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双功能抗体联合阿糖胞苷介导T细胞对白血病细胞系Nalm-6的细胞毒作用
目的 研究阿糖胞苷(Cytosine arabinoside,Ara-C)对人白血病细胞系Nalm-6共刺激分子CD80 (B7-1)和CD86(B7-2)表达的影响,以及联合双功能抗体介导T细胞对Nalm-6体外杀伤作用.方法 MTT法测定Ara-C对Nalm-6细胞的细胞毒作用,FACS测定一定浓度阿糖胞苷作用Nalm-6细胞后CD80和CD86的表达变化,利用非放射性荧光法测定双功能抗体体外介导T细胞对靶细胞的杀伤效果,FACS和ELISA法分别测定活化的T细胞表达CD25、CD69和分泌IL-2的变化.结果 Ara-C作用Nalm-6细胞的IC10为0.25 μM,Nalm-6细胞经Ara-C刺激后CD80的表达明显高于对照组,在一定的效靶比范围内,随着效靶比的升高,双功能抗体介导T淋巴细胞对Nalm-6细胞的杀伤率也随之提高,联合Ara-C后效果显著.T细胞活化的表面标记CD25、CD69表达显著上调,IL-2的释放较对照组明显升高.结论 Ara-C可上调人白血病细胞系Nalm-6 CD80的表达,从而增强双功能抗体介导的T细胞对靶细胞的体外杀伤作用,更有效地活化T细胞.
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抗CD3/抗TNP双功能抗体的制备及对胃癌细胞系的杀伤作用
目的 以化学方法将抗CD3及抗三硝基苯(TNP)单克隆抗体交联为双功能抗体,研究此双功能抗体与任何TNP化的抗肿瘤单抗结合,介导对肿瘤细胞的杀伤作用.方法 分别纯化抗CD3及抗TNP单克隆抗体,经二硫苏糖醇(DTT)还原、偶联得到抗CD3/抗TNP双抗.TNP化抗胃癌单抗PD4、3H11与抗CD3/抗TNP双抗介导人淋巴细胞对胃癌细胞系MGC803的细胞毒作用.结果 双抗与TNP化的单抗结合,介导效应细胞对靶细胞的杀伤率高于未TNP化单抗,并随着效靶比的提高而升高.结论 抗CD3/抗TNP双抗能够与不同种类的TNP化单抗结合介导效应细胞杀伤靶细胞,有潜在的临床应用价值.
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抗人喉癌双功能抗体免疫电镜的定位研究
双功能抗体(bispecific antibody,BsAb)是一种含有两个结合抗原的功能区,能同时识别两个不同的抗原决定簇,其已在生物学的多种领域得到应用,并成为肿瘤的生物治疗的热点.
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单链抗体表达研究进展
单链抗体(single-chain antibody fragment,scFv)由抗体重链可变区和轻链可变区通过15～20个氨基酸的短肽(linker)连接而成.在目标特定的scFv上连接放射性核素、生物毒素、药物,将极大增强对靶细胞的杀伤能力.Kanter等[1]研究发现将个体基因型scFv和细胞因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子或免疫刺激肽组成融合蛋白,是一种有效治疗淋巴瘤的疫苗.Wang等[2]通过抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和抗单端孢霉毒素(ZEN)scFv基因融合.表达为抗DON和抗ZEN scFv,结果显示双功能抗体成功构建.并可应用于DON和ZEN检测.
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4-1BBL胞膜外区蛋白增强抗CD3/抗Pgp的抗肿瘤作用
目的 研究4-1BBL胞膜外区蛋白对抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体抗肿瘤作用的影响.方法 表达纯化人4-1BBL胞膜外区融合蛋白及抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体,体外CytoTox96检测联合应用人4-1BBL胞膜外区融合蛋白、抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体及PBL对靶细胞K562/A02细胞的杀伤作用,体内建立裸鼠移植瘤模型检测4-1BBL胞膜外区蛋白作为一种免疫调节蛋白,增强抗CD3/Pgp基于PBL的抗肿瘤效果.结果 4-1BBL胞膜外区融合蛋白在体外能够增强抗CD3/抗Pgp及PBL对靶细胞K562/A02的杀伤作用,在体内能够增强抗CD3/抗Pgp基于PBL的抗肿瘤作用.结论 可溶型4-IBBL可能成为一种有前景的生物治疗佐剂,有助于PBL更高效地靶向杀伤肿瘤细胞.
