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提高可利霉素药代动力学研究中微生物法检测灵敏度的研究
目的：研究影响可利霉素微生物法检测敏感度的因素，以提高血浆中测定可利霉素的灵敏度，为药代动力学研究中血药浓度的测定奠定基础。方法采用管碟法和纸片法，以抑菌圈大小为指标，考察检定菌液浓度，培养基配方，单、双层培养基检定平板，缓冲液加 NaCl，胎牛血清，血浆等多种因素对检测灵敏度的影响；采用有机溶剂从人血浆中萃取可利霉素等方法测定血药浓度。结果检定菌浓度、培养基配方、检定平板厚度对检测灵敏度影响显著，含 NaCl 的缓冲液有利于提高检测灵敏度，人血浆对检测灵敏度有一定影响。以藤黄八叠球菌作检定菌，其菌浓为 OD600=0.3~1.0，采用含牛肉蛋白胨0.5%，牛肉浸膏0.25%检定培养基制备单层检定平板，可以有效提高可利霉素检测灵敏度6倍；从血浆中萃取可利霉素，用纸片法进行测定，其低检测限度可达0.02μg/ml。结论所建立的从血浆中萃取可利霉素的纸片法显著提高了微生物法检测血浆中可利霉素的灵敏度，可用于可利霉素药代动力学研究中血药浓度的微生物法检测。
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HPLC法分析可利霉素的组分
可利霉素(kelimycin)又称必特螺旋霉素(bitespiramycin)、生技霉素(shengjimycin)是利用基因工程技术将碳霉素4"-异戊酰转移酶(4"-O-acyl-transferase)基因克隆到螺旋霉素产生菌中,在微生物体内定向酰化螺旋霉素(spiramycin,SPM)得到的以4"-异戊酰螺旋霉素(4"-O-isovalerylspiramycin,ISV-SPM)为主要组分的十六元环多组分大环内酯类抗生素[1-4].
关键词： 可利霉素 LC-MS 4"-异戊酰螺旋霉素 -
可利霉素的三级逆流萃取纯化
杂质依据极性的不同可分为强极性、中等极性和弱极性3类,在不同溶剂中的溶解性能有显著差异.本研究应用三级逆流离心萃取技术纯化可利霉素,考察洗涤条件对不同杂质的去除情况.结果显示,洗涤步骤对3类杂质均有去除效果,但对较强极性杂质的去除更有效.优化洗涤条件,以1％磷酸二氢钠溶液作为洗涤液,在20℃、水酯相比1:1.5、离心萃取器相对离心力为74×g时,总杂质分离效果较好.除杂率大于50％,较传统的错流萃取工艺提高15％.
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可利霉素菌渣作为氮源的再利用研究
目的 研究可利霉素菌渣作为氮源的再利用,以减少其污染.方法 基于菌渣的元素分析结果,以可利霉素效价为目标,在摇瓶中初步研究可利霉素菌渣作为氮源在可利霉素发酵中的效果.结果 元素分析表明,干菌渣的N元素含量为6.23%,接近于黄豆粉.菌渣作为唯一氮源时,4%菌渣加量的可利霉素效价高,达到1379U/mL,为对照的77%.通过正交试验优化后的发酵培养基配比为淀粉6%、菌渣4%、NH4NO30.6%、CaCO3 0.5%、MgSO4 0.1%、NaCl 1%、KH2PO4 0.01%.优化培养基中N含量为4.59g/L,与对照培养基中的N含量基本相同.可利霉素效价提高到1776U/mL,达到对照的88%.液相色谱分析表明,菌渣作为氮源时,可利霉素组分中的总异戊酰螺旋霉素含量有一定提高,而异戊酰螺旋霉素Ⅲ含量几乎没变化.结论 可利霉素菌渣作为氮源能够再用于可利霉素发酵生产,对于环境保护和降低生产成本具有重要的意义.
