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间充质干细胞对脐血CIK/NK细胞CD69表达及培养体系中T调节细胞量比的影响
本研究通过Transwell细胞隔离培养体系探讨骨髓源间充质干细胞(MSC)对脐血(CB)来源细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)/自然杀伤细胞(NK)CD69的表达以及对培养体系中CD4+CD25+ T调节(T reg)细胞量比的影响.利用聚碳酯膜孔径0.4 μm的Transwell隔离细胞培养系统将实验组分为隔离培养(Transwell)组和直接混合(mix-ture)培养组;将MSC和CIK/NK细胞按1:20、1:50和1:100的比例分别在Transwell组和mixture组中进行隔离和直接混合培养,每组6个重复孔;培养48小时后通过流式细胞术检测各组CIK/NK细胞上CD69的表达以及培养体系中CD4+ CD25+ 细胞量比的变化.结果显示:加入MSC的实验各组CB-CIK细胞和NK细胞上表达的CD69比例均显著低于对照组(P值均<0.001).Transwell组中的CIK和NK细胞上表达的CD69,在MSC的高浓度组(1:20组)均显著低于低浓度组(1:50组和1:100组),其中CIK细胞组间的P值分别为0.046、0.020;NK细胞组间的P值均为0.000.mixture组中不同比例组间CIK细胞上表达的CD69无显著性差异,而NK细胞上CD69的表达在MSC的高浓度组(1:20组)均显著低于低浓度组(1:50组和1:100组).加入MSC的CB-CIK/NK细胞体系中的CD4+CD25+细胞的量比不论在Transwell还是mixture组中均显著高于对照组(P值均<0.01);在Transwell组中,CIK/NK细胞体系中的CD4+ CD256+ 细胞的量比在1:20组、1:50组均显著高于1:100组;在mixture各组中,CIK/NK细胞体系中的CD4+ CD25+ T调节细胞的量比均有显著性差异.MsC的高浓度组(1:20组),CIK/NK细胞体系中的CIM+ CD25+ 细胞量比在mixture组显著高于Tranawell组;而在MSC的低浓度组(1:50组和1:100组),2组体系中的CD4+ CD25+ 细胞量比无显著性差异.结论:MSC能以直接接触或间接作用的方式抑制异基因CIK/NK细胞的活化,这可能与MSC能上调培养体系中的CD4+ CD25+ T reg细胞量比有关,且这种作用与MSC的数量呈浓度依赖关系.
关键词： 骨髓源间充质干细胞 细胞因子诱导杀伤细胞 NK细胞 CD69 T调节细胞 -
人脐带和骨髓源间充质干细胞生物学特征的对比研究
为了对比人脐带组织源闻充质干细胞(UC-MSC)与骨髓源间充质干细胞(BM-MSC)的生物学特性,从足月胎儿脐带组织和成人骨髓中分离出间充质干细胞(MSC).用有限稀释法、流式细胞术、倒置显微镜检及RT-PCR等方法检测UC-MSC和BM-MSC的分离成功率、细胞产量、成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)、增殖特性、免疫表型和多向诱导分化能力等并对比性研究二者的生物学特性.结果表明,UC-MSC和BM-MSC的分离成功率均达100%;虽然由脐带组织中分离的有核细胞数低于骨髓(1×106/cm us 5.5×107/ml)(p=0.0002),但在培养第14天由脐带和骨髓中得到的贴壁细胞数无差异(8.6×105/cm 135 8.4×105/ml)(p＞0.05);UC-MSC形态、大多数分子表型、细胞周期状态、脂肪和骨诱导分化能力与BM-MSC相似,但UC-MSC的CFU-F比例(1:1609±0.18)高于BM-MSC的CFU-F比例(1:35700±0.01)(p＜0.05).此外,UC-MSC具有比BM-MSC更强的增殖能力(p＜0.05).UC-MSC HLA-ABC和CD106分子表达低于BM-MSC(p＜0.05).结论:脐带组织源间充质干细胞产量和绝大多数生物学特征与BM-MSC的相似,且具有比BM-MSC更高的增殖能力、较低的HLA-ABC和HLA-DR表达,UC-MSC有望成为BM-MSC理想的替代来源.
