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不同保存时间红细胞对三种方法抗-D抗体鉴定结果的影响
为了检测红细胞在不同保存时间抗体鉴定对试验的影响,采用三种不同方法,即木瓜蛋白酶法、博唯优(BioVue)配血卡(柱凝集技术试验法)和戴安娜(DianaGel)配血卡(微柱凝胶试验法),检测7批不同保存时间(0-9个月)的Rh(D)阳性红细胞,用Rh血型抗-D抗体效价进行了比较.结果表明,微柱凝胶试验法较柱凝集技术效价能高出1管,且凝集强度较柱凝集技术好; 保存9个月的红细胞,用微柱凝胶试验法可检测到256; 而木瓜蛋白酶法,保存9个月的红细胞,同样的抗血清效价只能检测到2.结论:微柱凝胶试验法与柱凝集技术试验结果差别不大,木瓜蛋白酶法检测效价低.
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Rh不完全Du型尿毒症长期输注红细胞产生抗-D 1例
慢性病患者发生重度贫血后,有时需输血.输血后一旦产生同种抗体,就可能发生溶血性输血反应,其后果非常严重.现报告罕见的尿毒症患者输注上万毫升血液后,产生Rh抗-D抗体1例.
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RhD阳性血影细胞抗原性及血浆抗-D抗体分离
目的 探讨用不同渗透浓度的磷酸盐缓冲液(PBS)制备的RhD阳性影细胞的抗抗原性及应用该细胞从低效价血浆中分离抗-D抗体的方法.方法 用不同渗透浓度的PBS作为裂解液,将遗传表现型为CCDee的RhD阳性O型红细胞制备成血影细胞,观察其抗原性;以血影细胞为固相抗原,经亲和层析法从抗-D抗体含量为0.814 μg/ml的健康人血浆中分离抗-D抗体,检测相关指标.结果 用pH 7.4、30 mmol/L PBS制备的血影细胞形态完整,保持较强的抗原性;用该细胞血胞成功获得抗-D抗体,回收率达到84.65%,其中IgG单体加二聚体含量为99.3%,不含抗A、抗B血型抗体以及IgA、IgM和血红蛋白(henoglobin,Hb).结论 用pH 7.4、30mmol/L PBS制备的血影细胞可作为固相抗原从低效价血浆中分离纯化抗-D抗体.
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用RhD阳性红细胞从含抗D抗体的IgG中提纯抗D抗体
目的:研究从含抗-D抗体的IgG中纯化抗D 抗体的方法.方法:抗D含量为0.814 μg/ml的健康人血浆,经柱层析法分离获得含抗D的IgG后,用遗传表现型CCDee的RhD阳性"O"型红细胞经亲和层析法从IgG中纯化抗-D抗体.检测相关指标.结果:经过亲和层析法纯化后去除了近90%的非目的IgG,使产物可以进一步浓缩以提高单位体积制剂中抗-D抗体浓度.所得制剂经检测各项指标均符合中国生物制品规程的要求.结论:本方法可从含抗D的IgG制剂中进一步纯化抗D抗体,为血浆综合利用提供参考.
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Rh阴性献血者中检出抗-D1例
某献血者,自愿无偿献血,在吉林省松原市中心血站经初筛体检化验各项均合格.检验科对献血后血样进行检测时,发现-D( IgM/IgG)盐水反应为阴性,检验科血型室对其血样进一步做Rh阴性确证实验.
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Rh阴性患者输血策略
近年来，有关Rh阴性患者的输血问题由于媒体炒作而变得复杂化，不利于临床对患者的生命抢救。政府已对Rh阴性患者的输血颁布了有关法规，以指导临床安全、有效和科学的输血。对于体内无抗-D抗体的Rh阴性患者，在血资源紧急情况下可以输配血相合的Rh阳性血，而对于有抗-D抗体者则应尽量输注Rh阴性血。本文阐述Rh阴性患者安全、有效、科学的输血策略。
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不同pH值和盐浓度对柱色谱提取抗-D抗体的影响
目的探讨不同pH值和盐浓度对离子交换色谱从低效价血浆中提取抗-D抗体的影响及工艺.方法抗-D效价为1∶128的健康人血浆,经DEAE-Sephadex A-50离子交换色谱柱,用不同pH值和浓度的磷酸盐缓冲液(PBS)洗脱,收集未吸附组分,检测相关指标.结果pH 7.5组的抗-D效价和IgG回收率较低,但γ-球蛋白纯度较高;而pH 5.8、 0.05 mol/L PBS组的抗-D效价和IgG回收率高,单体和二聚体含量也高,但γ-球蛋白纯度相对较低.结论用pH 5.8、 0.0 5 mol/LPBS洗脱,较适合从低效价血浆中提取抗-D抗体.
