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血红蛋白A2微柱层析检测方法
地中海贫血是一种对人类健康危害较大的遗传性疾病,我国南方较常见.本文应用美国HELENA实验室的微柱层析法试剂盒测定血红蛋白A2(HbA2)含量,并结合其他方法可方便地初筛出患者是α地中海贫血或β地中海贫血,该法具有简便、准确、重复性好的特点,易于推广应用.
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测定HbA1c在鉴别急性脑梗死患者血糖升高性质中的意义
急性脑梗死患者常因应激反应或伴有糖尿病引起血糖升高,临床上及时诊断高血糖的原因对患者的治疗及预后具有重要价值,但急性期对这两种情况的鉴别存在一定困难.1994年3月~1997年12月,我们在先前采用微柱层析法测定糖化血红蛋白(简称GHb或HbA1)的基础上,采用高压液相色谱法测定糖化血红蛋白亚组分(HbA1c),以确定急性脑梗死中血糖升高的原因.
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柱层析法纯化传代Vero细胞狂犬病疫苗上样量的选择
传代Vero细胞狂犬病疫苗较原代地鼠肾细胞狂犬病疫苗具有效价高,工艺简单,无外源因子污染,易于大规模生产的优点.其浓缩液经过Sepharose 4FF凝胶柱层析纯化后[1],其杂蛋白去除率可达99%以上,一、二期临床试验证明副反应率极低,且免疫效价可达4.5IU/ml以上,高于<中国生物制品规程>所规定的2.5IU/ml要求.在深入研究纯化工艺佳条件时,发现待纯化的浓缩疫苗上样量的多少直接影响纯化后疫苗的质量.对此,我们做了研究,结果报告如下.
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用RhD阳性红细胞从含抗D抗体的IgG中提纯抗D抗体
目的:研究从含抗-D抗体的IgG中纯化抗D 抗体的方法.方法:抗D含量为0.814 μg/ml的健康人血浆,经柱层析法分离获得含抗D的IgG后,用遗传表现型CCDee的RhD阳性"O"型红细胞经亲和层析法从IgG中纯化抗-D抗体.检测相关指标.结果:经过亲和层析法纯化后去除了近90%的非目的IgG,使产物可以进一步浓缩以提高单位体积制剂中抗-D抗体浓度.所得制剂经检测各项指标均符合中国生物制品规程的要求.结论:本方法可从含抗D的IgG制剂中进一步纯化抗D抗体,为血浆综合利用提供参考.
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柱层析法纯化人血纤维蛋白原及其药理功能研究
目的:探讨层析法新工艺和原有的低温乙醇工艺制备纤维蛋白原在大鼠跟腱断裂模型中促恢复的效果差异.方法:构建大鼠跟腱部位断裂模型,将其分为空白组(未剪跟腱)、模型组(跟腱断裂未给药)、实验组(自制纤维蛋白原2 mg/mL)与对照组(市售纤维蛋白原2 mg/mL),观察各组大鼠在手术后三周跟腱部位的大滑动距离、弹性模量和大抗拉力差异.结果:采用冷沉淀溶解、酸沉除杂、S/D灭活病毒、MacroCapQ柱层析、过滤等流程可从人血浆冷沉淀组分Ⅰ中成功分离纯度为90.9%纤维蛋白原.试验中构建的大鼠跟腱部位断裂模型无感染、且均存活至试验终止.生物力学结果显示,四组大鼠跟腱在大滑行距离上无明显统计学差异(P>0.05);在跟腱部位弹性模量及大抗压力比较上,实验组及对照组均优于模型组,但与空白组仍有一定差距,且差异均具有统计学意义(P<0.05).结论:采用柱层析法分离人纤维蛋白原,不仅能有效提高分离效率,减少蛋白损失,还可增强纤维蛋白原在断裂跟腱中的促恢复效果.
