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2例类孟买表型的分子机理研究
本研究探讨2例类孟买血型表型的分子机理.先证者样本通过血清学方法鉴定为类孟买血型,采用PCR扩增先证者的FUT1和FUT2基因编码区序列,并对PCR产物进行直接测序分析.同时FUT1基因PCR产物经TOPO TA转染克隆到质粒上分离后,对其进行测序分析,以证实突变在染色体上的位置.结果表明:直接测序发现2例先证者FUT1基因第547-552位AG两碱基缺失杂合(CAGAGAG→CAGAG)和第658位C→T杂合.克隆后证实一条染色体上FUT1基因第547-552位中的两碱基AG缺失,可导致阅读框架发生移码,提前形成终止密码;另一条染色体上FUT1基因第658位C→T错义突变,导致第220位精氨酸(Arg)→半胱氨酸(Cys).2例先证者FUT2基因均为357C→T同义突变.结论:2例先证者FUT1基因突变为不同染色体的复合性突变,均为h1h3.
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3例类孟买血型的分子遗传机制研究
目的:探讨类孟买血型个体的分子遗传机制.方法:采用常规血清学方法对先证者及其家系成员血液标本进行血型鉴定,对唾液标本进行ABH血型物质的检测;利用PCR扩增3例先证者及家系成员的FUT1基因编码区和ABO血型基因第6、7外显子编码区,对PCR产物进行基因分型和FUT1基因直接测序.结果:3例先证者均为类孟买血型.直接测序结果显示,先证者1的FUT1基因为第328位碱基G/A杂合突变、第547位碱基AG缺失突变的杂合型,FUT1基因分型为h1hnew2杂合;其父亲为单链第547位碱基AG缺失,其母亲为单链328位碱基G/A杂合突变,两者均不是类孟买血型;先证者2和3的FUT1基因为第547位碱基AG缺失突变,第880TT缺失突变的杂合型,FUT1基因分型为h1h2杂合;结论:通过分子生物学技术可以检测FUT1基因不同位点双碱基的缺失杂合和单链缺失突变杂合,进而探讨类孟买血型的分子遗传机制.
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一例类孟买型表型的分子机理研究
为了研究1例类孟买型的分子机理,在血清学方法初步鉴定先证者为A类孟买型的基础上,用PCR扩增先证者ABO基因第6、7外显子、FUT1基因(H)和FUT2基因(Se)的编码区序列,PCR产物经割胶纯化后直接测序分析,并应用PCR-SSP和基因扫描方法证实测序所发现的突变.FUT1基因突变通过克隆到质粒载体后测序分析.结果表明:直接测序发现先证者ABO血型基因型为A102A102,FUT1基因第682位A→G错义突变、第547-552位两碱基AG缺失(CAGAGAG→CAGAG)突变.克隆证实1条染色体上FUT1基因为A682G突变,导致M228V氨基酸突变;另一条染色体上第547-552位两碱基AG缺失,导致阅读框架发生移码,提前形成终止密码.FUT2基因为分泌基因Se357和弱分泌基因Se357,385杂合(第357位为T/T纯合,385位为A/T杂合).结论:FUT1基因A682G和547-552 delAG双杂合突变是引起该例先证者表现为类孟买型的分子机理,A682G是一个新的引起类孟买型的FUT1基因突变.
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一例Ah-分泌型个体的分子生物学背景的分析
目的 研究Ah-分泌型个体的分子基础.方法 经血型血清学方法鉴定红细胞上H抗原缺失、但存在弱A抗原的Ah-分泌型个体,用PCR-SSP法鉴定ABO基因型,对FU-T1和FU-T2编码区域进行扩增,并对扩增产物直接测序,FU-T1进一步做克隆测序分析.结果 血清学结果显示该个体红细胞不凝集抗H血清,但与抗A定型血清呈弱凝集,Lewis血型表现型为Le(a-b+),唾液中有A、H物质,ABO基因型为A102B02;FU-T1基因型为h35h328,h35等位基因(nt35CT),使12位(Ala)丙氨酸被(Val)缬氨酸置换;h328等位基因(nt328GA),导致110位Ala(丙氨酸)被Thr(苏氨酸)置换;FU-T2基因为正常野生型Se357Se357.结论 两个错义突变C35T、G328A可能是引起该例Ah-分泌型H抗原缺失、但存在A抗原的弱表达的原因.