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20例输注Del型红细胞的RhD阴性受者的回顾性分析
目的 探讨Del型红细胞是否诱导RhD阴性受者产生同种免疫反应.方法 用吸收放散试验鉴定Del型血液,对临床输注Del型红细胞的患者进行追踪,采集输血后1周~1年的患者血液标本,RhD抗原初筛阴性的标本采用间接抗球蛋白试验(IAT)进行阴性确认.对患者血清采用凝聚胺法、间接抗球蛋白试验和微柱凝胶法筛查不规则抗体,然后对筛查阳性标本用谱细胞进行不规则抗体鉴定,并进行效价测定.结果 采集到输注Del红细胞的RhD阴性受血者样本20例,男性10例,女性10例,女性均有孕产史.Del型受血者5例,男性2例,女性3例,输注Del红细胞后未发生输血反应,不规则抗体筛查阴性.真实RhD阴性受血者15例,男性8例,女性7例,8例男性和5例女性患者输注Del红细胞后未发生输血反应,不规则抗体筛查阴性;2例妊娠女性抗-D为阳性,未出现输血反应.结论 Del型个体未检出抗-D,产生抗-D的个体未检出Del型.Del红细胞导致RhD阴性受者产生同种免疫反应的概率可能很低.
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Rh血型抗-G抗体的综合鉴定方法的建立及初步应用
目的 建立Rh血型抗-G抗体的鉴定方法,并初步应用于含有抗-D和抗-C抗体的Rh阴性人员的抗-G抗体分析.方法 首先采用卡式法初筛Rh血型,并通过间接抗人球蛋白试验确认Rh血型,其中抗体筛查检测血清中不规则抗体,谱细胞分析法确定抗体特异性,后采用吸收放散试验对获得阳性抗体进行验证和鉴别.结果 经多次吸收和放散法分析,可有效鉴别抗-G抗体.采用该法鉴定临床一例患者,其血型为AB型Rh阴性(ccdee),血清中不规则抗体可以与AB型RhD阳性红细胞凝集,也能凝集AB型RhD阴性含有C抗原的红细胞,经特异性吸收放散试验后发现该患者血清中不规则抗体为Ig-G抗-D和抗-G.结论 多次吸收和细胞放散实验是在缺少稀有、特异性红细胞时,鉴定抗-G抗体的简便实用方法.
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RhD阴性男性患者匹配输血后抗-D抗体分析
近年来,因Rh血型系统不合所导致的输血、溶血反应越来越受临床重视,研究证明,该血型系统中具有临床意义的是D抗原及其对应的抗D抗体.因此,输血前RhD抗原检测以及RhD(-)患者匹配输血成为临床输血工作的重要内容.
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52例RhD阴性患者D变异型和抗-D抗体检测分析
Rh血型系统是人类红细胞血型中复杂的血型系统,主要包括D、E、C、c、e 5种抗原,D抗原的免疫原性强,其在红细胞上质和量的改变可导致弱D、部分D和DEL型,统称为D变异型.
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Rh阴性孕妇产前抗-D抗体阳性率分析
目的 综合分析不同状况Rh阴性孕妇抗-D抗体的发生率.方法 采用微柱凝胶卡方法鉴定Rh(D)血型以及测定孕妇血清抗-D抗体,PCR方法检测RHD1227A等位基因鉴别我国汉族Rh阴性个体中的一种变异体"DEL型"和真实Rh阴性表型.结果 共观察196例Rh阴性孕妇,抗-D检出率14.3%(28/196);其中56例病历记录无妊娠史,抗-D阳性率5.4%(3/56);77例有妊娠史(有生育史除外),抗-D阳性率7.8%(6/77);余63例有生育史,抗-D阳性率30.2%(19/63).所有样本中检出变异体DEL型41例,均未检测到抗-D抗体.排除DEL按真实Rh阴性计算(155例),抗-D阳性率18.1%(28/155);无妊娠史者阳性率6.4%(3/47);有妊娠史者阳性率上升为9.7%(6/62);有生育史者抗-D阳性率则达41.3%(19/46).结论 近半数有生育史的真实Rh阴性孕妇发生D抗原同种免疫反应,DEL型孕妇不因妊娠和生育产生抗-D抗体.
