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间充质干细胞治疗提升免疫性血小板减少症小鼠的血小板数并影响其外周血单核细胞中 T-bet 和 GATA-3基因表达
目的：探讨间充质干细胞（ MSC）对原发免疫性血小板减少症（ ITP）小鼠血小板数目的影响及其机制。方法采用腹腔注射大鼠抗小鼠CD41抗体（ MWReg30单抗）的方法诱导BALB/c小鼠产生ITP后，取20只作为实验组，20只作为对照组。之后通过鼠尾静脉给实验组小鼠注射MSC 2×107个/只。注射后5 d、7 d、14 d，测定实验组与对照组小鼠外周血血小板数；14 d时应用逆转录聚合酶链反应（ RT-PCR）检测小鼠外周血单个核细胞（ PBMC）中转录因子T-bet和GATA-3 mRNA的表达；应用酶联免疫法测定Th1类细胞因子IFN-γ、IL-2及Th2类细胞因子IL-4、IL-10的水平。结果7 d、14 d后，注射MSC实验组小鼠血小板值[（588．0±81．6）×109/L、（623．0±78．9）×109/L]明显高于未注射MSC对照组[（317．0±90．1）×109/L、（288．0±87．8）×109/L]（P＜0．05）；14 d时，实验组PBMC中T-bet mRNA表达水平低于对照组[（0．04±0．03） vs （0．27±0．05）]（P＜0．05）；GATA-3 mRNA的表达水平高于对照组[（0．14±0．04） vs （0．07±0．05）]（P＜0．05）；实验组Th1类细胞因子IFN-γ、IL-2水平[（3．1±1．7） pg/ml、（3．2±2．1） pg/ml]明显低于对照组[（10．3±4．8） pg/ml、（16．3±5．7） pg/ml]（P＜0．05）；实验组外周血 Th2类细胞因子 IL-4、IL-10水平[（88．6±15．2） pg/ml、（38．3±11．8） pg/ml]明显高于对照组[（32．7±5．7） pg/ml、（22．1±3．4） pg/ml]（P＜0．05）。结论 MSC可以有效提升ITP小鼠的血小板数，机制可能与抑制了T-bet和GATA-3的表达失常导致的Th1细胞极化有关。
关键词： 间充质干细胞 免疫性血小板减少症 小鼠 转录因子T-bet 转录因子GATA-3 -
GATA-3在放射性肺纤维化中的作用机制
目的 通过建立小鼠放射性肺纤维化模型,了解转录因子GATA-3及白细胞介素-13(IL-13)在放射性肺纤维化形成过程中的表达情况及其意义,为放射性肺纤维化的防治提供实验和理论依据.方法 成年雌性C57BL/6小鼠63只,随机分作2组:对照组21只,不做任何处理；照射组42只,全肺单次照射12 Gy.于照射后1h、1、2、4、8、16和24周,取照射组及相同鼠龄对照组小鼠肺组织和血清,分别用HE和Masson染色在光镜下观察组织病理改变和胶原纤维沉积；用碱水解法测定羟脯氨酸含量；用实时定量RT-PCR法检测GATA-3mRNA相对含量；用ELISA法测定血清中IL-13的含量；用Western blot法检测肺组织中GATA-3的蛋白表达变化情况.结果 光镜下,照射组小鼠肺组织较对照组组织学改变和胶原纤维沉积明显；测定羟脯氨酸含量显示,照射组小鼠肺组织中的羟脯氨酸含量较对照组明显增高(Z=3.142,P＜0.05)；蛋白和mRNA检测结果显示,较之对照组,GATA-3和IL-13的表达在照射组中明显升高,特别是在肺组织尚未发生明显的纤维化组织学改变时(1～2周),照射组GATA-3表达明显升高(t=6.50,6.33,P＜0.01),IL-13受GATA-3调节,在照射后第16周表达为明显(t =32.21,P＜0.01).结论 转录因子GATA-3可以通过诱导Th2免疫细胞因子IL-13的表达,参与放射性肺纤维化的形成.
