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可溶性小鼠BTLA对树突状细胞表面B7-1和B7-2表达的影响
目的 研究可溶性小鼠B/T淋巴细胞弱化因子(murine B and T lymphocyte attenuator,mBTLA)-人IgG1 Fc融合蛋白(mBTLA-hIg)对树突状细胞表面共刺激分子表达的影响.方法 克隆mBTLA基因,构建mBTLA胞外功能区和人IgG1 Fc融合基因的真核表达载体(pmBTLA-hIg),并采用脂质体转染法,将pmBTLA-hIg质粒转染小鼠树突状细胞系(DC2.4).采用RT-PCR、ELISA和Western blot分别检测pmBTLA-hIg质粒转染DC中mBTLA基因mRNA的表达及细胞培养上清中mBTLA-hIg融合蛋白的表达;采用流式细胞术检测pmBTLA-hIg质粒转染对DC2.4表面共刺激分子B7-1(CD80)和B7-2(CD86)表达的影响.结果 成功克隆了小鼠BTLA基因,并构建了真核表达载体;mBTLA-hIg融合基因转染的DC高表达mBTLA-hIg融合蛋白,并可结合到DC表面.表达可溶性mBTLA-hIg融合蛋白的DC2.4表面B7-1的表达上调,B7-2的表达下调,而且这种改变可被兔抗GST-mBTLA血清阻断.结论 可溶性mBTLA-hIg融合蛋白对DC细胞表面B7分子的表达具有调节作用,可能是BTLA反向信号作用于DC的结果.
关键词： 树突状细胞 共刺激分子 B/T淋巴细胞弱化因子 疱疹病毒进入介质 -
BTLA-HVEM通路阻断对树突状细胞功能影响的体内外研究
目的 探讨阻断BTLA-HVEM(B/T淋巴细胞弱化因子疱疹病毒进入介质)通路对树突状细胞功能的影响和相关免疫学机制.方法 构建小鼠BTLA胞外功能区的真核表达载体psBTLA,转染CHO细胞;HSP70-TC-1肿瘤抗原肽刺激小鼠骨髓来源DCs,流式细胞仪检测处理后DCs表面BTLA、HVEM的表达,同时给予转染了psBTLA质粒的CHO细胞的培养上清处理后,检测DCs表面B7-1的表达,ELISA检测上清中IL-12的分泌;处理后的DCs刺激脾细胞,检测淋巴细胞增殖和细胞因子分泌;检测psBTLA体内转染对宫颈癌细胞系TC-1成瘤小鼠DCs表达B7-1和肿瘤生长的影响.结果 成功构建小鼠BTLA胞外段的真核表达载体psBTLA,获得了稳定转染psBTLA的CHO细胞,在其培养上清检测到BTLA胞外段(sBTLA)的表达.DCs经抗原肽刺激后BTLA、HVEM表达均上调,加入含sBTLA的上清处理后上调B7-1,上清中分泌的IL-12增加,与脾细胞共培养时促进细胞增殖和IL-2、IFN-γ的分泌;体内基因转染psBTLA促进DCs表达B7-1以及抑制肿瘤生长.结论 通过sBTLA阻断BTLA-HVEM共抑制通路,可以进一步促进DCs的功能,更好地激活淋巴细胞,促进抗肿瘤免疫应答.
关键词： B/T淋巴细胞弱化因子 疱疹病毒进入介质 树突状细胞 共刺激分子 -
B/T细胞弱化分子-CD28超家族一个新的共抑制分子的研究进展
B/T细胞弱化分子(BTLA)是近发现的CD28家族共抑制分子,主要表达于B细胞、T细胞和抗原递呈细胞表面.BTLA的配体是TNF超家族成员疱疹病毒进入介质(HVEM).HVEM-BTLA信号途径对T、B细胞的活化起负调节作用,在调节机体免疫应答,维持自身免疫稳定中起着十分重要的作用.深入研究BTLA的生物学功能及其作用机制对探寻治疗肿瘤、自身免疫性疾病、移植排斥反应、变态反应性疾病等的新干预措施具有重要意义.
