首页 > 文献资料
-
细胞周期蛋白A1对SKM-1细胞增殖的影响及其在骨髓异常增生综合征中的作用
目的:通过小干扰RNA (siRNA)下调Cyclin A1的表达,观察其对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系SKM-1细胞增殖的影响并探讨其作用机制.方法:采用阳离子脂质体转染方法,在SKM-1细胞中转染Cyclin A1的siRNA;转染48 h后收集细胞,应用Western blot及RT-PCR测定转染效率;应用CCK-8方法检测细胞增殖,Westernblot及RT-PCR检测Cyclin A1基因沉默前后CDK2、RUNX1、SRSF2基因表达的水平.结果:转染Cyclin A1特异性siRNA 48 h后,Cyclin A1蛋白及mRNA表达水平显著下降(P＜0.01).下调Cyclin A1后,SKM-1细胞的增殖受抑,CDK2、RUNX1及SRSF2基因的蛋白及mRNA表达量均下调(P＜0.05).结论:Cyclin A1表达下调后,SKM-1细胞的增殖受到抑制,表明Cyclin A1可能是MDS治疗的潜在靶点之一.
-
细胞周期蛋白A1 mRNA在骨髓增生异常综合症中的表达及其临床意义
本研究探讨骨髓增生异常综合症(MDS)患者中细胞周期蛋白A1(cyclin A1)mRNA表达及其临床意义.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测56例骨髓增生异常综合症患者及10例正常人骨髓细胞中的cyclin A1表达及cdk2、p21cipl的mRNA表达.结果表明:MDS患者中cyclin A1的阳性率及mRNA表达水平(69.64%;0.964±1.879)均较正常人(0%;0.012±0.014)明显增高(p<0.01);在初治MDS患者中,MDS-RAEB组cyclinA1表达水平(1.895±1.769)明显高于MDS-RA组(0.629±1.583)(p<0.01);治疗后MDS患者的cyclin A1表达水平较治疗前明显降低(p<0.01).结论:MDS患者cyclin A1表达水平较正常人明显增高,其异常表达可能是影响MDS患者预后的指标之一.
-
吴茱萸碱对人结肠癌细胞周期阻滞及凋亡的影响
目的：探讨吴茱萸碱对人结肠癌细胞周期阻滞及凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人结肠癌HCT-116细胞分别加入吴茱萸碱1.5,3.0,6.0和12μmol·L－1继续培养24,48和72 h,CCK-8法检测吴茱萸碱对HCT-116细胞存活的影响；用流式细胞术检测吴茱萸碱对HCT-116细胞凋亡和细胞周期的影响；倒置显微镜镜下观察细胞形态变化；荧光显微镜观察 Hoechst 染色后细胞凋亡的形态学改变；Western蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白A1的表达及凋亡相关蛋白P53, Bax ,Bcl-2,激活型胱天蛋白酶3的表达。结果吴茱萸碱1.5,3.0和6.0μmol·L－1作用24,48和72 h后,HCT-116细胞增殖受到抑制( P<0.05),且呈时间( r时间＝0.744, P<0.05)和浓度( r浓度＝0.953, P<0.01)依赖性。吴茱萸碱作用HCT-116细胞48 h后, S期细胞由正常对照组的(13.9±7.0)％增加至(39.7±11.7)％(P<0.05)；细胞凋亡率由正常对照组的(4.2±3.0)％增加至(14.9±5.8)％(P<0.05)。光学显微镜下可见,随着药物浓度的增加,细胞的形态发生改变,胞膜破裂,产生细胞碎片,并出现大量漂浮细胞；Hoechst染色可见部分细胞出现细胞核固缩、核发白、染色质凝集等凋亡变化；P53、Bax和激活型胱天蛋白酶3蛋白表达增加, Bcl-2、细胞周期蛋白A1蛋白表达下降。结论吴茱萸碱能够通过下调细胞周期蛋白 A1的表达；激活 P53信号通路,下调Bcl-2、上调Bax,破坏Bcl-2/Bax的比例；激活胱天蛋白酶3,共同促进人结肠癌HCT-116细胞的凋亡。
-
初治急性白血病患者骨髓细胞S期激酶相关蛋白和细胞周期抑制蛋白及细胞周期蛋白表达及意义
目的 探讨S期激酶相关蛋白(S phase kinase associated protein,SKP2)、细胞周期抑制蛋白(cell cycle inhibitorprotein factor 27,P27)、细胞周期蛋白A1 (cyclin A1)及细胞周期蛋白E(cyclin E)在急性白血病患者骨髓细胞中的表达及其意义.方法 57例急性白血病患者,其中22例初治急性非淋巴细胞白血病(acute non-lymphoid cell leukemia,ANLL)患者给予DA(柔红霉素+阿糖胞苷)方案治疗,15例初治急性淋巴细胞性白血病(acute lymphatic leukemia,ALL)患者给予VDP(长春新碱+柔红霉素+泼尼松)方案治疗,10例复发ANLL患者给予MA方案(米托蒽琨+阿糖胞苷)方案治疗,10例复发ALL患者给予VA(长春新碱+阿糖胞苷)方案治疗;采用免疫组织化学法检测其骨髓细胞SKP2、P27、cyclin A1及cyclin E表达水平,并与20例非恶性血液肿瘤疾病患者(对照组)进行比较;分析急性白血病患者骨髓细胞SKP2、P27、cyclin A1及cyclin E表达阳性率与临床特征的相关性.