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大黄素衍生物E11对T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4的作用及其机制研究
目的:探讨新大黄素(emodin)衍生物E11对人T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4的增殖、凋亡影响及其相应的可能作用机制.方法:应用MTT法绘制细胞生长曲线,集落培养法观察大黄素衍生物E11对Molt-4克隆形成的影响,DAPI染色法荧光显微镜检观察衍生物作用后的细胞形态变化,DNA片段化检测大黄素衍生物E11诱导细胞凋亡的作用,Western blot检测凋亡相关蛋白procaspase-9、procaspase-3、PARP、及PI3K/AKT、MAPK通路蛋白表达的变化.结果:大黄素衍生物E11对Molt-4细胞增殖具有明显的抑制作用,呈浓度依赖性(r=0.907),作用于Molt-4细胞48 h的半数抑制浓度(IC50)为1.381±0.15523 μmol/L.0.1μmol/L的E11即可抑制Molt-4细胞集落形成.DAPI染色后在荧光显微镜下能看到衍生物组Molt-4细胞出现典型的凋亡形态学改变.应用DNA片段化检测可观察到典型的DNA凋亡梯带.不同浓度大黄素衍生物E11作用于Molt-4细胞48 b,procaspase-9、procaspase-3、p-MAPK、p-AKT、mTOR、p-mTOR、p-4BEP1、p-P70表达均下调,MAPK、AKT、4EBP1、P70的表达变化不明显.结论:大黄素衍生物E11能够有效抑制细胞Molt-4增殖,并诱导其凋亡,大黄素衍生物E11抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡可能与PDK/AKT、MAPK信号通路被抑制有关.
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人急性淋巴母细胞白血病细胞株Molt-4遗传学特性的研究
本研究探讨人急性淋巴母细胞白血病细胞株Molt-4的遗传学特性,评价其在Flow-FISH方法检测细胞端粒长度中的应用价值.悬浮培养Molt-4细胞并进行规律传代,选取8代不同代数、处于对数生长期的Molt-4细胞进行研究.应用细胞计数法描绘细胞生长曲线并计算细胞倍增时间,流式细胞术检测细胞DNA倍体指数,常规G显带进行染色体核型分析,Southern blot检测细胞端粒长度.结果显示:Molt-4细胞的倍增时间为(1.315±0.062)d、DNA倍体指数为(2.085±0.0093)、端粒长度为(32.05±5.27) kb,不同代数之间无显著性差异(P值分别为0.931、0.888和0.935).染色体核型分析结果显示,Molt-4细胞染色体数量为91-99条,多数为超四倍体,并且具有稳定的、特征性染色体结构异常.结论:Molt-4细胞具有稳定的遗传特性和较长的端粒长度,可作为Flow-FISH的内对照细胞.
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膜受体介导的细胞凋亡与细胞周期的关系
背景与目的:线粒体介导的细胞凋亡大部分与细胞周期相关,但膜受体介导的细胞凋亡是否与细胞周期有关尚不清楚.本研究旨在观察膜受体介导的人类细胞凋亡与细胞周期特异性,阐明膜受体介导的细胞凋亡与细胞周期的关系.方法:用肿瘤坏死因子-α、抗Fas抗体分别处理指数生长期的Molt-4、Jurkat以及健康人外周血淋巴细胞;应用Annexin V/PI和API等方法,通过流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期特异性.结果:处于静止期的外周血淋巴细胞对凋亡诱导剂不敏感,凋亡率是6%～8%.Molt-4、Jurkat细胞以及加入植物血凝素刺激的外周血淋巴细胞经肿瘤坏死因子-α、抗Fas抗体诱导后出现了明显的细胞凋亡,凋亡率是15%～28%.膜受体介导的细胞凋亡主要发生在细胞周期的早G1期.结论:膜受体介导的细胞凋亡与细胞周期相关,具有细胞周期特异性.
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紫杉醇诱导急性白血病细胞S期特异性凋亡
背景与目的:化疗药物的细胞周期特异性是临床设计化疗方案的重要依据.一般认为,紫杉醇为G2/M期特异性化疗药物.但是近来的相关研究却表明,药物在体内的细胞周期特异性可能与体外不同.本研究旨在观察紫杉醇作用于不同生长状态下白血病细胞的细胞周期特异性有无改变.方法:利用流式细胞分析技术,对紫杉醇作用于人急性淋巴细胞性白血病细胞株Moh-4以及作用于17例急性白血病细胞所诱导的凋亡效应进行了观察.结果:紫杉醇诱导在对数生长状态下的Moh-4细胞株G2/M期特异性凋亡,在高密度状态下培养的Molt-4细胞为G0/G1期特异性凋亡,而在临床标本中诱导S期特异性凋亡.结论:紫杉醇在不同模型诱导不同的细胞周期特异性凋亡.与一般认为的不同,紫杉醇引起患者白血病细胞S期特异性凋亡.这些不同很可能与细胞处于不同的生长状态有关.
