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2例类孟买表型的分子机理研究
本研究探讨2例类孟买血型表型的分子机理.先证者样本通过血清学方法鉴定为类孟买血型,采用PCR扩增先证者的FUT1和FUT2基因编码区序列,并对PCR产物进行直接测序分析.同时FUT1基因PCR产物经TOPO TA转染克隆到质粒上分离后,对其进行测序分析,以证实突变在染色体上的位置.结果表明:直接测序发现2例先证者FUT1基因第547-552位AG两碱基缺失杂合(CAGAGAG→CAGAG)和第658位C→T杂合.克隆后证实一条染色体上FUT1基因第547-552位中的两碱基AG缺失,可导致阅读框架发生移码,提前形成终止密码;另一条染色体上FUT1基因第658位C→T错义突变,导致第220位精氨酸(Arg)→半胱氨酸(Cys).2例先证者FUT2基因均为357C→T同义突变.结论:2例先证者FUT1基因突变为不同染色体的复合性突变,均为h1h3.
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一例类孟买型表型的分子机理研究
为了研究1例类孟买型的分子机理,在血清学方法初步鉴定先证者为A类孟买型的基础上,用PCR扩增先证者ABO基因第6、7外显子、FUT1基因(H)和FUT2基因(Se)的编码区序列,PCR产物经割胶纯化后直接测序分析,并应用PCR-SSP和基因扫描方法证实测序所发现的突变.FUT1基因突变通过克隆到质粒载体后测序分析.结果表明:直接测序发现先证者ABO血型基因型为A102A102,FUT1基因第682位A→G错义突变、第547-552位两碱基AG缺失(CAGAGAG→CAGAG)突变.克隆证实1条染色体上FUT1基因为A682G突变,导致M228V氨基酸突变;另一条染色体上第547-552位两碱基AG缺失,导致阅读框架发生移码,提前形成终止密码.FUT2基因为分泌基因Se357和弱分泌基因Se357,385杂合(第357位为T/T纯合,385位为A/T杂合).结论:FUT1基因A682G和547-552 delAG双杂合突变是引起该例先证者表现为类孟买型的分子机理,A682G是一个新的引起类孟买型的FUT1基因突变.
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ABO血型系统分泌型研究进展
ABO血型抗原除表达在红细胞表面以外,还以可溶性血型物质的形式存在于大部分人的唾液或其它形式的分泌液中.产生可溶性血型物质的能力由19号染色体长臂的SE基因(又称FUT2基因)位点决定.本文从分子生物学角度阐述ABO血型系统分泌型与非分泌型的新研究进展.
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中国汉族人群FUT2基因385位点突变与Lewis表型的相关性
目的分析中国汉族人群分泌型基因(FUT2)385位点突变与Lewis表型的相关性.方法对73例中国汉族人进行Lewis血型血清学鉴定.采用SSP法对73例标本的FUT2基因进行385位点突变筛检,并用测序法验证.结果385T突变发生率为54.79%.个体FUT2基因385 T为纯合子且Lewis为阳性时,其Lewis表型为Le(a+b+)和Le(a+b-),Le(a+b-)表型占总数的17.8%,Le(a+b+)占8.2%.结论FUT2基因A385T的纯合子突变是Le(a+b+)和Le(a+b-)表型的遗传基础.
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一例Ah-分泌型个体的分子生物学背景的分析
目的 研究Ah-分泌型个体的分子基础.方法 经血型血清学方法鉴定红细胞上H抗原缺失、但存在弱A抗原的Ah-分泌型个体,用PCR-SSP法鉴定ABO基因型,对FU-T1和FU-T2编码区域进行扩增,并对扩增产物直接测序,FU-T1进一步做克隆测序分析.结果 血清学结果显示该个体红细胞不凝集抗H血清,但与抗A定型血清呈弱凝集,Lewis血型表现型为Le(a-b+),唾液中有A、H物质,ABO基因型为A102B02;FU-T1基因型为h35h328,h35等位基因(nt35CT),使12位(Ala)丙氨酸被(Val)缬氨酸置换;h328等位基因(nt328GA),导致110位Ala(丙氨酸)被Thr(苏氨酸)置换;FU-T2基因为正常野生型Se357Se357.结论 两个错义突变C35T、G328A可能是引起该例Ah-分泌型H抗原缺失、但存在A抗原的弱表达的原因.
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类孟买血型的家系鉴定1例
无偿献血者,女,20岁,汉族,第一次献血,在用Metis200全自动血型仪做血型鉴定时发现正反定型结果不一致,血清学初步判定为类孟买型,送上海市血液中心血型参比室做基因测序,现将结果报告如下.
