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乳腺癌患者B7-CD28共刺激通路的研究
目的探讨乳腺癌患者外周血中CD28表达阳性的 T细胞数量和患者乳腺癌原代细胞表面B7-1(CD80)、B7-2(CD86)的表达水平,以探讨乳腺癌患者共刺激通路是否异常. 方法采用流式细胞技术检测乳腺癌患者外周血中CD28阳性T细胞与乳腺癌患者原代细胞B7分子的表达,并与乳腺良性疾病作比较. 结果乳腺癌患者CD28阳性的T细胞数明显低于对照组(t=2.879,P<0.05),特别是CD4/CD28双阳性T细胞数更低于对照组(t=3.017,P<0.001).乳腺癌患者原代细胞表面B7-1和B7-2表达水平都低于对照组. 结论乳腺癌患者外周血中T细胞低表达CD28分子,乳腺癌细胞低表达B7分子,从而影响B7-CD28共刺激通路,使T细胞不能有效地清除肿瘤细胞.
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共刺激分子在实体性肿瘤中的研究综述
抗肿瘤免疫以细胞免疫为主,共刺激分子发挥了相当重要的作用,其中B7-CD28共刺激分子是当今研究的热点.本文对B7-CD28分子的结构、功能及其在肿瘤免疫研究中的进展作一综述.
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B7共刺激分子在八种人类恶性血液病细胞系中的表达及意义
目的探讨B7共刺激分子在人类恶性血液病细胞系中的表达及意义.方法用质粒DNA的扩增、脂质体介导法转基因,流式细胞术、RT-PCR等方法检测U937、K562、CEM、DOUDI、GM、PEER、Jurkat、Raji等细胞转基因前后B7-1分子的表达.结果 U937、K562、CEM、DOUDI、GM、PEER、Jurkat、Raji等8种恶性血液病细胞株均表达或高表达HLA抗原和B7-2分子,低表达或不表达B7-1分子,转基因后细胞株B7分子的表达明显增强, 转B7-1基因后肿瘤细胞刺激T细胞表达高水平的IL-2 mRNA.结论大多数人类恶性血液病细胞株均不表达或低表达B7分子,提示B7-1可能在肿瘤免疫中起主要作用.
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抗B7分子抗体诱导T细胞免疫耐受研究
目的联合应用抗B7分子的单克隆抗体(单抗)体外诱导T细胞免疫耐受模型,并探讨B7分子在T细胞免疫耐受中的作用及其机制.方法体外联合应用抗B7单抗诱导T细胞免疫耐受,3H-TdR掺入法检测T细胞增殖,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测T细胞细胞因子mRNA合成.为了排除其它粘附分子的作用,应用联合转染DR7或(和)B7分子基因的CHO细胞系作为人工抗原递呈细胞(APC)介导混合淋巴细胞反应(MLR).结果 T细胞增殖实验显示,B7-1(CD80)和B7-2(CD86)单抗单独应用可以部分阻断MLR,其中CD86单抗的阻断作用更为明显.两种抗体联合应用时,可以明显阻断MLR.RT-PCR显示:应用抗B7单抗联合阻断后24 h,IFN-γ及IL-2 mRNA合成明显减少,而IL-4 mRNA合成较前明显增加.人工APC介导的MLR显示,仅有第一信号(DR7)时也可以使T细胞增殖,但需要达到一定的信号强度;给予DR7信号同时给予共刺激信号CD80可以增强T细胞反应,增强效应可以被抗CD80单抗所阻断.结论 B7分子在T细胞免疫反应中具有重要的作用,可以非特异性增强T细胞免疫反应.阻断B7/CD28信号传导通路,可以诱导T细胞免疫耐受形成,其中CD86分子的作用可能更为重要.抗B7单抗诱导的T细胞无反应性后,向Th2方向分化,这可能是阻断B7分子共刺激后T细胞免疫耐受形成的机制之一.
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阿糖胞苷对抗CD3/抗P-gp双功能抗体介导的T淋巴细胞免疫杀伤多药耐药白血病细胞的影响
目的 探讨阿糖胞苷对抗CD3/抗P-gP双功能抗体介导的T淋巴细胞免疫杀伤多药耐药白血病细胞的影响.方法 采用抗E-tag亲和层析柱分离纯化抗CD3/抗P-gp微型双功能抗体,用阿糖胞苷刺激K562和K562/A02细胞,并用流式细胞术检测K562和K562/A02细胞B7-1、B7-2分子的表达,用CytoTox 96非放射性细胞毒试剂盒检测阿精胞苷对抗CD3/抗P-gp双功能抗体介导的T淋巴细胞免疫杀伤K562/A02细胞的影响.结果 经阿糖胞苷刺激的K562和K562/A02细胞B7-1、B7-2分子的表达较未刺激的对照组明显升高.阿糖胞苷对抗CD3/抗P-gp双功能抗体介导的T淋巴细胞在效靶比0.39:1～25:1范围内,激活T细胞对耐药白血病细胞的杀伤率为(16.44±1.20)%～(60.49 ± 2.90)%,其杀伤率与效靶比和抗体浓度呈依赖关系(P＜0.05).结论 阿糖胞苷可明显提高抗CD3/抗P-gp双功能抗体介导的人T淋巴细胞对高表达P-gp抗原的耐药白血病细胞的杀伤效应.