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秦皮中秦皮乙素分离纯化的工艺研究
秦皮为传统常用中药,始载于<淮南子>,<神农本草经>列为上品.中国药典(2005版)规定秦皮为木犀科植物苦枥白蜡树Fraxinus rhynchophylla Hance,白蜡树F. chinensis Roxb,尖叶白蜡树F.szahata Lingelsh……
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忍冬叶活性成分分离工艺的研究
忍冬叶为忍冬科忍冬属植物忍冬的干燥叶,该资源较为丰富.忍冬叶中主要有效成分为绿原酸及黄酮类成分,具有清热解毒,疏风通络之功效,常用于治疗上呼吸道感染,扁桃体炎、口腔炎等症[1-3].忍冬叶除了传统应用外,还可以作为医药原料.
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超临界CO2萃取结合柱层析法提取和纯化丹参中的丹参酮ⅡA
目的:优化用超临界CO2从丹参中萃取丹参酮ⅡA的工艺条件,并建立纯化丹参酮ⅡA的柱层析法.方法:以HPLC法测定丹参酮ⅡA的含量.采用正交试验优化超临界CO2萃取丹参酮的条件,考察夹带剂用量、萃取压力、萃取温度和分离温度对提取效果的影响.用100~200目的中性氧化铝柱层析,以苯进行洗脱,收集相关流份,减压回收溶剂后经无水乙醇重结晶得到丹参酮ⅡA晶体.结果:超临界CO2萃取丹参酮ⅡA的优条件为:夹带剂用量120 ml,萃取压力20 MPa,萃取温度50 ℃,分离温度35 ℃.柱层析后重结晶得到纯度为93.49%的丹参酮ⅡA晶体.结论:超临界CO2萃取丹参酮具有操作简便、方法可靠、切实可行、无有机溶剂残留的优点,结合柱层析法可获得高纯度晶体.
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免疫透射比浊法测定HbA1C的方法评价
糖化血红蛋白是血红蛋白在体内与己糖发生缓慢的非酶促化反应而形成的较为稳定的化合物.而真正与葡萄糖发生结合的糖化血红蛋白称为HbA1C,测定HbA1C可以反映两到三个月之内患者的平均血糖水平.目前HbA1C测定的主要方法是采用离子交换微柱层析法.但这种方法操作较为繁琐,试剂和操作要求均较高.2005年2月1日至2005年3月30日期间,我们利用ROCHE公司的免疫透射比浊试剂,在全自动生化分析仪上测定HbA1C,现对该方法作评价.
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化学发光法检测糖化血红蛋白的实验评价
糖化血红蛋白(HbAlc)可反映患者抽血前1~2月内血糖的平均综合值,对高血糖特别是血糖和尿糖波动较大的患者,有独特诊断意义.早期检测以电泳法、微柱层析法应用较广泛,近年应用免疫比浊法和化学发光法(ICIA法)检测.本文报告化学发光法检测糖化血红蛋白的实验评价.
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用化学分析法对蝌蚪的研究
目的:对蝌蚪进行化学成分的研究.方法:应用柱层析的方法对蝌蚪干粉中的化学成分进行分离,用仪器分析确定其结构.结果:从蝌蚪中分离出19种化合物.结论:分离出主要成分是β-谷甾醇.
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逍遥散抗抑郁活性部位筛选
目的 从逍遥散复方提取分离得到的不同极性化学部位中,筛选出抗抑郁活性部位.方法 ①分别采用D101大孔吸附树脂柱分离和溶剂萃取法分离,通过HPLC图谱评价两种分离方法的分离效果.②以小鼠行为绝望模型评价逍遥散各个不同极性部位的抗抑郁作用. 结果 柱层析法得到的各部位HPLC图谱交叉较少,溶剂萃取法分离得到的各部位HPLC图谱交叉较多;有两个部位可缩短绝望模型中小鼠强迫游泳的不动时间(P<0.05),其中以小极性部位为显著(P<0.01). 结论 在两种分离方法中,柱分离效果较理想,逍遥散抗抑郁作用的活性部位为极性较小的部位,为逍遥散抗抑郁药效物质基础研究奠定了基础.