结果 治疗3～4个疗程后,完全缓解9例(15.79％),部分缓解41例(71.93％),未缓解7例(12.28％);完全缓解者SKP2[(19.83±5.62)％]、cyclin E[(8.21±6.22)％]及cyclin A1[(5.96±4.83)％]表达水平明显低于部分缓解+未缓解者[(46.16±18.06)％、(41.19±12.16)％、(36.18±10.77)％](P＜0.05),P27表达水平[(26.04±7.08)％]明显高于部分缓解+未缓解者[(15.36±4.98)％](P＜0.05);治疗前,初治ANLL、初治ALL、复发ANLL、复发ALL患者骨髓细胞SKP2[(44.76±23.81)％、(39.75±21.64)％、(46.53±24.18)％、(43.28±24.92)％]、cyclin E[(27.18±11.56)％、(33.49±12.74)％、(40.32±12.35)％、(37.08±10.96)％]及cyclin A1[(34.47±15.64)％、(32.08±14.93)％、(36.28±13.67)％、(33.94±14.25)％]表达水平均高于对照组[(15.64±4.96)％、(5.83±4.72)％、(7.54±6.49)％](P＜0.05);复发ANLL、复发ALL患者骨髓细胞P27[(16.09±6.32)％、(18.37±6.38)％]表达水平低于对照组[(27.95±6.83)％],并低于初治ANLL和初治ALL患者,差异均有统计学意义(P＜0.05);初治急性白血病患者骨髓细胞SKP2、P27、cyclin E及cyclinA1阳性表达率在年龄、性别、乳酸脱氢酶水平上比较差异均无统计学意义(P＞0.05);白细胞计数≥30×109/L者SKP2阳性表达率(85.00％)高于白细胞计数＜30×109/L者(47.06％);经治疗完全缓解者SKP2阳性表达率(42.31％)低于部分缓解+未缓解者(81.82％),P27阳性表达率(69.23％)高于未缓解者(36.36％),差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 急性白血病患者细胞周期调控因子SKP2、P27、cyclin E及cyclin A1在表达水平明显高于非恶性血液肿瘤疾病患者,SKP2、P27阳性表达与初治患者治疗效果有关.
-
DNMT1和CCNA1在不同级别宫颈病变组织中的表达及临床意义
目的 探讨DNMT1和CCNA1在不同级别宫颈病变组织中的表达及临床意义.方法 选取病理学诊断的正常宫颈(NC)、宫颈低级别上皮内病变(LSIL)、宫颈高级别上皮内病变(HSIL)、宫颈鳞状细胞癌(SCC)组织各30例,采用Western blot法、实时荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测各组DNMT1、CCNA1 mRNA和蛋白的表达.结果 DNMT1 mRNA和蛋白表达量在LSIL、HSIL及SCC组织中均高于NC组织(F=117.93,P<0.05;F=61.24,P<0.05),随着病变程度的增加,DNMT1 mRNA和蛋白的表达水平逐渐上升(χ2趋势=26.25,P<0.05;χ2趋势=26.60,P<0.05).CCNA1 mRNA和蛋白的表达水平在HSIL、SCC组织中均低于NC、LSIL组织(F=77.04,P<0.05;F=57.15,P<0.05),随着病变程度的增加,CCNA1 mRNA和蛋白表达量逐渐下降(χ2趋势=64.19,P<0.05;χ2趋势=60.24,P<0.05).DNMT1、CCNA1 mRNA和蛋白在LSIL、HSIL、SCC组织中的表达呈负相关(r=-0.75、-0.56,P<0.05).结论 DNMT1 mRNA、蛋白的高表达,CCNA1 mRNA、蛋白低表达,二者可能与宫颈癌的发生发展有关.
-
洋地黄毒苷对肺癌NCI-H446与A549细胞增殖和周期的影响
目的：探讨洋地黄毒苷对肺癌NCI-H446与A549细胞增殖和细胞周期的影响，并初步探讨其可能的作用机制。方法：体外培养的NCI-H446与A549细胞分别经不同浓度(10、20、40、80、160 nmol/L)的洋地黄毒苷处理24、48和72 h后，采用MTT法检测细胞增殖情况，应用流式细胞术检测洋地黄毒苷处理细胞48 h后各组细胞周期分布，Western blot检测细胞中Cyclin A和P21蛋白表达水平。结果：与未经洋地黄毒苷处理的对照组相比，不同浓度(10、20、40、80和160 nmol/L)的洋地黄毒苷均可抑制 NCI-H446与A549细胞的增殖，均呈剂量和时间依赖性(P<0.05)，作用48 h后，洋地黄毒苷对NCI-H446与A549细胞的IC50值分别为61.26 nmol/L和110.73 nmol/L。流式细胞仪分析结果显示，随药物作用浓度增加，G0/G1细胞比例降低，S期细胞比例显著增加，与对照组相比，差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot分析结果显示，洋地黄毒苷能剂量依赖性的下调Cyclin A1蛋白表达和上调P21蛋白的表达(P<0.05)。结论：洋地黄毒苷可抑制体外培养的肺癌NCI-H446与A549细胞增殖，诱导细胞发生S期阻滞，其机制可能与细胞周期相关调控蛋白的表达有关。