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钙离子载体上调K562细胞B7分子表达
目的:探讨钙离子载体(Calcium ionorphore,CI)对慢性髓系白血病细胞株K562细胞表面B7分子表达的上调作用.方法:将生长状态良好的K562细胞在含CI(375 ng/ml)的培养基中培养,以不含CI培养的K562细胞作对照组.培养0、48和96小时后台盼蓝拒染法检测细胞数和细胞存活率,流式细胞仪检测培养前及培养96小时后细胞表面B7分子的表达情况,MTT比色法检测其刺激同种异体T细胞增殖的作用.结果:K562细胞表面B7分子缺如或低表达;用含CI的培养基培养96小时后,可显著上调B7分子的表达,且能明显激活同种异体T细胞.培养前后细胞形态无明显变化,加CI培养的K562细胞较不加CI培养的细胞生长缓慢.结论:慢性髓系白血病细胞株K562细胞表面存在B7分子表达缺陷,CI可上调其B7分子.CI可能有抑制K562细胞生长的作用.
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131 B7介导基因治疗恶性肿瘤进展
B7分子在免疫基因治疗恶性肿瘤中发挥重要作用,利用B7免疫基因治疗恶性肿瘤包括制备肿瘤疫苗,使B7+肿瘤细胞本身成为抗原提呈细胞,制备B7抗体融合蛋白以及制备抗所抗体免疫毒素等,这些方法均可以增强机体对肿瘤细胞的免疫杀伤作用.本文就近几年在这方面的研究进展作简要综述.
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趋化因子和B7分子联合应用抗肿瘤的研究进展
恶性肿瘤的发生常常是多个基因改变的结果,单一基因治疗的抗肿瘤效应往往十分有限,联合应用不同特性的细胞因子或趋化因子抗肿瘤是近年来的研究热点.本文着重综述趋化因子和B7分子在肿瘤基因治疗中的联合应用.B7分子是重要的共刺激分子,可为T细胞激活提供第二信号;趋化因子可通过趋化免疫活性细胞,部分趋化因子还可抑制肿瘤血管生成,从而产生抗肿瘤效应.共转染趋化因子和B7分子除通过"招引-活化"的机制外,还可抑制CD4+CD25+调节性T细胞亚型向肿瘤局部浸润,进而改善肿瘤局部免疫抑制状态;同时可抑制肿瘤血管生成,从而通过多个不同的途径,产生更强的抗肿瘤效应.但趋化因子具有抗肿瘤和促肿瘤双向性,因此选择合适的趋化因子与B7分子联合应用是至关重要的.
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rhGM-CSF联合rhIL-4对髓性白血病细胞B7分子表达的上调作用
目的探讨GM-CSF联合IL-4对髓性白血病细胞表面B7分子表达的上调作用.方法从初诊急性或慢性髓性白血病患者的外周血中分离出单个核细胞(PBMNC),用rhGM-CSF联合rhIL-4共同孵育7～10 d;通过流式细胞仪检测细胞因子诱导前后细胞表面B7分子的表达.结果未经细胞因子诱导的白血病细胞表面B7分子低表达或缺如,经过GM-CSF联合IL-4 7～10 d的诱导,可显著上调B7分子的表达.结论髓性白血病细胞表面存在B7分子表达缺陷;用GM-CSF联合IL-4进行诱导是纠正这种缺陷的一条途径.
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胃癌患者B7-CD28共刺激通路的研究
目的探讨胃癌患者外周血中CD28+T细胞数量和患者胃癌原代细胞表面B7的表达水平,以探讨胃癌患者共刺激通路是否异常.方法采用流式细胞术检测胃癌患者外周血中CD28+T细胞与胃癌患者原代细胞B7分子的表达,并与胃良性疾病作比较.结果胃癌患者CD28+T细胞数低于对照组(P＜0.01).胃癌患者原代细胞表面B7-1(CD80)、B7-2(CD86)表达水平低于对照组(P＜0.01).结论胃癌患者外周血T细胞低表达CD28分子,胃癌细胞低表达B7分子,从而影响B7-CD28共刺激通路,使T细胞不能有效地清除肿瘤.
