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NK细胞活化受体及配体在急性白血病患者外周血中的表达和脱离
本研究旨在从NK细胞活化性受体NKG2D及其相应配体-MICA/B、ULBP-1、2、3的表达和血清中脱离情况来探讨急性白血病患者NK细胞免疫防御功能损伤的可能机制.选择30例初发未治疗的急性白血病患者作为观察对象,10例健康者作为对照,应用流式细胞术检测白血病细胞表面MICA/B,ULBP-1、2、3表达水平,用ELISA法检测血清可溶性MICA、MICB(sMICA,sMICB)及可溶性ULBP1-3(sULBPI13)水平.结果表明,急性白血病患者NK细胞NKG2D的表达低于正常对照组;急性白血病患者白血病细胞表面不表达或弱表达MICA/B、ULBP1-3;急性白血病患者血清中游离的sMICA和sMICB水平均高于对照组,差异有统计学意义(p<0.01),血清sULBP1-3水平与时照组无明显差异.结论:急性白血病细胞表面MICA和MICB的脱离及ULBP表达缺乏可能是急性白血病细胞发生免疫逃逸的机制之一.
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MICB基因的克隆表达及其在抗体测定中的初步应用
目的：构建可行的MICB ( major histocompatibility complex class Ⅰ chain-related gene B)基因原核表达系统及蛋白质纯化体系,利用表达纯化蛋白建立ELISA方法初步应用于肾移植患者中MICB抗体的检测。方法外周血RNA经RT-PCR和特异性引物扩增获得MICB基因cDNA, MICB cDNA和原核表达载体pET-28a分别双酶切后连接构建重组表达载体,转染宿主菌E. coli BL21 DE3,IPTG诱导表达。亲和层析的Ni-NTA Spin纯化蛋白质,并通过Western blot鉴定。利用纯化蛋白建立ELISA法检测肾移植患者中MICB抗体。结果构建3个MICB常见等位基因2、3外显子的pET-28a-MICB重组表达体系,经Ni-NTA Spin纯化获得重组的MICB蛋白,Western blot鉴定。利用3个不同MICB蛋白质成功构建了ELISA方法,初步检测24份肾移植患者标本MICB抗体,显示不同的重组蛋白敏感性存在差异。结论本研究建立MICB基因克隆与体外表达技术,鉴定并纯化具有生物活性的蛋白质,同时建立MICB抗体检测的ELISA方法,为进一步研究MICB与移植免疫的关系提供基础资料。
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抗主要组织相容性相关蛋白MICA/B的单克隆抗体制备及应用
目的:制备抗主要组织相容性相关蛋白A/B(MICA/B)的单克隆抗体并对其特异性进行验证.方法:以重组MICA?012蛋白免疫小鼠后将其脾细胞与SP2/0细胞进行融合和筛选得杂交瘤细胞株,并用ELISA对其中9B10细胞株产生的单克隆抗体进行效价检测以及通过Western blot、Luminex、免疫荧光对其特异性进行检测.结果:获得6株杂交瘤细胞株,其中9B10细胞株产生单克隆抗体(mAb)9B10的低反应浓度为0.02 ng/μl,且mAb 9B10可应用于Western blot、Luminex和免疫组化荧光试验对MICA和MICB分子的检测.结论:成功获得可同时检测MICA和MICB表达的单克隆抗体9B10.
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流式荧光法检测抗MICB抗体的建立及初步应用
目的 建立稳定、快速和特异的抗MHC-I类链相关基因B(MICB)抗体流式荧光检测方法,了解MICB抗体在健康人群中的分布频率.方法 克隆、表达和分离纯化MICB融合蛋白,将其包被在Luminex微球表面,建立MICB抗体流式荧光检测方法.评价方法的线性范围、特异性、精密度、准确性,并用此方法检测500例健康人血清MICB抗体.结果 MICB抗体流式荧光检测方法在血清抗体浓度在3.1～100.0 μg/mL之间,具有较好的线性关系,相关系数为0.995.回收实验和重复实验结果显示,其回收率为97.4％～99.6％,批内变异系数为3.4％、2.9％,批间变异系数为4.5％、4.9％.该检测方法与MICA抗体无交叉反应.500例健康人血清中发现4例MICB等位基因特异性抗体.结论 MICB抗体流式荧光检测方法的特异性和灵敏度较高,结果稳定可靠.MICB抗体在器官移植中的作用需进一步研究.
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NKG2D-MICA/B在急性白血病免疫逃逸机制中的作用
目的 探讨NK细胞活化性受本(NKG2D)-MICA/B在急性白血病肿瘤免疫逃逸机制中的作用.方法 选择20例初发未治疗的急性白血病患者,应用流式细胞术检测白血病细胞表面MICA/B表达水平、ELISA法检测血清可溶性MICA及MICB(sMICA,sMICB)水平,同时检测患者NKG2D表达水平.选择5例健康人做为对照.结果 (1)20例急性白血病患者白血病细胞表面不表达或弱表达MICA/B,正常人淋巴细胞表面不表达MICA/B.(2)患者血清sMICA和sMICB水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).(3)患者NKG2D表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 白血病细胞表面MICA和MICB的脱落损伤基于NKG2D-MIC的抗白血病效应,可能是导致急性白血病免疫逃逸的机制之一.
