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流式-荧光原位杂交技术在骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34+细胞相对端粒长度检测中的应用
本研究旨在初步探讨流式-荧光原位杂交(Flow-FISH)技术在骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓细胞亚群端粒长度测定中的可行性.7例初治低危MDS患者为实验组,7例年龄、性别匹配的营养性贫血患者为对照组.收集肝素抗凝骨髓,以Molt-4细胞株为内对照细胞,以CD34-Alexa Fluor(R)647标记细胞表面抗原,高温变性DNA后与FITC标记端粒探针进行荧光原位杂交,DNA复染后,采用四色流式细胞术检测骨髓有核细胞和CD34+细胞的相对端粒长度(RTL).结果显示:实验组和对照组骨髓有核细胞经变性、杂交后,可进行细胞亚群的端粒长度检测.检测结果显示MDS患者骨髓CD34+细胞RTL显著短于骨髓有核细胞(P =0.001)；与对照组相比,MDS患者骨髓有核细胞RTL及CD34+细胞RTL均显著缩短(P分别为0.020和0.002).结论:通过耐热荧光抗体对特定细胞进行标记,Flow-FISH技术可用于细胞亚群RTL检测,值得进一步探索.
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长期吸烟加速肺组织细胞端粒长度缩短诱导衰老发生的研究
目的:观察长期吸烟对肺组织细胞衰老影响和端粒长度的变化.方法:将Wistar大鼠30只分为对照组和吸烟组,对照组15只,吸烟组15只,给予被动吸烟刺激6个月,利用荧光定量PCR的方法检测组织端粒的长度,western blot检测衰老相关的指标,Flow-Fish的方法检测香烟烟雾提取物(CSE)对于HPAEC (HPAEC)端粒长度的影响,免疫荧光法检测细胞中P53的表达同时利用β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)衰老染色进行辅助验证.结果:荧光定量PCR方法检测吸烟组端粒相对T/S比率平均为(8.99±1.70),正常组端粒的相对T/S比率平均为(17.3±0.65),吸烟组端粒长度明显短于正常组(P＜0.01),western blot检测组织中衰老相关蛋白P53,P21的表达量较对照组明显升高;免疫荧光表现可见加入CSE刺激的HPAEC中P53表达升高,Flow-fish检测CSE刺激HPAEC时间0h、12h、24h、48h及72h端粒相对长度为N、0.89N、0.723N、0.51N及0.48N.结论:长期吸烟可以诱导肺组织和HPAEC发生衰老表现为端粒长度缩短.
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端粒酶hTERT促进肿瘤细胞侵袭与转移及其机制研究
目的 观察hTERT基因修饰对人骨肉瘤细胞系U-2 OS生物学行为的影响.方法 采用脂质体法将克隆有人全长cDNA hTERT的真核荧光质粒(pIRES2-EGFP-hTERT)转染端粒酶阴性的人骨肉瘤U-2 OS细胞,经G418筛选,免疫组化和Westorn Blot鉴定后,检测其端粒酶活性的改变、生长周期以及生物力学的变化.结果 成功转染人真核荧光表达载体的U-2 OS细胞能有效抵抗G418, 并可有效表达hTERT蛋白,细胞内端粒酶活性明显增强, G1期细胞比例下降, S期细胞比例升高,并且还明显增强了对细胞外基质的粘附力.进一步采用Transwell小孔迁移实验检测发现, hTERT/U2OS侵袭能力明显增强.结论 转染hTERT基因后, U-2 OS细胞内可同时通过端粒酶途径延长端粒.hTERT基因修饰可促进细胞周期进程,促使细胞从G1期→S期.通过替代途径延长端粒的肿瘤细胞在hTERT基因修饰后,增殖能力及侵袭能力明显增强.
关键词： 端粒酶逆转录酶 端粒延长替代途径(ALT) 侵袭 相对端粒长度 转移 -
外周血相对端粒长度与头颈部鳞癌死亡风险的关联研究
目的:探讨中国汉族人群中端粒长度与头颈部鳞癌患者死亡风险的关联.方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测241例头颈部鳞癌患者外周血DNA端粒相对长度,结合临床信息和随访资料,进行端粒长度与头颈部鳞癌死亡风险的关联分析.通过Kaplan-Meier方法和Log-rank检验比较生存时间差异,COX比例风险回归模型估计风险比(hazardratio,HR)及95％CI.结果:将头颈部鳞癌病例按照端粒长度的三分位数分为3组后,端粒长度由短至长的第1、2和3组的平均生存期显著增加(分别为40.46、41.76和46.18个月,趋势性P=0.009).与相对端粒长度＜1.19的患者相比,相对端粒长度＞1.49的患者死亡风险显著降低(HR:0.40,95％CI:0.20～0.80).分层分析结果表明,较长的端粒长度与头颈部鳞癌患者死亡风险的关联在＜62岁的患者、女性、不吸烟者以及不饮酒者中更为显著.结论:端粒长度可能与头颈部鳞癌患者的预后存在一定关联,还需要其他更大样本的研究进一步验证.
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外周血白细胞DNA相对端粒长度与进展性脑梗死患病风险的关联性
目的 探讨外周血白细胞DNA相对端粒长度(TSR)与进展性脑梗死(SIP)的相关性.方法 选择郑州大学第二附属医院2016年1月至2018年1月收治的220例SIP患者为研究对象(SIP组),随机抽取来院体检健康人群220例为对照组.以实时定量PCR(qPCR)技术检测2组外周血白细胞DNA相对端粒长度,以对照组平均相对端粒长度的对数(LnTSR)中位数、三分位数和四分位数为分界值,对端粒长度进行二分组(M1组为较短组,M2组为较长组)、三分组(T1、T2、T3组,其中T1组为短组,T3组为长组)和四分组(Q1、Q2、Q3、Q4组,其中Q1组为短组,Q4组为长组),采用非条件logistic回归模型分析LnTSR与SIP风险的关联性.结果 SIP组患者外周血白细胞DNA相对端粒长度(2.83±0.82)较对照组(2.84±0.98)短,但差异无统计学意义(P>0.05).吸烟、动脉粥样硬化、高血压、冠心病和脑卒中史均是影响SIP发生的危险因素(P<0.05).Logistic回归分析显示,在四分组时(以Q2组为参照),短端粒长度的风险比值比(OR)为5.82(95％CI=2.75～14.38,P=0.001),长端粒长度的OR为3.53(95％CI=1.71～8.92,P=0.001),均呈明显U型趋势,其他分组计算各组OR值也都呈U型趋势,即过短或是过长的端粒长度都可能增加SIP的患病风险.结论 外周血白细胞端粒长度与SIP风险明显相关,端粒长度短或较长者患SIP的风险更高,可能是预测SIP患病风险的新指标.