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靶向IL-12p40和TNF-α的双功能抗体可抑制小鼠银屑病发生
目的 构建具有能同时阻断白细胞介素12 (IL-12)/IL-23 p40与肿瘤坏死因子α(TNF-α)的双功能抗体,并对其生物学功能进行鉴定,观察其对小鼠银屑病的阻断效果.方法 根据已有的阿达木单抗(adalimumab)和优特克单抗(ustekinumab)蛋白序列,设计、构建并制备了全新的双功能抗体BiAU003、BiAU022和BiAU023.采用ELISA检测抗原抗体结合能力;用TNF-α和双功能抗体处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC),加入HTC标记的内皮白细胞黏附分子1(ELAM-1)抗体,经流式细胞术检测ELAM-1的表达量;用IL-12和双功能抗体处理经IL-2活化的人外周血单个核细胞(PBMC),并用ELISA检测上清液中γ干扰素(IFN-γ)的量;体外实验采用双功能抗体治疗IL-12和TNF-α诱导的银屑病小鼠,HE染色检测病变皮肤厚度.结果 3种双功能抗体对其相应的抗原都有较强的亲和力,能明显抑制ELAM-1蛋白的表达和IFN-γ的分泌,并且明显抑制小鼠的银屑病形成,其效果与现有的抗体药阿达木单抗和优特克单抗相当或更优.结论 新构建的3种双功能抗体BiAU003、BiAU022和BiAU023,是TNF-α和IL-12/IL-23 p40的阻断剂,能有效阻断小鼠银屑病形成.
关键词： 白细胞介素12亚基p40 肿瘤坏死因子α 双功能抗体 银屑病 -
4-1BBL胞膜外区蛋白对人外周血淋巴细胞体外活性的调节作用
目的:研究4-1BBL胞膜外区融合蛋白(ex4-1BBL)对人外周血淋巴细胞(PBL)体外活性的调节作用.方法:表达纯化人4.1BBL胞膜外区融合蛋白,台盼蓝计数观察其对淋巴细胞增殖的作用;CytoTox 96非放射性细胞毒试剂盒检测培养液的乳酸脱氢酶(LDH)水平,ELISA检测白介素-2(IL-2)水平.CytoTox 96检测其联合应用anti-CD3/anti-PgP微型双功能抗体及PBL对靶细胞K562/A02细胞的杀伤作用.结果:4-1BBL胞膜外区融合蛋白能够促进淋巴细胞增殖,减少细胞死亡,促进IL-2分泌;联合应用ex4-1BBL的淋巴细胞组的杀伤效率优于对照组.结论:ex4-1BBL可能成为增强淋巴细胞活性的重要免疫佐剂.
关键词： 4-1BBL 淋巴细胞 anti-CD3/anti-Pgp 双功能抗体 -
CD3/CD22双特异性单克隆抗体的研制
双特异性单克隆抗体(BsAb)是在单克隆抗体(mAb)基础上研制成的一种新型抗体,其特点是一个BsAb分子可同时识别两种不同的抗原决定簇.采用BsAb再导向效应细胞治疗肿瘤,是近年来较有希望的一种特异性免疫疗法[1].另外,也可用于免疫学检测和基础研究,实用性强.BsAb的制备有杂交瘤细胞融合技术、化学交联法和基因工程技术.我们采用杂交瘤技术,成功地研制出2株分泌CD3/CD22BsAb的四源杂交瘤细胞,并对其进行了特异性鉴定及再导向生物学活性的测定.