关键词： B/T淋巴细胞弱化因子 疱疹病毒进入介质 共抑制分子 程序死亡受体-1 -
小鼠BTLA胞外段腺相关病毒载体的构建和表达
目的 构建小鼠B/T淋巴细胞弱化因子(BTLA)胞外段的腺相关病毒载体,并感染中国仓鼠卵巢上皮细胞(CHO)进行真核表达.方法 从C57BL/6小鼠脾脏中提取总RNA,经RT-PCR 扩增BTLA 胞外段,然后将其克隆到腺相关病毒载体的骨架质粒中,构建重组骨架质粒psBTLA.重组质粒经双酶切鉴定及测序正确后,与pHELP质粒以及pRC质粒3质粒共转染293T细胞,收获含病毒的上清后用氯仿-PEG8000的方法进行纯化浓缩,再用浓缩后的病毒液感染CHO细胞,并用SDS-PAGE和Western blot检测BTLA胞外段的表达.结果 获得长度为502 bp的小鼠BTLA胞外段基因,经测序证实其序列正确.含有BTLA胞外段基因的腺相关病毒载体感染CHO细胞后,SDS-PAGE和Western blot分析证实感染的CHO细胞可表达出约21 kD的BTLA胞外段蛋白.结论 成功构建小鼠BTLA胞外段基因的腺相关病毒载体,并感染CHO细胞后表达出相应蛋白,为进一步研究BTLA胞外段的功能效应奠定实验基础.
关键词： B/T淋巴细胞弱化因子 腺相关病毒 基因克隆 真核表达 -
B/T淋巴细胞弱化因子在急性哮喘小鼠模型CD4+T淋巴细胞表达的研究
目的 研究负向共刺激受体B/T淋巴细胞弱化因子(Band T lymphocyte attenuator,BTLA)在急性哮喘小鼠模型脾脏CD4+T淋巴细胞中的表达特点及地塞米松对BTLA表达的影响.方法 18只BALB/C6小鼠按随机数字表法分为空白对照组、哮喘模型组、地塞米松治疗组.OVA联合AL(OH)3第1和第8天分别致敏和第15～ 17天激发,建立急性哮喘模型.HE染色观察3组气道炎症浸润情况；Elisa检测血清IL-4和IFN-γ；流式细胞术检测小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞BTLA表达变化.结果 HE染色哮喘组肺部小气道和血管周围炎症细胞浸润(EOS)明显,上皮细胞增生；流式细胞仪检测哮喘组脾脏CD4+T淋巴细胞表面BTLA表达较对照组明显增高(P＜0.01),BTLA在地塞米松治疗组比哮喘模型组和空白对照组均增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 BTLA在急性哮喘模型表达上调参与炎症调控；地塞米松能进一步上调BTLA表达,抑制气道炎症.
关键词： 哮喘 B/T淋巴细胞弱化因子 CD4+T细胞 地塞米松 -
小鼠BTLA胞外功能区基因克隆表达及其对DC表面B7分子表达的影响
目的: 研究重组谷胱甘肽S-转移酶(GST)-小鼠B/ T细胞弱化因子包外功能区(mBTLAext)融合蛋白(GST-mBTLAext)对小鼠树突状细胞系DC2.4表面B7分子表达的影响.方法: 采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mBTLA cDNA.将其胞外功能区基因克隆入原核表达载体pGEX-4T-2中,构建重组表达质粒pGEX-4T-2/mBTLAext并转化E.coli BL21 (DE3),以1 mmol/L的IPTG诱导表达.提取包涵体,经变性、负性后,采用Glutathione Sepharose 4B柱纯化可溶性的GST-mBTLAext.将不同浓度的GST-mBTLAext加入到DC2.4的培养体系中,采用流式细胞术检测其对DC上B7-1和B7-2表达的影响.结果: 成功地克隆了mBTLA基因,并构建了重组原核表达载体.变性、复性,经Glutathione Sepharose 4B柱纯化,获得了可溶性的GST-mBTLAext融合蛋白.经SDS-PAGE鉴定表明,融合蛋白的相对分子质量(Mr)为43 000,同预期的结果一致.流式细胞术检测显示,GST-mBTLAext可上调DC2.4上B7-1的表达并呈剂量依赖性,这一作用可被抗GST-mBTLAext血清阻断.未检测到GST-mBTLAext DC2.4上B7-2的表达有影响.结论: BTLA对DC2.4表面B7分子表达的上调可能是BTLA-HVEM途径反向信号对DC作用的结果,对进一步研究其对DC生物学行为的影响及其分子机制具有重要的理论意义.
关键词： 树突状细胞 B/T淋巴细胞弱化因子 B7分子 原核表达
