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rAd5和rAAV2/1载体疫苗诱导载体特异性和外源基因特异性免疫反应的研究
目的 在小鼠体内比较携带相同外源基因的rAd5和rAAV2/1载体疫苗诱导的载体特异性和外源基因特异性免疫应答的差异.方法 分别用携带HIV-1 gag基因的rAd5和rAAV2/1疫苗免疫BALB/c小鼠,在免疫后不同时间点用Elispot方法和ELISA方法检测小鼠体内的rAd5或rAAV2/1载体特异性及HIV-1 gag特异性细胞免疫反应和抗体反应.结果 rAd5-gag能够诱导较强的gag特异性细胞免疫反应,显著高于针对Ad5载体的细胞免疫反应；而rAAV2/1 -gag诱导的gag特异性及AAV2/1载体特异性细胞免疫反应水平都较低.rAd5-gag诱导的P24特异性和Ad5特异性IgG抗体水平都较高,并且二者相当；与rAd5-gag相比rAAV2/1 -gag可诱导更高水平的P24 IgG抗体,而且rAAV2/1 -gag诱导的P24 igG高于AAV2/1载体特异性IgG水平.结论 rAd5载体可诱导强的外源基因特异性细胞免疫和抗体反应,针对载体的细胞免疫反应较弱而抗体反应较强；rAAV2/1载体可诱导强的外源基因特异性抗体反应,明显高于针对载体的抗体反应,外源基因特异性和载体特异性细胞免疫反应水平都很低.
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含HPV16L1基因重组腺病毒和1型重组AAV载体联合免疫效果的研究
目的 对表达HPV16L1抗原的重组腺病毒及1型重组AAV载体联合免疫效果进行研究.方法 分别构建含密码子优化型HPVl6LI基因重组腺病毒rAd-mod.HPV16L1及1型重组从V载体rAAV1-mod-HPV 16L1,将纯化的重组AAV病毒载体以肌注及滴鼻途径单独及联合免疫C57BL/6小鼠,使用体外中和实验检测各组小鼠血清中特异性中和抗体.结果 rAAV1-med-HPV16L1单独及与rAd-mod-HPV16L1联合肌注可诱导高滴度的血清中和抗体,在初免后第16周抗体滴度显著高于其他免疫组,联合肌注组诱导的抗体滴度高于单独肌注组;重组病毒联合滴鼻虽能产生一定的免疫加强作用,但抗体滴度仍显著低于rAAV1-mod-HPV16L1单独及联合肌注组.结论 型重组从V载体联合重组腺病毒以初免.加强模式肌注可诱导更高滴度的血清中和抗体.
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表达HIV-1 gag基因的重组AAV2/1和Ad5疫苗免疫原性比较
目的 在小鼠体内比较表达HIT-1 gag基因的重组AAV2/1和Ad5疫苗的免疫原性.方法 分别用rAAV2/1-gag或rAd5-gag单独免疫BALB/c小鼠一次或两次,于免疫后不同时间点用CFSE染色法和胞内细胞因子染色法检测Gag特异性细胞免疫应答,用ELISA方法检测Gag特异性抗体反应.结果 单次免疫结果显示,在所有检测点rAd5-gag所诱导的Gag特异性CTL应答都比rAAV2/1-gag强,抗体反应在免疫后4周无明显差异.两次免疫后4周的检测结果表明,rAd5-gag所诱导的Gag特异性CTL应答比rAAV2/1-gag强,但抗体反应比rAAV2/1-gag组弱.结论 rAd5-gag诱导了很好的HIV-1特异性细胞和抗体反应,而rAAV2/1-gag诱导的HIV-1特异性抗体反应很强,但细胞免疫应答较弱.
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含HIV-1 gp120基因的重组腺相关病毒和重组腺病毒疫苗联合免疫的研究
目的探讨含HIV-1 gp120基因的重组腺相关病毒(rAAV)和重组腺病毒(rAdV)疫苗在BALB/c小鼠中联合免疫的效果.方法将密码子优化的HIV-1 gp120基因分别插入腺相关病毒(AAV)和腺病毒(AdV)载体质粒,构建含该基因的rAVV和rAdV载体疫苗.将两种疫苗以不同的联合方式免疫BALB/c小鼠,ELISA检测小鼠血清中的gp120特异性抗体,细胞内细胞因子染色法检测小鼠的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答.结果两种重组病毒均可表达目的基因gp120;在小鼠体内两种重组病毒联合免疫可诱导特异性的CTL应答和血清IgG抗体反应,但用rAAV初免2次,再用rAdV加强3次所诱发的CTL和血清IgG反应强.结论rAAV和rAdV疫苗联合免疫可在小鼠体内诱导特异性的CTL应答和血清IgG抗体反应.
