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转基因番茄口服疫苗的研究进展
第1例转基因烟草表达链球菌变异株SpaA(surfaceprotein antigenA)蛋白疫苗的成功研制~([1]),开启了利用植物表达动物病原抗原蛋白的新纪元.1992年,Mason等~([2])提出了"转基因植物疫苗"的概念,标志着植物口服疫苗成为新药研发新途径的全面展开.
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植物口服疫苗研究及其在寄生虫病防治中的应用前景展望
WHO提出研制价廉且可口服的疫苗新策略,植物疫苗以其独具的可(饲)食性而无疑极具开发潜能.植物反应器具备完整的真核细胞表达系统,可大规模生产,可实现多基因的联合转化,尚可实施人兽共患病中对人和动物的同步防治等.该文在阐述了近年来植物口服疫苗研究的现状及其主要存在问题与应对策略的同时,对其在寄生虫病防治研究中的前景进行了分析.
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免疫佐剂的研究进展
目前正在开发的新型疫苗有合成肽疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗、转基因植物口服疫苗等,这些新型疫苗具有良好的抗原特异性和低毒性.但由于其抗原分子小、纯化程度高,疫苗的免疫原性较差.因此需要安全有效的佐剂来增强疫苗的效力.近年来佐剂的发展迅猛,多种新型佐剂层出不穷,人们对佐剂的作用机理亦有更深入的认识.本文对近年来佐剂的研究进展作一综述.
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新型防病武器:转基因植物口服疫苗
转基因植物口服疫苗是近几年科学家们研制成功的一种新型防疫武器。也许人们对它的情况尚不十分了解,现就这一领域的研究现状及发展前景作一简介。
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转基因植物口服疫苗的安全性问题所引发的思考
目前人们使用的疫苗主要是通过微生物发酵和动物细胞组织培养获得.由于其生产工序繁琐、成本高、价格昂贵,故而在需要疫苗的第三世界国家推广应用困难很大.1990年世界卫生组织(WHO)提出了"儿童疫苗计划(Children/s Vaccine Intiative Goals,CVI)",鼓励运用新技术,研究、开发和生产成本低、不用冷藏、易于使用的防病疫苗.恰值此时,以植物作为外源蛋白的生物反应器用于生产医药取得了一系列的成果.因此,当用转基因植物生产疫苗的思路被提出之后,转基因植物口服疫苗(edible vaccines produced in plants)的研究也开始蓬勃发展起来.
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伯氏疟原虫抗原基因高效植物表达载体的构建
目的 构建果实特异启动子驱动的含伯氏疟原虫裂殖子表面蛋白PbMSP4/5(Rlasmodium berghei merozoite surface protein 4/5)基因的植物表达裁体,并进一步提高抗原基因的表达量和免疫原性,为研制有效的转基因植物疟疾疫苗打下基础分别以提取的番茄和伯氏疟原虫Anka株的基因组DNA为模板,扩增番茄果实特异表达启动子E8的核心序列(约1.11Kb)及PbMSP4/5基因(704bp),并通过重叠区扩增基因拼接法(Gene splicing by overlap extension,SOE)PCR将二者拼接,拼接后的序列为EM,并合成霍乱毒素B亚基基因CTB,共同构建重组质粒pCAMBIAl302-EM-CTB,电击法转化根癌农杆菌GV3103.结果 重组质粒经酶切鉴定证明已成功转化.结论 实验成功构建了以番茄果实特异启动子驱动PbMSP4/5基因、以CTB为黏膜免疫佐剂的高效植物表达载体.
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伯氏疟原虫裂殖子表面蛋白PbMSP4/5基因高效植物表达载体的构建
[目的] 构建果实特异性启动子驱动的含伯氏疟原虫裂殖子表面蛋白PbMSP4/5(Plasmodium berghei merozoite sHrface protein 4/5)基因的植物表达载体,进一步提高目的基因的表达量,为研制有效的转基因植物疟疾疫苗打下基础. [方法] 分别以提取的番茄和伯氏疟原虫的基因组DNA 模板,通过SOE PCR,即重叠区扩增基因拼接法(gene splicing by overlap extension)拼接番茄果实特异表达启动E8的核心序列(约1.11 Kb)及PbMSP4/5基因(704bp),拼接后的序列为EM.用EcoRI和Hind Ⅲ分别双酶切EM序列及表达载体pCAMBIA1302,连接转化,得到的重_组质粒pCAMBIA1302-EM用电击法转化根癌农杆菌GV3103. [结果] 重组质粒经PcR及酶切鉴定证明已成功转化.[结论] 本实验成功构建了番茄果实特异性启动子驱动PbMSP4/5基因的植物表达载体.
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轮状病毒抗原蛋白G3VP7基因在花生中遗传转化的研究
匆提高外源蛋白的表达量和简化分离纯化过程,使用植物油体表达载体,以花生子叶节为转化受体,通过农杆菌介导将轮状病毒抗原蛋白G3VP7基因开展遗传转化的研究.从转化植株中随机选取11株表现Kan抗性植株进行PCR检测,结果有6株能扩增出特异性条带,阳性率为54.5%.对转基因植株进一步进行PCR-Southern 杂交分析,发现转基因植株中有6株PCR反应呈阳性,其中有3株PCR-Southern杂交有特异性目标带出现.结果表明,外源基因已经整合到了花生基因组上.该研究为以植物为载体生产廉价、高效的植物口服疫苗奠定了基础.