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miR-23a-27a表达载体构建及功能初探
目的 构建miR-23a-27a簇真核表达载体并初步探讨该簇的靶基因及其功能.方法 应用分子克隆的方法构建联合表达pre-miR-23 a-27a簇及单独表达pre-miR-23a、pre-miR-27a的真核载体,应用双荧光素酶报告基因试验和real-time PCR验证该载体表达的有效性,应用microRNA靶基因预测软件和双荧光素酶报告基因试验寻找及鉴定pre-miR-23a-27a的靶基因,应用Western blot和real-time PCR的方法在乳腺癌细胞MCF-7中初步探讨miR-27a的功能.结果 (1)pre-miR-23a-27a-pcDNA3.1、pre-miR-23a-pcDNA3.1、pre-miR-27a-pcDNA3.1重组质粒能够在真核细胞HEK293T中有效转录加工出相应的miR-23a和miR-27a;(2)miR-23a和miR-27a能够同连有Sprouty2基因MRE序列的pRL-TK重组质粒作用,但是只有miR-27a能够同连有Sprouty2基因3'-非翻译区(UTR)全长序列的pRL-TK重组质粒作用,而将Sprouty2基因3'-UTR中同miR-27a结合位点定点突变后,miR-27a无法同其作用;(3)在人乳腺癌细胞MCF-7中转染pre-miR-27a-pcDNA3.1真核表达载体,能够在蛋白水平显著影响Sprouty2基因的表达,但是对其RNA水平没有显著影响.结论 Sprouty2可能是miR-27a的功能靶基因,pre-miR-23a-27a-pcDNA3.1、pre-miR-23a-pcDNA3.1、pre-miR-27a-pcDNA3.1载体的构建为下一步深入研究miR-23a和miR-27a的功能奠定了基础.
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携IgG单抗靶向超声造影剂的构建及其靶向效能的体外评价
目的 构建携羊抗小鼠IgG单抗靶向超声造影剂(UCA-IgG)及体外评价其靶向黏附效能.方法 采用"亲和素-生物素"桥接法构建UCA-IgG,体外荧光法鉴定IgG单抗与生物素化造影剂特异结合.利用平行板流动腔在不同时间点、不同浓度小鼠IgG包被和不同剪切应力下,测定相应的UCA-IgG的结合数目及达到半数解离时的剪切应力.设不同浓度小鼠包被的平行板流动腔为实验组,羊抗小鼠IgG封闭组和空白组为对照组.结果 UCA-IgG发出明亮的绿色荧光,而普通脂质造影剂无荧光显示.实验组UCA-IgG结合数量随包被浓度的增高而增加(P<0.05),并与结合时间呈明显正相关(P<0.05),然而与剪切应力呈现双向性(P<0.05).而两对照组均未见明显的UCA-IgG结合.UCA-IgG达半数解离的剪切应力随包被浓度的增加而增大(P<0.05).结论 在不同血流动力学条件下UCA-IgG可与小鼠IgG特异有效结合,携羊抗小鼠IgG单抗造影剂可为其他特异靶向超声造影剂的体外研究提供有力的支持.