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人博卡病毒感染支气管上皮细胞生物学特征的研究
目的 研究人博卡病毒(HBoV)在呼吸道感染中的致病性及机制.方法采用人博卡病毒阳性标本感染健康人支气管上皮细胞,观察HBoV感染支气管上皮细胞后的生物学特征,并进行病毒空蚀斑、红细胞吸附抑制及免疫荧光测定.结果 75%感染细胞变圆并堆积成葡萄状,伴随有坏死、破碎、脱落.病毒蚀斑测定出典型"猫头鹰眼"现象.红细胞吸附实验观察到90%以上红细胞附着感染支气管上皮细胞.荧光检测出在细胞核内具有典型荧光块.结论支气管上皮细胞可用于分离HBoV,HBoV感染支气管上皮细胞后能够在该细胞内增殖,并导致特征性生物学改变.本研究为今后人博卡病毒致病机制研究奠定基础.
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博卡病毒VP_2基因在昆虫细胞sf9中表达及临床标本筛查
目的 表达人博卡病毒(HBoV)VP_2蛋白,用于临床标本HBoV的筛查.方法 将VP_2基因重组于杆状病毒基因组,重组的杆状病毒感染昆虫细胞sf9,用HA抗体进行Western Blot鉴定重组融合VP_2蛋白表达.通过电镜观察重组蛋白颗粒.以VP_2蛋白作为抗原对176例临床样本进行免疫印迹筛查.结果 在昆虫细胞中VP_2蛋白的表达量约占细胞总蛋白的60%以上,VP_2蛋白相对分子质量为60×10~3.电镜观察博卡病毒VP_2蛋白形成病毒样颗粒(VLP),其大小在20mm左右;采用免疫印迹技术从临床标本中筛查出4例患者HBoV阳性,阳性率达到2.28%(4/176).结论 本研究成功的在昆虫细胞中表达了博卡病毒VP_2蛋白;表达VP_2蛋白具有一定抗原性,为开展人博卡病血清学研究方法建立提供基础.
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北京地区人群中人Boca病毒血清抗体的分析
目的 通过对血清中人Boca病毒(HBoV)主要衣壳蛋白VP2特异性IgG抗体进行检测,初步了解北京地区人群中这种新发现的病毒的感染状况.方法 以大肠杆菌表达的HBoV主要衣壳蛋白VP2为抗原,应用Western-blot方法,对1996年4月至1997年3月取自首都儿科研究所附属儿童医院健康查体者及北京宣武医院非呼吸道感染患者的血清标本共677份进行HBoV VP2蛋白特异性IgG抗体检测.设抗组氨酸抗体及兔抗HBoV-VP2多肽特异性免疫血清为阳性血清对照.结果 (1)677份血清标本中,抗HBoV VP2蛋白的IgG抗体阳性400份,总检出率为59.1%.(2)被检对象中,＜1个月的婴儿抗体阳性率为45.3%,1个月～的婴儿抗体阳性率为41.4%,2个月～的婴儿抗体阳性率低(31.3%),6个月～至7岁龄抗体阳性检出率在45.6%～69.7%,7岁后直至40岁,抗体阳性检出率维持在70%左右;50岁后则为61.8%～62.8%.结论 早在1996年北京地区的人群中就有59.1%曾经感染过HBoV,说明这种病毒是一种新发现的病毒而不是新出现的病毒,北京地区人群中该病毒的感染较常见.6个月龄以前的婴儿为易感人群.
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人博卡病毒研究进展
2005年,瑞典Karolinska大学附属医院临床微生物系的研究人员建立了一种集宿主DNA消除、随机PCR扩增、高通量测序、生物信息学分析为一体的分子病毒学方法,以进行大规模的临床标本中新病毒的筛选[1].该研究从下呼吸道感染患儿标本中检测到一种新的病毒,这一发现改变了30年来一直公认的细小病毒B19(B19V)是细小病毒科(parvoviridae)中惟一的感染人类病毒的理论.核苷酸序列比较和系统发生分析表明,这种新发现的病毒也是细小病毒科成员.鉴于此病毒与细小病毒科中牛(bovine)细小病毒及犬类(canine)微小病毒非常接近,将这种从儿童呼吸道感染标本中发现的新病毒命名为人博卡病毒(humanboeavirus,HBoV).至今,世界各地相继报道从儿童呼吸道(鼻咽拭子)、血清和粪便标本中检测到HBoV,这些患儿几乎都有呼吸道或胃肠道感染的临床症状.