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B7分子在系统性红斑狼疮发病和治疗中的意义
B7分子与CD28/CTLA4结合后产生的共刺激信号是T细胞活化和自身抗体产生的必要条件.系统性红斑狼疮患者体内抗原递呈细胞表达B7分子异常,并与系统性红斑狼疮发病机制有关.阻断B7/CD28信号通路在系统性红斑狼疮动物模型上取得了良好的疗效,因而可能具有潜在的临床应用价值.
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冷冻影响肝癌细胞HLA和B7分子表达的实验研究
目的探讨冷冻治疗后机体免疫功能提高的机制.方法应用流式细胞仪检测人肝癌细胞经0℃或-20℃冷冻后,HLA和B7分子表达率和平均荧光强度的变化.结果0℃组与对照组比较,HLA-Ⅰ分子和B7-2分子的表达率和平均荧光强度均无明显变化;HLA-Ⅱ分子和B7-1分子的表达率增高,平均荧光强度增强.-20℃组与对照组比较,HLA-Ⅰ、HLA-Ⅱ、B7-1和B7-2分子的表达率均增高,平均荧光强度均增强.-20℃组和0℃组比较,HLA-Ⅱ和B7-1分子的表达率和平均荧光强度均无显著性差异;HLA-Ⅰ和B7-2分子表达率均增高,平均荧光强度均增强.结论0℃和-20℃冷冻可增强人肝癌细胞HLA和B7分子的表达,这可能是冷冻治疗提高机体免疫功能的机制之一.
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CD28/CTLA4-B7协同刺激分子与角膜移植免疫
角膜移植排斥反应是移植失败的主要原因.致敏T淋巴细胞在角膜移植排斥反应中起着重要的作用,是角膜排斥过程中的主要效应细胞.而T淋巴细胞的激活需要两个信号刺激, 即除了通过APC递呈MHC处理过的抗原给抗原特异性T细胞提供第1信号外,还需协同刺激分子作为辅助信号的协同作用,才能使T细胞产生正常的免疫应答.如果缺少协同刺激分子的第2 信号,将会导致调节性T细胞的无反应性或特异性免疫耐受.
关键词： 角膜移植 协同刺激分子 B7分子 细胞毒T细胞相关抗原 -
双功能抗体联合阿糖胞苷介导T细胞对白血病细胞系Nalm-6的细胞毒作用
目的 研究阿糖胞苷(Cytosine arabinoside,Ara-C)对人白血病细胞系Nalm-6共刺激分子CD80 (B7-1)和CD86(B7-2)表达的影响,以及联合双功能抗体介导T细胞对Nalm-6体外杀伤作用.方法 MTT法测定Ara-C对Nalm-6细胞的细胞毒作用,FACS测定一定浓度阿糖胞苷作用Nalm-6细胞后CD80和CD86的表达变化,利用非放射性荧光法测定双功能抗体体外介导T细胞对靶细胞的杀伤效果,FACS和ELISA法分别测定活化的T细胞表达CD25、CD69和分泌IL-2的变化.结果 Ara-C作用Nalm-6细胞的IC10为0.25 μM,Nalm-6细胞经Ara-C刺激后CD80的表达明显高于对照组,在一定的效靶比范围内,随着效靶比的升高,双功能抗体介导T淋巴细胞对Nalm-6细胞的杀伤率也随之提高,联合Ara-C后效果显著.T细胞活化的表面标记CD25、CD69表达显著上调,IL-2的释放较对照组明显升高.结论 Ara-C可上调人白血病细胞系Nalm-6 CD80的表达,从而增强双功能抗体介导的T细胞对靶细胞的体外杀伤作用,更有效地活化T细胞.
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细胞毒T淋巴细胞抗原-4与支气管哮喘
T细胞激活在哮喘形成和发展中起着主导作用.T细胞激活需要T细胞受体-APC抗原肽复合物与B7与CD28/CTLA-4共刺激途径共同作用完成.细胞毒T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)在阻止T细胞的活化增殖,调节CD4+与CD8+T细胞的平衡,影响Th2分化中发挥主导作用.支气管哮喘存在细胞因子紊乱,通过对CTLA-4的研究可望为支气管哮喘的免疫治疗研究开辟新的路径.
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B7在血液病细胞系中的表达及对T淋巴细胞的免疫反应
目的 探讨B7共刺激分子在人类恶性血液病细胞系中的表达以及激活T淋巴细胞的免疫反应.方法 用流式细胞术检测HL-60、NB4、Jurkat、U937、Raji、Daudi、K562等细胞HLA抗原和B7分子表达,同时检测经Ara-C刺激前后B7分子的表达,用RT-PCR方法检测经Ara-C刺激前后激活T淋巴细胞分泌细胞因子IFN-γ mRNA.结果 HL-60、NB4、Jurkat、U937、Raji、Daudi、K562等恶性血液病细胞株均表达或高表达HLA抗原和B7-2分子,低表达或不表达B7-1分子,经Ara-C刺激后细胞株B7分子的表达明显增强,并能有效地激活T淋巴细胞表达高水平的IFN-γ mRNA.结论 大多数人类恶性血液病细胞株均不表达或低表达B7分子,但是B7-1可能在肿瘤免疫中起重要作用.