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抗-D抗体的生物学活性研究
目的研究人体产生的抗-D抗体的体外生物学活性.方法鉴定误输RH(D)阳性血的D阴性患者的RH血型;通过多种方法检测抗-D抗体的效价;比较患者误输血5d、1个月、6个月后血浆中抗体的效价变化;采用ADCC实验研究白细胞表面FC受体对免疫复合物的识别作用;补体结合实验研究免疫复合物对补体的激活作用.结果患者RH血型为deecc,血浆仅含IgG类抗-D抗体;检测抗-D抗体时,微柱凝胶间接抗球蛋白法得出的效价高;抗体浓度在误输血1月后显著增高,半年后明显下降;ADCC实验、补体结合实验证实抗-D抗体与红细胞结合后能诱导白细胞或激活补体,破坏、溶解红细胞.结论人体产生的抗-D抗体在体外试验中具有很强的生物学活性.此外,在常规检测不完全抗体的方法中,微柱凝胶间接抗球蛋白法对抗-D抗体的检测灵敏度高.
关键词： Rh(D)血型 抗-D抗体 微柱凝胶间接抗球蛋白法 ADCC实验 -
人源性抗-D基因工程抗体在真核细胞CHO中的表达
目的于真核细胞系CHO细胞中表达人源性抗-D基因工程抗体,为人源性抗-D基因工程抗体在临床上的应用打下坚实的基础.方法脂质体法将真核表达载体pAH4604/VH和pAG4622/VL共转染体外培养的CHO细胞,经霉酚酸及组氨醇筛选阳性克隆细胞.通过ELISA法检测培养上清中人IgG的表达量.应用化学发光Western Blotting法对真核表达载体pAH4604/VH和pAG4622/VL在CHO细胞中的表达进行鉴定.结果pAH4604/VH和pAG4622/VL共转染体外培养的CHO细胞,经霉酚酸及组氨醇筛选12～14 d后有阳性克隆长出,未转染细胞则全部死亡.筛选出的各阳性细胞克隆经扩大培养及ELISA定量检测其上清人IgG含量高为4.05 ng/nl.Western Blotting显示上清和细胞内均有人IgG重链和轻链的表达.结论所构建的真核表达载体pAH4604/VH和pAG4622/VL在CHO真核细胞系表达成功,可产生人源化的IgG重链和轻链.
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完整人抗-D抗体分子表达载体的构建
目的构建含完整人抗-D抗体重、轻链基因的表达载体,为体外表达完整的抗-D抗体分子打下基础.方法从1株分泌IgM抗-D的细胞株提取总RNA,以随机引物逆转录成cDNA,用所设计的抗体前导区引物进行扩增,克隆、测序后将抗-D抗体重、轻链可变区基因分别和带有人IgG1恒定区和K轻链恒定区的表达载体连接,转化大肠杆菌后提取质粒DNA,用PCR和酶切进行鉴定.结果序列分析发现所扩增的基因符合人Ig的特征,除引导序列外,其余序列和我们以前所发表的Fab段序列一致,PCR和酶切鉴定抗体重、轻可变区基因克隆成功.结论成功地扩增了带引导序列的抗-D抗体可变区基因,并构建了完整人抗-D抗体分子表达载体.
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抗-D抗体引起新生儿溶血病一例
1 病历介绍患者,因停经6月余,自觉胎动减少2d入院.孕7产1,1994年顺产一女,健在.1999年孕7月余人工终止妊娠引产,2000年足月顺产一男孩,3d后夭折,2002年孕7月余因胎儿腹水而引产,1999年及2001年各自然流产一次.本次入院检查:宫高29cm,腹围97cm,头先露,未入盆,无宫缩.胎心音142次/min.门诊B超显示单胎,晚孕, 胎儿少量腹水.
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血液抗-D抗体检测在RhD阴性患者输注RhD阳性同型红细胞中的效果分析
目的 研究RhD阴性患者输注与其血型相同的RhD阳性红细胞血液后,患者抗-D抗体的水平.方法 收集该院2010年1月至2016年1月输注RhD阳性同型红细胞的20例RhD阴性患者的临床资料,分析其在输血前及输血后10、20、30、60、90 d的抗-D抗体水平及RhD阳性患者的效价.结果 输注RhD阳性同型红细胞血液的20例RhD阴性患者,在输血后90 d内有6例患者表现为RhD阳性,其中男性RhD阳性率为25.0%(3/12)、女性RhD阳性率为37.5%(3/8).3例RhD阳性的女性患者抗-D抗体效价分别为35、278、508.结论 RhD阴性患者输注RhD阳性同型红细胞血液,可刺激机体免疫机制,产生红细胞表面抗-D抗体,且部分RhD阴性患者的红细胞表型会发生改变.
