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流式细胞术检测不同RhD血清型红细胞RhD抗原的表达
本研究旨在建立流式细胞术(FCM)检测红细胞表面RhD抗原的实验方法,并研究不同RhD血清型红细胞表面D抗原表达的差异.选取标准的RhD(+)和RhD(-)细胞按1:1比例混合,用间接标记法[-抗为IgG抗-D,二抗为FITC-抗-IgG F(ab')2]染色,应用FCM检测RhD(+)细胞的比例,并确立IgG抗-D的佳使用稀释度.采用FCM检测RhD阳性、弱D型、RhDel型、RhD阴性红细胞表面D抗原数量.结果显示,IgG抗-D单克隆抗体的佳使用稀释度是1:4,1×106/50 μl.RhD阳性、弱D型、RhDel型、RhD阴性者RhD(+)红细胞百分率分别为(96.8±2.97)%、(79.5±9.88)%、(47.8±11.43)%、(3.7±2.96)%,红细胞表面D抗原平均荧光强度依次为33.3±6.21道、18.6±5.39道、7.10±1.17道、0.79±0.55道.结论:4种不同血清表现型的RhD抗原数量的差异有显著性,以RhD阳性的抗原数量多,弱D型次之,RhDel型少.
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RhDel型与RhC抗原的相关性研究
目的 研究RhDel型与RhC抗原之间的相关性,为临床鉴别RhDel型提供一种更为简便的方法.方法 收集137份样本,血清学方法检测Rh抗原,吸收放散实验鉴定RhDel型,PCR-SSP技术检测RHD1227多态性.结果 137例RhDel型样本中,RhC抗原阳性比例为84.67％ (116/137),RhDel型与RhC抗原具有显著的相关性(P＜0.05).RHD1227A等位基因在RhCcee和RhCCee表型所占的比例分别为65.52％ (76/116)和18.10％(21/116).结论 RhDel个体与RhC阳性表型具有相关性,将RhC表型检测和RHD1227A联合检测用于RhDel型的鉴定,是一种临床可行的方法.
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RhDu、Del型的D基因外显子多态性分析
RhD抗原是除ABO血型系统之外具免疫原性的红细胞抗原分子，在Rh血型系统中占重要地位［1］。D抗原根据其抗原量的变化表现其抗原性的强弱，表型D—/D—抗原性强，其次为弱D(Du)、弱为Del型［2］。既往对Du及Del基因结构仅限于推测，笔者采用基因检测技术分析构成Du、Del型基因的结构，现报告如下。1 材料和方法1.1 Du标本 5例，用血清学技术2次检定，方法按《中国输血技术操作规程》操作［3］。1.2 Del标本 8例，经血清学技术检定为Rh阴性(方法同上)的标本再用吸收放散试验检定。采用三氯乙烯和三氯甲烷放散法［2］。8例标本中，6例表现型为CCee，2例为Ccee。
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中国人群真实RhD阴性个体和RhDel型RHD基因研究
为观察中国人群真实RhD阴性个体和RhDel型RHD基因存在情况,采用常规盐水法和抗人球蛋白试验筛选RhD阴性捐血者,通过吸收放散试验确定其中RhDel和真实RhD阴性,并采用PCR技术检测RHD基因第4内含子,对吸收放散试验结果与基因检测结果不符的样本进一步采用序列特异性引物PCR(PCR-SSP)技术测定RHD基因第3、4、5、6、7、9和10外显子,观察基因变异.筛选获得104名RhD阴性捐血者,吸收放散试验鉴定25名(24.0%)为RhDel型,79名(76.0%)为真实RhD阴性;25例RhDe1全部检测到D基因exon4-intro4-exon5区域,79名真实RhD阴性个体中有5名(6.3%)个体(2名CCdee,2名ccdEe,1名Ccdee)检测到D基因第4内含子;PCR-SSP结果显示5名个体中,4名存在全部被检测的D基因区域,1名个体(ccdEe)第5外显子检测阴性.结果表明抗人球蛋白试验确认的RhD阴性中国人中存在高比率的RhDel型,且均可检测出RHD基因第4内含子;若排除RhDe1,携带D基因的RhD阴性中国人的比率明显降低,且这些个体并非如以往报道的均为C抗原阳性.
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RhDel表型与RHEC表型的相关性研究
目的 分析广东汉族人群RhD阴性个体中,RhDel表型个体RHEC表型的分布情况和两者的相关性,以及PCR-SSP技术在RhDel基因检测中的应用价值.方法 对400份广东汉族人群中血型血清学检测为RhD阴性的标本,采用血型血清学方法对RhDel表型和RHEC表型进行检测,并采用PCR-SSP方法进行RHD 1227G＞A基因检测.结果 在400份RhD阴性标本中,89例(22.25％)检测到RhDel表型,主要分布在CCee、CeEe和Ccee表型的个体,在CCEe、ccEE、ccEe和ccee表型中未发现.在RhDel表型的标本中,同时检测到RHD 1227G＞A基因.结论 RhDel表型与RHEC表型具有一定的相关性；应用PCR-SSP技术能够对RhDel基因进行检测;与传统的间接抗人球蛋白实验和吸收放散实验相比,PCR-SSP技术能够快速、便捷筛查RhDel献血者和受血者,避免抗-D抗体引发的同种免疫反应和RhD阴性血液的浪费.
关键词： Rh血型 RhDel RHD基因 聚合酶链反应-序列特异性引物 -
8例Rh Del型研究
目的了解常规血清学试验为RhD阴性者中RhDel(D极弱型)的情况,并探讨其临床价值。方法采用PCR-SSP技术,检测33例常规血清学试验为RhD阴性,18例为RhD阳性样本的D基因外显子。并对33例RhD阴性样本进行吸收放散试验。结果 33例RhD阴性样本D基因外显子有8例无缺失、5例部分缺失、20例完全缺失,其中8例无缺失样本可以吸收并放散出D抗体,为RhDel型。18例RhD阳性样本D基因无缺失。结论 RhDel型常规血清学试验易被误认为RhD阴性,其D抗原虽然表达极弱,但外显子无缺失。提示凡常规血清学方法检测为RhD阴性的供血者,必须进一步作吸收放散试验作Del排除,以确保输血安全。
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89例Rh阴性血清学调查分析
Rh血型学系统的抗原至今发现60多个,其中大多数是RhD多态性,涉及临床的有D、C、c、E、e5个抗原.在临床上,凡带有D抗原者为RhD阳性,不带有D抗原者为RhD阴性.研究表明,常规盐水法RhD阴性样本中有相当一部分样本存在减弱的RhD抗原[1],而D抗原具有很强的免疫原性,是重要的输血反应抗原和引起新生儿溶血病的主要血型抗原[2].为了解云南人群RhDel分布,笔者对常规RhD阴性样本用间接抗球蛋白和吸收放散试验确定是否存在RhD抗原,对研究对象做了Rh表型分型,现报告如下.