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类孟买型Ahm分泌型的血型鉴定及输血
目的：血清学和分子生物学鉴定类孟买型Ahm分泌型，为患者准备手术用血。方法应用常规血清学方法检测患者红细胞抗原及血清中的抗体，吸收放散试验鉴定红细胞上弱表达的ABO抗原，测定唾液中的血型物质，进行分子生物学测序分析。结果患者血型为罕见的类孟买型Ahm分泌型，血清中有抗-H抗体。结论鉴定出罕见类孟买型，血清中含有抗-H，其FUT1基因为第547~552位AG两碱基缺失的纯合态，为常见单体型。
关键词： 类孟买型Ahm分泌型 抗-H FUT1基因 -
类孟买血型的血清学特征及采血前后血液常规指标的观察
目的 对2例类孟买血型个体进行血清学鉴定、基因测序以及观察自体采血前后血液常规主要指标的变化.方法 采用血清学方法检测ABO血型、H抗原,采用PCR技术扩增α-1,2-岩藻糖基转移酶(FUT1)基因编码区序列并进行测序分析;采用血液分析仪检测血液常规主要指标.结果 2例类孟买血型个体确定为Bmh,直接测序其FUT1基因编码区序列:个体1:第547位～第552位A、G2个碱基缺失纯合(CAGAGAG→CAGAG)和第814位A/G杂合;个体2:第547位～第552位A、G2个碱基缺失纯合(CAGAGAG→CAGAG);个体1、2自体采血前后血常规主要指标无明显变化.结论 在类孟买血型个体中首次发现FUT1 547～ 552 delAG和814A＞G复合突变;类孟买血型作为受血者,输血时好采用自体血液输注.
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10例类孟买表型α1,2岩藻糖基转移酶基因序列分析
目的:分析10例类孟买血型表型的α1,2岩藻糖基转移酶基因序列情况.方法:ABO、H抗原检测采用血清学方法.利用PCR技术扩增FUT1编码区序列,PCR产物双酶切后直接测序分析.杂合子突变标本采用TOPO TA技术分离得到单链.结果:类孟买血型表型红细胞缺乏H抗原,与抗H试剂不凝集.10例标本直接测定FUT1基因编码区序列,3例为第547-552位AG两碱基缺失(CAGAGAG→CAGAG)纯合子,其它7例为有不同突变点的杂合子.单体型分析显示存在235C、293T、547-552delAG、658T、35T+682G、880-882delTT等6种单体型.结论:类孟买血型存在多种分子遗传机制,常见单体型为547-552delAG.
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H抗原阴性者血型血清学特点和基因测序结果研究
H抗原是A、B抗原的前身物质,其缺乏影响了A、B抗原的形成,直接导致其血清学表现为O型,如输了O型血液,若患者血清中有抗-H,有发生溶血性输血反应的可能,应引起各科医师的高度关注.现将笔者收集的4例H抗原阴性者血型血清学特点和基因测序结果报告如下.
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类孟买血型的家系鉴定1例
无偿献血者,女,20岁,汉族,第一次献血,在用Metis200全自动血型仪做血型鉴定时发现正反定型结果不一致,血清学初步判定为类孟买型,送上海市血液中心血型参比室做基因测序,现将结果报告如下.