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37例母儿RhD血型不合孕妇和新生儿的临床分析
目的 分析母儿RhD血型不合的孕期管理,妊娠结局及新生儿情况.方法 回顾性分析2013-2017年本院收治的37例母儿Rh血型不合孕妇及其新生儿临床资料,26例孕期已行抗D抗体检测,37例分娩前已行彩超检查.根据新生儿出生后是否行换血治疗将孕妇及其新生儿分为换血组和未换血组.结果 ①孕期抗D效价为≥1∶512者,换血组有1 1例(84.6％)明显高于未换血组(3例,占23.1％) (P =0.002);②换血组有5例(31.3％)超声疑诊胎儿溶血[胎儿多浆膜腔积液l例、胎儿三尖瓣重度反流伴胎儿大脑中动脉收缩期峰值流速(middle cerebral artery peak systolic velocity,MCA-PSV)增快1例、羊水增多1例、MCA-PSV增快2例],未换血组中有1例(4.8％)为胎儿MCA-PSV增快,两者相比差异有统计学意义(P=0.03);③除2例孕妇因高度疑诊胎儿溶血行剖宫产,其余手术指征均为产科指征;④换血组新生儿出生后血红蛋白水平明显低于未换血组(P＜0.05),换血组有2例新生儿放弃治疗,其余均治愈出院.结论 已发生同种免疫的Rh阴性妇女孕期应关注胎儿MCA-PSV及其他胎儿贫血的异常超声指标;孕期定期监测抗D抗体,如抗D抗体≥1∶512新生儿出生后换血概率较高,应及时做好换血准备;孕妇已发生同种免疫不是阴道分娩禁忌证.
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用血影细胞从低效价血浆中分离抗-D抗体
目的 研究从低效价血浆中分离抗-D抗体的方法.方法 用遗传表现型CCDee的RhD阳性O型红细胞制备血影细胞,经亲和层析法从抗-D含量为0.814μg/mL的健康人血浆中分离抗-D抗体,检测相关指标.结果 经此法成功获得抗-D抗体,抗-D抗体回收率达到84.65%,所得制剂经检测激肽释放酶原激活剂含量、IgG单体加二聚体含量、抗补体活性及y-球蛋白纯度等指标符合中国生物制品规程的要求.结论 血影细胞亲和层析法简化了抗-D抗体提取和纯化步骤,提高了从低效价血浆中提纯抗-D抗体的回收率.
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Rh阴性孕妇的产前免疫血液学检查及妊娠结局分析
目的:探讨Rh阴性孕妇产前免疫血液学检查和结局分析.方法:回顾性分析2010年1月至2016年12月期间在我院孕检及分娩的22880例孕妇中有Rh阴性孕妇287例(1.25％),用血清学方法确认血型D抗原阴性、Rh系统其他抗原表现型及抗体筛选;对有抗-D抗体孕妇进一步做抗体效价及分娩后根据新生儿黄疸指数做新生儿溶血病检测.部分Rh阴性孕妇于孕37周做预存式自体备血.结果:Rh阴性孕妇287例中,有12例(4.18％)检出抗-D抗体,抗原表现型均为ccee,且均有完整生育史.90例有1胎生育史中检出抗-D抗体10例(11.11％),15例有2胎生育史中检出抗-D抗体2例(13.33％).287例孕妇生育290个新生儿中有8个发生胎儿新生儿Rh溶血病,发生率占2.75％ (8/290).12例抗-D抗体孕妇中1例宫内有溶血,出生后治疗无效死亡,7例出生后发现新生儿黄疸,经换血等治疗后治愈,其余4例新生儿无黄疸出现.146例Rh阴性孕妇孕37周实施了预存式自体备血,剖宫产与经阴道分娩产妇比较自体备血与未自体备血者产后出血量,显示两组差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:有完整生育史且抗原表现型为“ccee”Rh阴性孕妇发生抗-D同种免疫反应可能会加大,但新生儿结局差异很大;Rh阴性孕妇分娩前可根据自身状况做预存式自体备血.