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骨髓和脂肪源多潜能间充质干细胞的比较研究
①目的 比较骨髓源间充质干细胞和脂肪源间充质干细胞的生物学特性.②方法 分离人的骨髓源间充质干细胞和脂肪源间充质干细胞进行体外培养,通过绘制生长曲线,比较细胞的增殖能力;利用流式细胞仪分析细胞表型,并与诱导培养比较细胞的分化潜能进行比较.③结果 脂肪源间充质干细胞与骨髓源间充质干细胞具有相当的生物学特性,且在增殖能力方面优于骨髓源间充质干细胞.④结论 人脂肪组织可能成为一种新的间充质干细胞来源.
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间充质干细胞治疗糖尿病足:问题与更好的应用
背景:糖尿病足是常见的糖尿病慢性并发症,糖尿病足患者的截肢风险明显增加.目前临床上常用治疗方案包括积极调控血糖、局部组织的清创、抗感染、血液循环重建等,疗效不够理想,仍需不断探讨更为有效的治疗手段.近期国内外多项研究表明间充质干细胞能促进糖尿病足愈合、改善临床症状.目的:对间充质干细胞在糖尿病足治疗中的作用机制及临床应用进行综述.方法:由第一作者检索2012年至2017年在 PubMed 和中国知网数据库发表的相关文献,英文检索关键词"mesenchymal stem cell,diabetic foot",中文检索关键词"间充质干细胞,糖尿病足治疗",检索文献类型为原创性论著、综述等.排除研究时间过早及与研究目的不符的文献,纳入44篇符合标准的文献进行综述.结果与结论:间充质干细胞治疗糖尿病足是一种有前景并且安全有效的治疗手段,不同来源的间充质干细胞在治疗糖尿病足中均有作用,骨髓来源间充质干细胞无免疫限制,肌肉注射有效.脐血来源间充质干细胞含量丰富,倍增时间短,存活时间长.脂肪来源间充质干细胞分布广,容易分离提取.胎盘来源间充质干细胞增殖能力好,腹腔内注射有效,其中骨髓源间充质干细胞可能是治疗糖尿病足佳的选择.
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人胎盘源与人骨髓源间充质干细胞的生物学特性的比较及负性协同刺激分子PD-L1的表达
目的:比较人胎盘源间充质干细胞(PMSCs)与人骨髓源间充质干细胞(BMSCs)的生物学特性,研究负性协同刺激分子PD-L1在胎盘源MSCs的表达和生物学意义.方法:采取酶消化法分离人胎盘组织,用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,分别进行贴壁分离和传代培养,通过倒置相差显微镜观察细胞形态,并用免疫荧光标记和流式细胞仪检测细胞表面标志的表达做比较性分析.混合淋巴细胞反应,3H-TdR掺入和PD-L1单克隆抗体阻断实验进行免疫功能检测.结果:在贴壁生长、呈成纤维细胞样形态、表达CD29、CD105、CD166和不表达CD34、CD45、CD80、CD86及HLA-DR分子以及向成脂肪细胞方向诱导分化等方面,人PMSCs与BMSCs细胞生物学特性表现相同或相似.表型分析发现PMSCs高表达PD-L1,而BMSCs较低表达PD-L1.PMSCs表达的PD-L1具有对T细胞体外增殖的抑制作用.结论:人胎盘源MSCs与人骨髓源MSCs有相似的细胞生长特性,却有不同的表达负性协同分子PD-L1的特性.
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异基因骨髓源间充质干细胞对BXSB小鼠T、B细胞的影响
目的:探讨异基因骨髓源间充质干细胞(Bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs )对BXSB小鼠T、B细胞增殖、活化及功能成熟等方面的影响.方法:采用3H-TdR掺入法、FACS法、ELISA等方法检测BMSCs对 BXSB 小鼠 T、B 细胞的影响.结果:BALB/c 小鼠的 BMSCs 在不影响 BXSB小鼠T细胞诱导活化的基础上抑制其诱导增殖;可降低由ConA 诱导的 CD4+IL-4+细胞的数量,而提高由ConA诱导的 CD4+IFN-γ+细胞数量.对于B细胞,BALB/c小鼠的BMSCs可以抑制其增殖、活化及IgG的分泌.另外,BALB/c小鼠的 BMSCs 可以抑制BXSB小鼠B细胞上CD40L的异位表达.结论:异基因BMSCs对自身免疫病小鼠的T、B细胞有一定的调节作用.