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氯化高铁血红素诱导K562细胞红系定向分化细胞模型的构建
目的 研究氯化高铁血红素(Hemin)诱导K562细胞红系定向分化的效果及血红蛋白含量、FUT1基因表达变化,构建K562细胞红系定向分化模型.方法 50μmol/L Hemin作用于K562细胞1～7d,测联苯胺染色阳性率,RT-PCR法检测FUT1基因mRNA表达量变化;5～7 d分为持续诱导组和无诱导组,以Hemin诱导前1d、0h为对照组,检测两组联苯胺染色阳性率及FUT1基因mRNA表达量变化.结果 Hemin持续诱导K562细胞第1～7天,联苯胺染色阳性率在4d达高峰,后逐步下降;3、4、5d联苯胺染色阳性率之间比较差异无统计学意义(F=28.55,P＞0.05).5～7d持续诱导、无诱导两组间比较,联苯胺染色阳性率差异有统计学意义(F=22.001,P＜0.05).Hemin诱导1～7d的FUT1 mRNA相对表达量分别为对照组的0.667±0.004、0.616±0.006、0.615±0.029、1.138±0.049、0.66±0.002、0.752±0.029、0.674±0.014倍.结论 Hemin可诱导K562细胞红系定向分化,K562细胞经Hemin诱导第4天联苯胺染色阳性率、FUT1基因mRNA表达量高.选择诱导3d的K562细胞为模型,持续Hemin诱导,进行人工干预FUT1基因表达的研究,为ABO血型不合移植适应性调节研究奠定实验基础.
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FUT1基因突变个体的表型及分子遗传学研究
目的 研究FUT1基因突变的分子生物学基础.方法 通过常规血清学方法和基因分型方法检测先证者及其家系成员的红细胞血型,用PCR方法扩增FUT1基因并测序,测序结果与参考序列(GeneBank:Z69587)比对分析.结果 测序结果显示,先证者为FUT1基因C658T纯合突变,先证者的父母、姐姐和儿子为杂合突变,妻子和妹妹无突变.结论 FUT1基因C658T突变是导致H抗原缺失的原因之一.
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贵阳市1例稀有血型类孟买Bmh的检测分析
人类ABO血型的A抗原和B抗原都是由前体物质 H抗原转换而成的，绝大部分人群都有 H抗原，但类孟买血型却部分或完全缺失，仅有的少量 H抗原终转换成A抗原或B抗原，从而在血清中产生相应的抗‐A、抗‐B和抗‐H抗体。类孟买血型给实验室ABO定型和交叉配血带来困难，本例标本就是因医院输血科在ABO血型定型时出现正反不符，且用多袋O型洗涤红细胞与其配血，主侧均发生凝集，遂送贵州省中心血型室检测。经血型血清学和分子生物学检测，证实为类孟买血型Bmh ，现报道如下。
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一个类孟买血型家系的α1,2岩藻糖基转移酶基因突变分析
目的 研究1个中国人类孟买型血型家系的分子遗传背景.方法 以血型血清学方法鉴定先证者及其家系的红细胞ABO和H表型,应用聚合酶链反应扩增类孟买表型家系的ABO基因第6、7外显子和α1,2岩藻糖基转移酶基因(α-1,2-fucosyltransferase,FUT1)编码区,PCR产物直接测序分析,并通过克隆测序法对存在FUT1基因复合杂合的样本进行单倍体序列分析.结果 通过血清学技术在9个家系成员中鉴定了3个类孟买型,直接测序发现先证者FUT1基因存在35C/T、235G/C和682A/G复合杂合.单倍体序列分析表明先证者的FUT1基因型为h235c/h35T+628G.其中h235C等位基因引起α1,2岩藻糖基转移酶G79R替换,h35+628G等位基因引起α1,2岩藻糖基转移酶A12V和M228V替换.结论 在中国人群中发现一种新的类孟买表型相关的FUT1基因突变235G>C.