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腹腔镜直肠癌根治术对血清MICA和MICB水平的影响及安全性分析
探讨腹腔镜直肠癌根治术的手术效果及对血清可溶性人类MHC-I类分子链相关基因A蛋白(MI-CA)、可溶性人类MHC-I类分子链相关基因B蛋白(MICB)水平的影响和安全性.选取2016年1月—2017年12月实施手术治疗的80例直肠癌根治术患者,根据手术方法分为腹腔镜组(腹腔镜直肠癌根治术治疗)和开腹组(开腹手术直肠癌根治术)各40例,对比两组的手术效果及手术前后的血清人类软骨糖蛋白39(YKL-40)、血红素加氧酶(HO-1)、MICA、MICB水平差异.腹腔镜组手术时间长于开腹组(P<0.05),术中出血量、术后3 d引流总量、住院时间均低于开腹组(P<0.05),两组淋巴结清除数目差异无统计学意义(P>0.05);术前,两组患者的血清HO-1、YKL-40、MICA、MICB水平差异无统计学意义(P>0.05);术后3 d,腹腔镜组血清HO-1、YKL-40、MICA均显著低于开腹组(P<0.05),MICB水平两组差异无统计学意义(P>0.05);腹腔镜组手术并发症率7.50％,低于开腹组的25.00％,差异有统计学意义(P<0.05).腹腔镜直肠癌根治术手术效果安全可靠、创伤小,对患者的血清HO-1、YKL-40影响更小,可降低MICA的表达.
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丙戊酸钠对胰腺癌细胞MICA/B表达的影响
目的 观察丙戊酸钠(VPA)对胰腺癌细胞NKG2D配体MICA和MICB表达的影响.方法 1 mmol/L的VPA孵育胰腺癌细胞24 h,流式细胞术及实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测VPA处理前后胰腺癌细胞株PC-2及BxPC-3细胞表面NKG2D配体MICA和MICB的表达.结果 胰腺癌细胞株PC-2及BxPC-3细胞表面MICA/B的阳性率分别为1.2％ ～1.5％、37.4％ ～ 42.5％；VPA处理后分别为3.2％ ～4.1％、62.4％ ～ 77.2％.PC-2及BxPC-3细胞MICA mRNA的表达水平为1.183 ±0.219、3.790 ±0.519,MICB mRNA的表达水平为1.020±0.025、3.267±0.183；经VPA处理后分别为3.173±0.456、16.700±0.534和2.543±0.385、14.730±0.370.结论 VPA可以有效上调胰腺癌细胞株PC-2及BxPC-3细胞NKG2D配体MICA/B蛋白及mRNA的表达.
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NKG2D配体在13种肿瘤细胞系中的表达及意义
背景与目的:NKG2D及其配体的相互作用在肿瘤免疫监视中起着非常重要的作用.本研究探讨NKG2D配体在13种肿瘤细胞系中的表达及其意义.方法:采用半定量RT-PCR法检测肿瘤细胞系中NKG2D配体的mRNA表达.应用MTT法检测人NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性,免疫组织化学技术和Western blot法检测肿瘤细胞中MHC I类相关蛋白A(MHC class Ⅰ chain-related A)蛋白表达情况.结果:13种肿瘤细胞系表达不同水平的NKG2D配体mRNA.其中Hep2细胞中MICA强阳性表达,HeLa、HepG2、MDA231、HT29、SGC7901、M21、K562、Jurkat细胞MICA表达阳性,而Caski、PG、HL-60和Raji细胞中MICA mRNA阴性.MICA和MICB的表达水平与NK细胞杀伤活性具有高度相关性(r=0.851,P＜0.001;r=0.652,P＜0.05).除ULBP3外,其余ULBP成员的表达水平与NK细胞杀伤均无相关性.结论:在6种人NKG2D配体中,MICA的表达水平与肿瘤细胞对NK细胞杀伤的敏感性关系为密切,肿瘤细胞MICA的表达水平可能决定着机体NK细胞抗肿瘤免疫应答的强弱.
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MIC基因的研究进展
MICA和MICB是MIC(MHC class Ⅰ chain-related Gene)家族的功能性基因,属于非经典的HLA-Ⅰ类基因,且具有较高的多态性.它们只在正常的胃肠道上皮和大多数上皮性肿瘤细胞表达.MICA/B为NKG2D的配体,与NKG2D/DAP10结合,激活NK细胞等发挥免疫监视作用;并且发现MICA/B与某些自身免疫性疾病(如阿狄森氏病、白塞氏病等)存在一定的相关性.
