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蚯蚓体腔液体外抗呼吸道合胞病毒的实验研究
目的 研究蚯蚓体腔液(Earthworm coelomic fluid,ECF)体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)的作用.方法 以Hep-2细胞为宿主细胞,利巴韦林作为阳性对照药物,通过观察细胞病变效应(CPE)和MTT染色法来研究蚯蚓体腔液体外抗RSV的作用.结果 ECF和利巴韦林对Hep-2细胞的CC50分别为3.11 mg/ml和1.35 mg/ml.在直接杀灭作用实验中,IC50为184.1 μs/ml,SI值为16.87;在抑制病毒复制实验中,IC50为1555.8 μg/ml,SI值为1.99;在阻断病毒侵入实验中,没有观察到抗病毒的作用.结论 蚯蚓体腔液具有直接杀灭和抑制RSV复制的作用,其中直接杀灭作用的抗病毒效果较明显,但不具有阻断RSV入侵的作用.
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蚯蚓脱氧核糖核酸酶纯化及酶学性质
目的:从蚯蚓组织中纯化得到一种脱氧核糖核酸酶(取名为蚯蚓脱氧核糖核酸酶,简称EDNase)并研究其酶学性质.方法:采用丙酮沉淀、离子交换层析、高效液相层析、SDS-PAGE电泳,毛细管等点聚焦电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等方法.结果:经证实这种纯化方案的纯化倍数是137,酶得率为45.6%.EDNase的相对分子质量约为63 000.Mg2+,Mn2+和ca2+对酶活性有较强的抑制作用,而Na+则轻微的提高酶的活性.在pH 4.4～5.2的范围内EDNase酶活性稳定,其适pH值为4.8.该酶的适温度为37℃,在40℃范围内酶具有较高的稳定性.EDNase的等电点为6.20.在以小牛胸腺DNA为底物的条件下,酶的Km为1.52 g/L,Vmax为4.89 mg/(mL·min).该酶可有效降解超螺旋质粒DNA,线状λ-噬菌体DNA和细菌染色体DNA,对RNA未见任何降解作用.结论:这种酶具有独特的酶学性质,不同于以往所知的脱氧核糖核酸酶.
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一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶相对分子质量的测定
目的 测定从蚯蚓组织中提取纯化的一种新型脱氧核糖核酸酶的相对分子质量.方法 采用凝胶过滤层析法、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法和基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法三种方法测定一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWDi)的相对分子质量.结果 凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和质谱法测定其相对分子质量分别为126 440、136 320和157 190.结论 EWD1由两个亚基组成,其相对分子质量终确定为157 190.
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抗双胸蚓核酸酶EWD2多克隆抗体的制备及鉴定
目的 将从双胸蚓组织中纯化的核酸酶EWD2免疫新西兰大白兔制备兔抗EWD2多克隆抗体.方法 将纯化的双胸蚓核酸酶EWD2免疫新西兰兔,制备兔抗EWD2血清,以Western Blotting和ELISA方法分析其特异性和效价.结果 EWD2蛋白免疫新西兰兔成功获得多克隆抗体.Western Blotting结果显示制备的抗体具有较高的特异性,ELISA显示效价为1∶6 000. 结论 获得了双胸蚓核酸酶EWD2多抗血清,为今后对双胸蚓核酸酶活性和结构的研究建立了基础.
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赤子爱胜蚓DNase活性测定方法
目的研究赤子爱胜蚓-地龙组织提取物DNase活性测定方法.方法应用单相酶扩散法和紫外吸收法分别对其酶解底物DNA测定.结果和结论两种方法同时应用可扩大其测定酶活力范围,且两方法的数据结果间存在稳定的函数关系,为赤子爱胜蚓DNase以及其他DNase的活力测定提供了可行的实验方法.
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用离子交换树脂法纯化从蚯蚓体中提取的复合氨基酸
从昆虫蛹中提取各种氨基酸是目前医药和化妆品生产中氨基酸的主要来源.从蚕蛹及家蝇中提取复合氨基酸的方法时有报道.从蚯蚓体中提取复合氨基酸是一种较为简单、方便、经济的方法,因为蚯蚓生长发育快、繁殖力高、适应性强、易于人工养殖.干蚯蚓体中含有大量的蛋白质,有15种氨基酸,其中,亮氨酸的含量高,其次为谷氨酸、天门冬氨酸,占2%以上的氨基酸有缬氨酸、赖氨酸、精氨酸和丙氨酸,这些都是人体必需的氨基酸,可用于制药和化妆品的生产.用离子交换树脂法纯化从蚯蚓体中提取的复合氨基酸的粗制品,提高了产品的纯度,达到较好效果.