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中国人副孟买型的FUT1和FUT2基因的分子遗传研究:一个新的FUT1等位基因的鉴定
目的 在7例由血清学方法确定为副孟买表型的中国人个体中,进行了分子生物学分析.方法 采用聚合酶链反应和DNA直接测序、克隆测序等方法,检测7例标本的FUT1和FUT2基因的核苷酸序列组成,并对一个新的非功能性FUT1等位基因进行家系调查.结果 7例标本的FUT1基因型分别为h1h1(4例),h2h2(2例),h328 hnew(1例),h1等位基因在547～552位缺失1个AG,使得氨基酸序列发生182框码移位;h2等位基因在880～882位缺失两个T,使得氨基酸序列发生294框码移位;h328等位基因(nt328G＞A)导致110位丙氨酸(Ala)被苏氨酸(Thr)置换;除hnew以外,h1、h2、h328这3种等位基因以前都有报道,hnew以杂合子形式存在于标本7中,经克隆测序发现该新基因在nt360-400位缺失GGTATTCCGCATCACCCTGCCCGTGCTGGCCCC,共33个碱基,家系调查证明hnew来自其母亲.7例标本的FUT2基因型分别为,3例为正常野生型Se357 Se357,3例标本为Se357 Se357,358,1例标本为Se357,716Se357,716,已知Se357(nt357C＞T)和Se716(nt716G＞A)为功能性的FUT2等位基因,Se385(nt385A＞T)为弱功能性的FUT2等位基因,7例副孟买表型个体至少带一个拷贝的功能性FUT2等位基因,与其分泌状态一致.结论 发现一个新的非功能性FUT1等位基因,其在nt360-400位缺失33个碱基,引起氨基酸序列框码移位,不能编码有活性的H抗原转移酶.
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中国类孟买血型 FUT1和 FUT2基因研究
目的研究中国类孟买血型的 FUT1和 FUT2基因构成.方法 10个血清学初步分析为类孟买血型的标本来源于不同地区,ABO常规定型,吸收放散试验鉴定其红细胞表面少量A或B抗原,检测唾液中分泌型血型物质,或通过Lewis血型间接了解其分泌状态.聚合酶链反应-限制性片段长度多态方法进行ABO基因分型,并与血清学结果相互验证.对 FUT1(H)和 FUT2(SE)的编码区进行PCR产物直接测序,了解其H及SE位点基因型及核苷酸序列组成.结果血清学和分子生物学两种方法证实10例皆为罕见的类孟买血型.检测到h1 (nt547-552Δag)、h2 (nt880-882Δtt)、h3 (nt658c→t)和h4 (nt35c→t)4个FUT1座位上的隐性基因,同时发现两种新的隐性等位基因:hnew-1(nt586c→t)和hnew-2(nt328g→a).10例中国类孟买个体FUT2位点的研究表明,所有被研究标本的 FUT2基因,都具有nt357c→t的同义突变,其中1例为Seweak等位基因纯合子.结论 H位点的无效等位基因具有较为广泛的遗传多态性.除了已经报道的h等位基因外,在中国类孟买个体中我们检测到两种新的隐性等位基因,并检出1个Sew的类孟买个体及Se基因的一种新的G716A单核苷酸多态性位点.
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h328(nt328G＞A)突变致类孟买血型的血清学及分子生物学分析
目的 对1例类孟买型个体进行血清学方法鉴定,并探讨其分子机制.方法 采用血型血清学方法确定先证者的红细胞血型,用PCR扩增ABO基因第6、7外显子、FUT1和FUT2基因全编码区域,并分别对PCR扩增产物进行测序分析.结果 血清学实验结果表明先证者为类孟买血型Ah-分泌型.测序结果显示ABO基因型为A102/O01;FUT1基因的328位点由G突变为A,导致110位丙氨酸(Ala)被苏氨酸(Thr)置换.结论 FUT1基因编码区nt328(G＞A)错义突变可能是本例类孟买型的分子生物学基础.
关键词： 类孟买血型 FUT1基因 FUT2基因 h328 (nt328G＞A) -
两例类孟买型血型的FUT1基因突变分析
目的 鉴定罕见的类孟买型Bmh和Amh,确定其临床输血对策.方法 通过血清学方法检测ABO血型,应用聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)方法进行ABO基因分型的验证,结合测序技术分析α-1,2-岩藻糖基转移酶基因(α-1,2-fucosyltransferase gene,FUT1)突变的分子遗传机制.结果 发现2例血清学分型罕见的类孟买Bmh和Amh型,1例基因定型为BO1型,带有FUT1基因547-548位AG两碱基缺失(h1h1),另1例基因定型为A205O2型,带有FUT1基因547-548位AG两碱基缺失和FUT1基因658C＞T错义突变(h1h3).结论 FUT1基因547-548位AG两碱基缺失和658C＞T错义突变是产生类孟买血型的分子基础之一.由于类孟买型Bmh和Amh血清中含有抗-HI,在临床输血中应引起高度重视,以避免发生不良输血反应.