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B7分子与血液系统恶性肿瘤的关系
人体抗肿瘤免疫是以T细胞介导的细胞免疫为主,B7分子及其受体传导的共刺激信号是T细胞活化增殖的重要辅助信号.干预共刺激途径,诱导T细胞肿瘤特异性免疫杀伤反应或诱导T细胞抗原特异性无能状态,是目前自身免疫疾病、肿瘤和器官移植治疗的研究热点.在血液系统恶性肿瘤的治疗领域,免疫基因治疗、肿瘤疫苗、抗B7-1单抗等的尝试正在积极展开.
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小鼠肺癌B7疫苗细胞FLB2C诱导的抗肿瘤免疫应答
目的研究小鼠肺癌细胞与活化B淋巴细胞融合的疫苗细胞FLB2C诱导细胞免疫反应情况.方法用母本细胞LA795作对照,采用体外混合淋巴细胞培养,观察FLB2C细胞刺激T细胞增殖情况;通过CTLL细胞MTT法测定FLB2C刺激T细胞产生分泌IL-2的作用;用FLB2C免疫小鼠,观察疫苗体内诱导小鼠CTL活性的能力.结果 FLB2C细胞在体外刺激T细胞增殖的作用明显比LA795强;FLB2C能刺激T细胞分泌IL-2,而LA795则不能;FLB2C细胞在体内能诱导CTL活性,其诱导的CTL在体外对FLB2C细胞和LA795的杀伤率分别为34%和25.3%,而LA795诱导的CTL对FLB2C和LA795杀伤率分别为10.5%和12.25%,两者的杀伤率有显著性差异.结论 FLB2C细胞在体内外均能刺激T细胞免疫应答,其能力明显强于未融合的LA795小鼠肺癌细胞.将其作为疫苗细胞将有可能通过提高机体免疫应答而达到治疗肺癌的效果.本研究为进一步探讨该疫苗的应用价值奠定了免疫学基础.
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B7分子在DSS诱导的小鼠结肠炎中的作用研究
目的研究B7分子在DSS诱导的小鼠结肠炎症中的作用.方法用免疫组化法检测急、慢性DSS小鼠结肠炎模型中结肠粘膜B7-1和B7-2的表达.结果结肠组织中B7-1、B7-2均为胞浆阳性.急性、慢性模型组肠粘膜B7-1+细胞百分比均高于对照组,而急性组与慢性组之间无显著差异.急性组肠粘膜B7-2+细胞百分率与对照组无显著差异,而慢性组肠粘膜B7-2+细胞百分比高于急性组和对照组.结论 B7-1、B7-2异常表达可能均与DSS模型继发的肠粘膜免疫紊乱和肠组织病损有关.
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小鼠BTLA胞外功能区基因克隆表达及其对DC表面B7分子表达的影响
目的: 研究重组谷胱甘肽S-转移酶(GST)-小鼠B/ T细胞弱化因子包外功能区(mBTLAext)融合蛋白(GST-mBTLAext)对小鼠树突状细胞系DC2.4表面B7分子表达的影响.方法: 采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mBTLA cDNA.将其胞外功能区基因克隆入原核表达载体pGEX-4T-2中,构建重组表达质粒pGEX-4T-2/mBTLAext并转化E.coli BL21 (DE3),以1 mmol/L的IPTG诱导表达.提取包涵体,经变性、负性后,采用Glutathione Sepharose 4B柱纯化可溶性的GST-mBTLAext.将不同浓度的GST-mBTLAext加入到DC2.4的培养体系中,采用流式细胞术检测其对DC上B7-1和B7-2表达的影响.结果: 成功地克隆了mBTLA基因,并构建了重组原核表达载体.变性、复性,经Glutathione Sepharose 4B柱纯化,获得了可溶性的GST-mBTLAext融合蛋白.经SDS-PAGE鉴定表明,融合蛋白的相对分子质量(Mr)为43 000,同预期的结果一致.流式细胞术检测显示,GST-mBTLAext可上调DC2.4上B7-1的表达并呈剂量依赖性,这一作用可被抗GST-mBTLAext血清阻断.未检测到GST-mBTLAext DC2.4上B7-2的表达有影响.结论: BTLA对DC2.4表面B7分子表达的上调可能是BTLA-HVEM途径反向信号对DC作用的结果,对进一步研究其对DC生物学行为的影响及其分子机制具有重要的理论意义.
关键词： 树突状细胞 B/T淋巴细胞弱化因子 B7分子 原核表达