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血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体复合物的分离和纯化
从机采浓缩血小板中,应用凝胶柱刀豆素A-琼脂糖、肝素-琼脂糖亲和层析与分子筛层析法,分离、纯化并得到血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体复合物.血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体复合物由α、β两个亚单位组成,糖蛋白Ⅱb可还原为糖蛋白Ⅱbα(分子量为125 kDa)和糖蛋白Ⅱbβ(分子量为23 kDa),而糖蛋白Ⅲa为一条多肽链,分子量为95 kDa,还原后为108 kDa.经不同凝胶亲和层析、凝胶电泳分析,得到血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体复合物,为进一步筛选单克隆抗体和进行药物研发打下了基础.
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紫杉烷二萜类化合物10-DABⅢ的分离纯化
目的:建立分离纯化紫杉烷二萜类化合物10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)的方法.方法:采用柱层析和重结晶的方法精制10-DABⅢ.以杂质含量为指标确定层析液比例;以纯度和收率为指标筛选第1次重结晶时三氯甲烷的用量,第2次重结晶时丙酮、正己烷的用量以及2次重结晶的温度和时间.结果:层析液丙酮与三氯甲烷体积比为2.25∶7.75,此时杂质含量小,为3.7%.用15倍体积(W/V)的三氯甲烷、-25℃冷冻24 h第1次重结晶以及35倍体积的丙酮(W/V)和30倍体积的正己烷(W/V)、-25℃冷冻12h第2次重结晶,纯化后的样品纯度为99.34%,收率为83.50%.结论:该方法对10-DABⅢ分离纯化效果好.
关键词: 10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ 分离 纯化 柱层析法 重结晶 -
糖化血红蛋白检测方法及临床应用
糖化血红蛋白(glycosylated hemoglubin,GHb)是糖尿病诊断和治疗的重要指标,广泛应用于临床.近年来,GHb检测方法发展迅速,早期检测以电泳法、微柱层析法应用较广泛,目前免疫比浊法和化学发光法(IVIA法)检测已开始在临床应用.
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密生雪灵芝的化学成分研究
目的 研究密生雪灵芝的化学成分.方法 利用硅胶柱层析、大孔吸附树脂、中压柱层析、Sephadex LH-20和反相C18半制备液相色谱等手段进行分离纯化,并通过1HNMR、13CNMR等波谱技术来鉴定结构.结果 从密生雪灵芝全草的正丁醇萃取物中分离得到了10个化合物,分别鉴定为:小麦黄素(I)、小麦黄素-7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅱ)、山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(Ⅲ)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅳ)、邻苯二甲酸二异丁酯(V)、没食子酸(Ⅵ)、山奈酚(Ⅶ)、槲皮素(Ⅷ)、芹菜素(Ⅸ)、杨梅素(X).结论 所有化合物均为首次从密生雪灵芝中分离得到.
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人血清白蛋白降解片段的分离纯化
目的 用柱层析法分离纯化人血清白蛋白降解片段,优选佳工艺.方法 首先采用葡聚糖凝胶Sephadex G-100和Superdex 75对人血清白蛋白降解产物进行分离纯化,再用羧甲基纤维素和DEAE-纤维素在不同pH的磷酸盐缓冲液中下进一步纯化,通过分离度、蛋白回收率优选佳工艺.结果 Superdex 75比Sephadex G-100分离效果好,将人血清白蛋白降解产物分离纯化为粗品Ⅰ和Ⅱ,蛋白回收率为61.82% ±2.01%;羧甲基纤维素较DEAE-纤维素分离效果好,将粗品Ⅰ分离纯化为人血清白蛋白多肽片段A299-585,蛋白回收率为62.07%±1.12%;将粗品Ⅱ分离纯化为人血清白蛋白多肽片段A1-123和A124-298,蛋白回收率为66.29%±1.79%.结论 Superdex 75和CM-Sepharose FF不仅对人血清白蛋白的降解产物具有良好的分离度,而且有较好的蛋白回收率.