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一例类孟买血型的家系分析和分子机制研究
目的 对1例类孟买血型个体及其家系进行表型鉴定和分子机制研究.方法 应用血清学方法检测ABO、H抗原；应用PCR技术扩增FUT1编码区序列.PCR产物经双酶切后进行直接测序分析.结果 先证者红细胞与抗H血清不凝集,血清学鉴定为Bmh.直接测序显示其FUT1基因编码区序列第547-552位A、G两碱基为纯合型缺失(CAGAGAG-CAGAG),第814位为A/G杂合,因此推测其单倍型分别为547 552delAG、547-552 delAG和814A＞G复合突变.先证者母亲、姐姐、妹妹血型均为B型,母亲、姐姐的FUT1基因分别为814A/G杂合和547-552 del/AG杂合,而妹妹为FUT1 547-552 del/AG杂合.先证者的FUT1 547-552 AG缺失和814A＞G复合突变均遗传自母亲.结论 在类孟买血型个体中首次发现FUT1 547-552delAG和814A＞G复合突变.
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H抗原缺乏血型个体FUT1和FUT2基因的序列分析
目的 探讨H抗原缺乏血型个体的FUT1和FUT2基因分型及测序结果.方法 选择2005-2014年深圳血液中心检出的13例H抗原缺乏血型个体为研究对象.采用常规血型血清学红细胞抗原、抗体凝集试验,对研究对象血液样本进行ABO正、反定型,Lewis血型及H抗原的鉴定;其中A或B抗原弱表达的样本,采用吸收及放散试验方法进行进一步抗原特异性鉴定.采用唾液凝集抑制试验,检测研究对象唾液样本中的ABH抗原物质.采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)、DNA直接测序及克隆测序的分子生物学方法,分析研究对象血液样本DNA的FUT1和FUT2基因序列.结果 13例H抗原缺失血型个体中有10例为H抗原缺乏-分泌型血型,2例为H抗原部分缺乏-分泌型血型,1例为H抗原缺乏-非分泌型血型.13例H抗原缺乏血型个体中FUT1基因型分布如下:3例为h547-552delAG/h547-552delAG,4例为h880-882delAG/h547-552delAG,2例为h880-882delTT/h880-882delTT,1例为h328G＞A/h360-400delGGTATTCCGCATCACCCTGCCCGTGCTGGCCCC(共33个碱基),1例为h328G＞A/h880-882delTT,1例为h35C＞ T/h328G＞ A;658C＞T,1例h658C＞T/h658C＞T.13例H抗原缺乏血型个体样本的FUT2基因型分布如下:4例为正常野生型Se357 Se357,7例为Se357 se357,385,1例为Se357,716 Se357,716,1例为se357,385 se357,385.结论 FUT1和FUT2基因的点突变和碱基缺失是H抗原缺乏血型的分子基础.
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类孟买血型基因分析及1种FUT1新无效等位基因的发现
目的 分析类孟买血型基因及H抗原缺乏血型的分子机制,了解FUT1与FUT2基因间的连锁遗传关系.方法 用血清学方法鉴定H抗原缺乏的12名献血者及4名患者的类孟买血型,采用直接测序和克隆测序的方法分析类孟买血型个体的FUT1和FUT2基因.结果 在16名类孟买血型个体者中检出3种已知的FUT1无效等位基因(h1,nt547-552△ag;h2,nt880-882△tt;h3,nt658c→t)和1种新的FUT1无效等位基因(h9,nt424c→t).FUT1基因型分别为h1/h19例,h1/h2 4例,h3/h2、h2/h2及h1/h9各1例.在检出的FUT1无效等位基因中,h1和h2等位基因分别为68.75％(23/32)和21.87％ (7/32).所有FUT2等位基因均存在纯合的nt357c→t同义突变,在具有h2等位基因的个体中,都检出nt716g→a突变(Se357.716);未发现FUT2无效等位基因.结论 发现1种引起H抗原缺乏血型的新FUT1无效等位基因;证实h1和h2为福建地区类孟买血型个体的主要流行基因,支持FUT1和FUT2基因存在连锁遗传的观点.