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广西人群DNA修复途径部分基因多态性与肝癌临床病理特征的关联研究
目的 探讨广西地区人群DNA修复途径基因XRCC1、APE1、hOGG1、XPC、XPD、XPG、XRCC3多态性与肝癌临床病理特征的关系.方法 收集2007年2月～2008年10月在广西医科大学第一附属医院就诊和治疗的共257例广西肝癌新发病例临床病理资料、血液DNA,应用荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)技术对XPC499、XPC939、XPD312、XPG1104、XRCC1-194、XRCC1-280、XRCC1-399、APE1-148、hOGG1-326、XRCC3-241 10个位点进行基因分型.基因多态性与临床病理特征的关系采用x2检验和非条件Logistic回归模型进行分析.结果 XRCC1-399多态与肝癌门静脉癌栓相关(P =0.036),hOOG1-326多态与包膜侵犯相关(P =0.036),XPC499多态与大体分型相关(P =0.047).分层分析显示,在发病年龄＜47岁组,XPD312基因多态与肿瘤个数有关(P=0.025).在发病年龄≥47岁组,XPD312多态与肿瘤直径大小相关(P=0.009),XRCC1-280多态与门静脉癌栓(P =0.024)、病理分期(P =0.050)相关；不同修复途径基因多态联合作用基因型分布频率与肝癌子灶差异有统计学意义(P =0.037).APE1-148、XPC939、XPG11 04、XRCC3-241位点多态性与原发性肝癌(primary liver cancer,PLC)临床病理特征差异均无统计学意义(均有P＞0.05).结论 XRCC1-280、XRCC1-399、hOGG1-326和XPC499、XPD312基因多态性可能与肝癌相关生物学行为相关.
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分泌型卷曲相关蛋白家族在肿瘤中的研究进展
分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)可通过卷曲蛋白抑制Wnt信号通路的表达,SFRP基因启动子甲基化沉默与多种肿瘤的发生和转移相关,如结肠癌、胃癌、肝癌、肺癌、卵巢癌等.多项研究发现SFRP具有潜在的临床价值,有望成为癌症基因诊断与治疗的新靶点.
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miRNA-142-5p在特应性皮炎中的表达及其靶基因预测
目的 检测特应性皮炎(AD)患者外周血单个核细胞(PBMC)中miRNA-142-5p的表达情况,并对其进行潜在靶基因预测.方法 选择2011年10月至2012年2月该院门诊皮肤科AD患者8例为观察组,与观察组年龄和性别相匹配的健康体检者6例为对照组.提取分离所有受试者PBMC中的miRNA,采用实时荧光定量PCR法,检测miRNA-142-5p的表达水平,运用miRanda、PicTar和TergetScan 等靶基因预测分析软件等生物信息学方法,筛选其潜在靶基因.结果与对照组比较,miRNA-142-5p 在观察组患者PBMC中的表达水平上调(P＜0.05),预测到交集靶基因有 39个,涉及到信号转导、细胞凋亡、细胞分化等.结论 miRNA-142-5p在 AD患者PBMC中高表达,可能通过调控其下游靶基因在AD发病中起着重要作用.
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血友病基因治疗的研究进展
血友病的基因治疗是通过基因转导的方法,将正常的FⅧ、FⅨ基因导入患者体内,纠正遗传性基因缺陷,以持久产生可满足止血需要的正常FⅧ、FⅨ,这种治疗方法将为血友病的治疗带来新希望.血友病的基因治疗过程包括:目的基因的改造,以及载体和靶细胞的选择.血友病基因治疗的核心技术是基因转移载体技术,而基因治疗载体可分为非病毒载体和病毒载体.目前,虽然已经有多项血友病的基因治疗研究取得突破性进展,但是该治疗方法仍面临载体的应用、靶细胞的选择、针对载体和表达产物的免疫反应等许多问题,仍需要进一步研究.因此,笔者拟就血友病的基因治疗过程及其研究进展进行综述.
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诱导性多潜能干细胞在β地中海贫血中的应用进展
β地中海贫血是一种常见且早被认识的单基因遗传性疾病,目前有许多治疗该疾病的方法,但这些治疗措施效果有限且成本高;而诱导性多潜能干细胞(iPSCs)是近年来迅速发展起来的干细胞技术.iPSCs技术能将体细胞重编程为干细胞,理论上可以去分化为各类细胞,再将此项技术与基因治疗技术结合起来,对彻底治愈本病有重要意义.笔者主要讨论β地中海贫血的遗传基础及相关机制、iPSCs的发现与在相关领域的应用进展,以及iPSCs用于治疗β地中海贫血中存在的问题及相关改进措施.