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IL-18及其受体在特发性血小板减少性紫癜患者Th1类细胞优势应答中的作用
目的 探讨白细胞介素18(IL-18)及其受体(IL-18R)在特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者Th1类细胞因子优势应答中的作用.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测15例活动期和18例缓解期ITP患者外周血单个核细胞(PBMNC)中转录因子T-bet和GATA-3 mRNA的表达;应用ELISA法检测血浆中IL-18的变化;应用流式细胞术检测CD3+细胞和淋巴细胞表面IL-18R的表达.13名健康志愿者为正常对照.结果 ITP活动期患者PBMNC中T-bet mRNA表达水平(0.069±0.013)明显高于对照组(0.019±0.010)(P＜0.05),而GATA-3 mRNA的表达水平(0.002±0.001)明显低于对照组(0.005±0.002)(P＜0.05);血浆IL-18和CD3+细胞表面IL-18R表达水平较ITP缓解期患者和对照组显著增高.ITP缓解期患者T-bet与GATA-3 mRNA表达水平与对照组比较差异均无统计学意义(P值均＞0.05),T-bet/GATA-3比例基本恢复正常,血浆中IL-18和CD3+细胞表面IL-18R的表达水平也基本恢复正常.结论 ITP活动期患者表现为Th1优势应答,T-bet/GATA-3比例明显失衡,T-bet/GATA-3比例可作为ITP患者Th1类细胞极化的敏感指标;ITP活动期患者IL-18和IL-18R表达上调,可能为ITP患者的治疗提供一个新的治疗靶点.
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反义寡核苷酸和激素干预对哮喘小鼠GATA-3表达的影响
目的 探讨转录因子GATA-3在支气管哮喘发病中的作用,评价反义寡核苷酸干预及吸入糖皮质激素对其调节作用.方法 40只雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、激素治疗组(C组)及GATA-3反义寡核苷酸治疗组(D组)4组.采用卵清白蛋白致敏、激发建立哮喘小鼠模型,对小鼠血及支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞进行计数,并测定小鼠血清IgE含量;采用Western b1ot及RT-PCR技术检测治疗前后哮喘小鼠肺组织中GATA-3蛋白和GATA-3 mRNA的表达.结果 通过小鼠行为学变化、血和BALF嗜酸性粒细胞计数、血清IgE水平以及肺组织病理切片鉴定模型成立.哮喘小鼠气道管壁及伴行动脉周围可见炎性细胞浸润、杯状细胞增生及平滑肌增厚.Western blot结果显示哮喘组小鼠肺组织GATA-3蛋白表达增高,GATA-3反义寡核苷酸治疗组和激素治疗组GATA-3表达均下降,GATA-3反义寡核苷酸治疗组较激素治疗组下降略明显,但差异无统计学意义.RT-PCR结果与Western blot结果一致.结论 蛋白质水平及mRNA水平显示哮喘小鼠模型肺组织GATA-3表达升高,激素和反义寡核苷酸干预可下调GATA-3表达,可能是其抑制气道炎症形成的重要作用机制;应用反义寡核苷酸可能为哮喘治疗提供一种新的方法.
关键词： 支气管哮喘 转录因子GATA-3 反义寡核苷酸 激素 -
转录因子GATA-3靶向寡核苷酸“圈套”策略对哮喘小鼠的治疗作用
目的 探讨转录因子GATA-3靶向寡核苷酸(ODN)“圈套”策略对哮喘小鼠气道炎症的治疗作用.方法 32只小鼠随机均分为四组:正常对照(A)组、哮喘模型(B)组、“圈套”ODN治疗(C)组和变异“圈套”(D)组.通过气道给药的方式,将GATA-3靶向ODN及突变的ODN转染至哮喘小鼠肺部,应用流式细胞术检测哮喘小鼠脾CD4+T细胞白细胞介素(IL)4、γ干扰素(IFN-γ)水平,ELISA法检测肺组织IL-5、IL-13表达,Western blot法检测肺组织GATA-3蛋白表达,HE染色评价肺组织病理变化.结果 B组小鼠肺组织GATA-3蛋白表达、IL-5和IL-13水平均较A组增加(P＜0.01或P＜0.05)；与B组相比,C组IL-4、IL-5及IL-13水平减少,IFN-γ/IL-4比值增高(P＜0.05),小鼠气道炎症明显减轻；而D组上述各指标与B组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 GATA-3靶向ODN“圈套”通过特异性阻断GATA-3活性,有效地抑制Th2型细胞因子的产生,从而减轻哮喘小鼠气道炎症反应.
关键词： 哮喘 转录因子GATA-3 "圈套"策略