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贵阳市1例稀有血型类孟买Bmh的检测分析
人类ABO血型的A抗原和B抗原都是由前体物质 H抗原转换而成的，绝大部分人群都有 H抗原，但类孟买血型却部分或完全缺失，仅有的少量 H抗原终转换成A抗原或B抗原，从而在血清中产生相应的抗‐A、抗‐B和抗‐H抗体。类孟买血型给实验室ABO定型和交叉配血带来困难，本例标本就是因医院输血科在ABO血型定型时出现正反不符，且用多袋O型洗涤红细胞与其配血，主侧均发生凝集，遂送贵州省中心血型室检测。经血型血清学和分子生物学检测，证实为类孟买血型Bmh ，现报道如下。
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中国人副孟买型的FUT1和FUT2基因的分子遗传研究:一个新的FUT1等位基因的鉴定
目的 在7例由血清学方法确定为副孟买表型的中国人个体中,进行了分子生物学分析.方法 采用聚合酶链反应和DNA直接测序、克隆测序等方法,检测7例标本的FUT1和FUT2基因的核苷酸序列组成,并对一个新的非功能性FUT1等位基因进行家系调查.结果 7例标本的FUT1基因型分别为h1h1(4例),h2h2(2例),h328 hnew(1例),h1等位基因在547～552位缺失1个AG,使得氨基酸序列发生182框码移位;h2等位基因在880～882位缺失两个T,使得氨基酸序列发生294框码移位;h328等位基因(nt328G＞A)导致110位丙氨酸(Ala)被苏氨酸(Thr)置换;除hnew以外,h1、h2、h328这3种等位基因以前都有报道,hnew以杂合子形式存在于标本7中,经克隆测序发现该新基因在nt360-400位缺失GGTATTCCGCATCACCCTGCCCGTGCTGGCCCC,共33个碱基,家系调查证明hnew来自其母亲.7例标本的FUT2基因型分别为,3例为正常野生型Se357 Se357,3例标本为Se357 Se357,358,1例标本为Se357,716Se357,716,已知Se357(nt357C＞T)和Se716(nt716G＞A)为功能性的FUT2等位基因,Se385(nt385A＞T)为弱功能性的FUT2等位基因,7例副孟买表型个体至少带一个拷贝的功能性FUT2等位基因,与其分泌状态一致.结论 发现一个新的非功能性FUT1等位基因,其在nt360-400位缺失33个碱基,引起氨基酸序列框码移位,不能编码有活性的H抗原转移酶.
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中国类孟买血型 FUT1和 FUT2基因研究
目的研究中国类孟买血型的 FUT1和 FUT2基因构成.方法 10个血清学初步分析为类孟买血型的标本来源于不同地区,ABO常规定型,吸收放散试验鉴定其红细胞表面少量A或B抗原,检测唾液中分泌型血型物质,或通过Lewis血型间接了解其分泌状态.聚合酶链反应-限制性片段长度多态方法进行ABO基因分型,并与血清学结果相互验证.对 FUT1(H)和 FUT2(SE)的编码区进行PCR产物直接测序,了解其H及SE位点基因型及核苷酸序列组成.结果血清学和分子生物学两种方法证实10例皆为罕见的类孟买血型.检测到h1 (nt547-552Δag)、h2 (nt880-882Δtt)、h3 (nt658c→t)和h4 (nt35c→t)4个FUT1座位上的隐性基因,同时发现两种新的隐性等位基因:hnew-1(nt586c→t)和hnew-2(nt328g→a).10例中国类孟买个体FUT2位点的研究表明,所有被研究标本的 FUT2基因,都具有nt357c→t的同义突变,其中1例为Seweak等位基因纯合子.结论 H位点的无效等位基因具有较为广泛的遗传多态性.除了已经报道的h等位基因外,在中国类孟买个体中我们检测到两种新的隐性等位基因,并检出1个Sew的类孟买个体及Se基因的一种新的G716A单核苷酸多态性位点.
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h328(nt328G＞A)突变致类孟买血型的血清学及分子生物学分析
目的 对1例类孟买型个体进行血清学方法鉴定,并探讨其分子机制.方法 采用血型血清学方法确定先证者的红细胞血型,用PCR扩增ABO基因第6、7外显子、FUT1和FUT2基因全编码区域,并分别对PCR扩增产物进行测序分析.结果 血清学实验结果表明先证者为类孟买血型Ah-分泌型.测序结果显示ABO基因型为A102/O01;FUT1基因的328位点由G突变为A,导致110位丙氨酸(Ala)被苏氨酸(Thr)置换.结论 FUT1基因编码区nt328(G＞A)错义突变可能是本例类孟买型的分子生物学基础.
