冻过程中均无冰晶出现.冻干红细胞再水化后,40%PVP+7%DMSO的细胞回收率和血红蛋白回收率分别为(81.36±14.94)%和(77.54±12.86)%,显著高于其它3组(P＜0.01);另外40%PVP+7%DMSO的上清游离血红蛋白浓度也显著低于其它3组(P＜0.01).研究表明:随着溶液中PVP浓度的升高,溶液的玻璃化程度也随之增加,同时冻干-再水化后红细胞的各项指标也随之改善,当溶液中PVP浓度为40%时,达佳效果;但当进一步提高PVP浓度至50%时,溶液为玻璃化溶液,但结果反而不佳.结论:保护液的玻璃化程度对红细胞冻干保存的影响是双向的,玻璃化程度的过度加深反而不利于红细胞的冻干保存.