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细胞周期检测点的流式细胞术分析
背景与目的:真核细胞的细胞周期运行遵循着严格的时相次序,这种精密的延缓和强制的次序,由细胞监控机制--检测点来完成,检测点功能的丧失会导致肿瘤的发生.传统的细胞周期检测点分析多数基于群体细胞DNA直方图的流式细胞术.本研究以晚G1期检测点为模式,建立-种新的细胞周期检测点分析方法--Cyclins/DNA双参数流式细胞术,并评价应用该方法进行细胞周期检测点分析的可行性和优越性.方法:将紫外线照射诱导后的人类急性淋巴细胞型白血病细胞株(MOLT-4)于不同时间点收获固定,分两组进行流式细胞仪检测:一组用DNA直方图法,Modifit软件分析计算G0/G1期细胞总数;另一组应用Cyclin E/DNA双参数流式细胞术对G1晚期细胞Cyclin E的荧光强度、阈值及G0/G1各亚期细胞数量进行定量分析,并比较两组实验结果.结果:用DNA直方图法观察到紫外线照射后0～4 h G0/G1期细胞总数基本不变(5 300～5 500),6 h后开始上升(6 241,12.6%).而用Cyclin E/DNA双参数法观察到:(1)G1晚期细胞的Cyclin E荧光强度于照射后短时间内便开始变化,1 h上升为341.2(对照295.1,15.6%),6 h上升为577.6(95.7%),此时Cyclin E阈值上升到5.4(0 h为2.0);(2)G0/G1各亚期细胞数目变化趋势不明显:G1晚期细胞数6 h时略为减少(此时凋亡率为5.61%),G1早期细胞数缓慢上升.结论:Cyclin E/DNA双参数流式细胞术将Cyclin E的荧光强度及表达阈值定量化,对于细胞晚G1期检测点的检测比传统的DNA直方图法更为敏感和精确.
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硼替佐米联合多柔比星对淋巴母细胞淋巴瘤Molt-4细胞的作用
目的 研究硼替佐米联合多柔比星对淋巴母细胞淋巴瘤细胞株Molt-4的作用.方法 硼替佐米与多柔比星作用于Molt-4细胞后,采用CCK-8检测细胞的增殖,锥虫蓝染色计数细胞的活性,应用AnnexinV-FITC凋亡试剂盒及线粒体膜电位检测试剂盒经流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,用免疫标记经FCM检测细胞膜表面Fas的表达.结果 硼替佐米与多柔比星单药作用对Molt-4细胞具有生长抑制作用,生长抑制率与药物浓度呈正相关(r=0.863,P=0.027;r=0.915,P=0.038)；两者联合应用对细胞生长抑制有协同作用,48 h作用明显,抑制率达(57.24±0.10)％；联合应用细胞总凋亡率增高48 h达(23.08±1.25)％,与硼替佐米和多柔比星单药组(15.11±1.09)％和(15.96±0.81)％比较差异具有统计学意义(t值分别为0.046,0.037,均P＜ 0.05),早期凋亡率无明显变化(t值分别为0.052、0.048,均P＞0.05).线粒体膜电位检测显示联合作用较单药作用细胞凋亡率升高分别为15.84％、5.38％、5.52％,FCM检测药物联合作用后细胞表面Fas表达无明显改变(t=0.040,P＞ 0.05).结论 硼替佐米联合多柔比星能够有效抑制淋巴母细胞淋巴瘤细胞株Molt-4细胞增殖并诱导其凋亡,作用机制与活化线粒体凋亡途径有关,与外源性凋亡途径无关.
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半巢式甲基化特异性PCR在急性淋巴细胞白血病患者p15基因甲基化检测中的应用
目的 探讨半巢式甲基化特异性PCR( hn-MSP)的特性并了解p15基因甲基化和缺失在急性淋巴细胞白血病(ALL)发病中可能起到的作用.方法 运用hn-MSP方法和基因组硫化修饰PCR( BSP)后直接测序方法,分析在25例初诊或复发不同阶段ALL患者以及部分恶性血液病细胞株中p15基因的甲基化和缺失状态,以10名健康者或非恶性血液病患者为对照组.以Molt-4细胞株为阳性对照,以对照组单个核细胞为阴性对照,分析hn-MSP方法的敏感性和特异性.结果 hn-MSP产物克隆测序结果与BSP结果一致,hn-MSP检测p15基因甲基化敏感性可达到1×10-5.25例ALL患者p15基因甲基化发生率为68.0％(17例)；25例ALL患者中3例p15基因外显子1缺失.对照组p15基因无甲基化或缺失.结论 p15基因甲基化状态在ALL患者中有较高的检出率,hn-MSP对分析p15基因甲基化状态具有较高的特异性和敏感性.