关键词： 类孟买血型 FUT1基因 FUT2基因 h328 (nt328G＞A) -
H抗原缺乏血型个体FUT1和FUT2基因的序列分析
目的 探讨H抗原缺乏血型个体的FUT1和FUT2基因分型及测序结果.方法 选择2005-2014年深圳血液中心检出的13例H抗原缺乏血型个体为研究对象.采用常规血型血清学红细胞抗原、抗体凝集试验,对研究对象血液样本进行ABO正、反定型,Lewis血型及H抗原的鉴定;其中A或B抗原弱表达的样本,采用吸收及放散试验方法进行进一步抗原特异性鉴定.采用唾液凝集抑制试验,检测研究对象唾液样本中的ABH抗原物质.采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)、DNA直接测序及克隆测序的分子生物学方法,分析研究对象血液样本DNA的FUT1和FUT2基因序列.结果 13例H抗原缺失血型个体中有10例为H抗原缺乏-分泌型血型,2例为H抗原部分缺乏-分泌型血型,1例为H抗原缺乏-非分泌型血型.13例H抗原缺乏血型个体中FUT1基因型分布如下:3例为h547-552delAG/h547-552delAG,4例为h880-882delAG/h547-552delAG,2例为h880-882delTT/h880-882delTT,1例为h328G＞A/h360-400delGGTATTCCGCATCACCCTGCCCGTGCTGGCCCC(共33个碱基),1例为h328G＞A/h880-882delTT,1例为h35C＞ T/h328G＞ A;658C＞T,1例h658C＞T/h658C＞T.13例H抗原缺乏血型个体样本的FUT2基因型分布如下:4例为正常野生型Se357 Se357,7例为Se357 se357,385,1例为Se357,716 Se357,716,1例为se357,385 se357,385.结论 FUT1和FUT2基因的点突变和碱基缺失是H抗原缺乏血型的分子基础.
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类孟买血型基因分析及1种FUT1新无效等位基因的发现
目的 分析类孟买血型基因及H抗原缺乏血型的分子机制,了解FUT1与FUT2基因间的连锁遗传关系.方法 用血清学方法鉴定H抗原缺乏的12名献血者及4名患者的类孟买血型,采用直接测序和克隆测序的方法分析类孟买血型个体的FUT1和FUT2基因.结果 在16名类孟买血型个体者中检出3种已知的FUT1无效等位基因(h1,nt547-552△ag;h2,nt880-882△tt;h3,nt658c→t)和1种新的FUT1无效等位基因(h9,nt424c→t).FUT1基因型分别为h1/h19例,h1/h2 4例,h3/h2、h2/h2及h1/h9各1例.在检出的FUT1无效等位基因中,h1和h2等位基因分别为68.75％(23/32)和21.87％ (7/32).所有FUT2等位基因均存在纯合的nt357c→t同义突变,在具有h2等位基因的个体中,都检出nt716g→a突变(Se357.716);未发现FUT2无效等位基因.结论 发现1种引起H抗原缺乏血型的新FUT1无效等位基因;证实h1和h2为福建地区类孟买血型个体的主要流行基因,支持FUT1和FUT2基因存在连锁遗传的观点.
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中国汉族人FUT2基因点突变初步研究
目的了解中国汉族人分泌型基因(FUT2)点突变的情况.方法采用直接测序法及分子克隆测序法对41名中国汉族个体的FUT2基因进行检测,并与Kelly报道的分泌型基因的序列作比较分析.结果 41名中国汉族个体中未见G428A突变,但发现A385T和C357T突变,其中24人有A385T突变,17人无A385T突变,而所有个体都有C357T的同义突变.结论在41名中国汉族人群中没有发现在非洲和高加索人非分泌型中常见的G428A点突变,但存在着A385T、C357T两种不同于白种人的FUT2基因点突变.
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中国人唾液血型物质与FUT2、FUT3基因多态性初步研究
目的 分析36例中国各地区健康随机人群的FUT2、FUT3及唾液ABH血型物质效价,计算FUT2、FUT3基因型检出数量及频率,唾液血型物质效价,比较不同FUT2、FUT3基因之间唾液血型物质的效价.得到FUT2、FUT3基因对于唾液血型物质效价高低的影响,并尝试探索2个基因之间的连锁关系.方法 采用中和抑制试验检测唾液中的ABH血型物质.采用基因测序方法检测FUT2、FUT3基因.计算不同FUT2、FUT3基因型唾液血型物质的均值和SD值,使用t检验比较不同FUT2、FUT3基因之间唾液血型物质的效价.结果 36例标本中,FUT2基因测序检出SeSe、SeSew、SewSew,未发现se基因单倍型.FUT3基因测序检出LeLe、Lele、lele.唾液血型物质效价n分布在-2.2-15.5之间(2n).结论 Se基因对于唾液血型物质效价影响较大,Se基因能够影响个体体液中血型物质的分泌,无论纯合或杂合,影响力无显著差异.而Le基因的影响力远小于Se基因.
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类孟买血型的分子机制研究——附2例家系报告
目的 对2例类孟买血型个体及其家系进行表型鉴定和分子机制研究.方法 应用血清学方法检测ABO、H抗原;应用PCR技术扩增FUT1、FUT2编码区序列,并对PCR产物进行直接测序分析.结果 发现2名先证者红细胞与抗H血清均不凝集,为血清学分型罕见的类孟买型Ahm和Bhm.直接测序发现2名先证者FUT1基因均存在658位C→T的纯合突变.先证者1父母、姑姑、弟弟和儿子FUT1基因均存在658位C→T杂合突变;先证者2父母、弟弟和2个胞姐FUT1基因也均存在658位C→T杂合突变.另外,所有被研究标本都是分泌型,其FUT2基因都具有357位C→T的同义突变.其中先证者1和2都为Se357等位基因纯合子.结论 先证者1为Ahm型,先证者2为Bhm型,2例基因型均为h3/h3且均为分泌型.2名先证者的父母FUT1基因都是658位C→T杂合子,并都把突变的FUT1遗传给先证者,使其携带658位C→T的纯合突变,造成类孟买型的表型.
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母亲FUT2基因单核苷酸位点多态性对母乳喂养小儿早期生长的影响
[目的]观察母亲a1,2岩藻糖基转移酶(type a1,2 fucosyltransferase,FUT2)基因单核苷酸位点多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)对母乳喂养儿早期体格生长发育及常见疾病发病率的影响. [方法]选取110对新生儿及母亲进入课题,产后2周收集母亲唾液用于提取DNA行SNP检测.每周记录小儿喂养及疾病情况至12个月,于小儿4、13、26、52周时行体格测量. [结果]本组小儿感染性疾病发病率与文献相比明显降低；AT基因型母亲与AA、TT型母亲相比,小儿早期体格生长发育更快,13、26周及52周体重,26周及52周身高,52周头围Z分均较高(P＜0.05),且中重度呼吸道感染发病率较低(P＜0.05)；母亲SNP基因型不同的小儿在12月龄内湿疹发病率差异无统计学意义(P＞0.05),双亲均有过敏性疾病史的小儿湿疹发病率高于双亲无过敏史者(P＜0.05). [结论] 母乳喂养有助于降低小儿12月龄内常见感染性疾病发病；AT基因型母亲的母乳更利于小儿早期生长；家族遗传风险会影响小儿湿疹发病率.
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类孟买型在两个近亲与随机婚配家系中的遗传特点
目的 调查分析近亲与随机婚配的两个家系成员个体间的类孟买型分布状态,了解类孟买表现型在该两家系中的遗传特点.方法 以血型血清学试验作为检测基础,用PCR-SSP法进行ABO基因分型,扩增FUT1,FUT2基因,对PCR扩增产物进行直接测序或分子克隆测序后,分别鉴定两家系成员的类孟买表现型.结果 近亲婚配的家系1中,先证者与其兄、弟均从父母中得到了FUT1基因的547～548位两碱基AG缺失(h1),880～881位两个T碱基缺失的突变点(h2),表现为h1,h2类孟买型;父亲为h2基因携带者;母亲与先证者的女儿均为h1基因携带者.随机婚配的家系2中先证者与兄弟姐妹共4人,只有先证者本人的两条单倍体均遗传了父、母亲的FUT1基因的547～548位两碱基AG缺失(h1),表现为h1h1类孟买型;其他兄弟姐妹与父亲、母亲、先证者的儿子均为h1基因携带者,血型为正常的表现型.两家系成员的FUT2位点均为正常的野生型.近亲婚配家系Ⅰ中hh纯合子遗传发生率为100%;随机婚配家系Ⅱ中hh纯合子遗传发生率为25%.结论 该两个家系调查发现,类孟买表现型的遗传方式符合常染色体隐性遗传规律,近亲婚配比随机婚配可大大增加类孟买表现型的遗传概率.
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FUT2基因参与人肿瘤细胞系BEL-7404、SGC-7901和SPC-A-1上H血型抗原的表达
目的：调查H血型抗原在人肿瘤细胞系BEL-7404、SPC-A-1和SGC-7901上的表达.方法：免疫组织化学和流式细胞术分析细胞上H抗原在体内外的表达.RT-PCR，Southern印迹和限制性酶切分析确定FUT2基因在细胞中的表达.结果：SGC-7901，BEL-7404和SPC-A-1细胞表面H抗原表达的平均荧光强度分别为162±43，81±25和28±17.并且用RT-PCR从这些细胞中扩增出一约1.0kbDNA条带，此条带能被FUT2特异核酸探针检出.结论：人肿瘤细胞系BEL-7404，SPC-A-1和SGC-7901于体内外在细胞表面均表达H抗原，但表达水平在细胞之间变化显著.FUT2基因的表达在细胞膜上产生这些抗原.
