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fliN基因文献资料
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靶向敲除问号钩端螺旋体鞭毛相关fliN基因及其突变株致病性变化
其引起J774A.1细胞坏死和细胞凋亡率(30.6%和22.7%)也明显低于野生株(48.2%和35.2%)(P＜0.05).结论 fliN基因产物与问号钩体黏附细胞、分泌毒力因子和诱导细胞凋亡密切相关.采用基于自杀质粒基因敲除技术可用于研究问号钩体靶基因产物的致病机制.
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问号钩端螺旋体fliN基因原核表达及其产物的鉴定
目的 克隆问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株鞭毛相关基因fliN并构建其原核表达系统,鉴定表达产物的免疫性.方法 提取钩体株基因组DNA,高保真PCR扩增全长fliN基因片断,T-A克隆后测序.按常规方法 构建fliN基因原核表达系统,并用IPTG诱导目的 重组蛋白rFliN表达.采用SDS-PAGE结合Bio-Rad凝胶图象分析系统检测rFliN表达量,Ni-NTA亲和层析法提纯rFliN.采用兔抗问号钩体黄疸出血群赖株全菌抗血清的Western blot鉴定rFliN及其免疫反应性.结果 与报道的相应序列比较,所克隆的fliN基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%.IPTG诱导原核表达系统pET32a-fliN-E.coliBL21DE3的rFliN表达量约占细菌总蛋白的30%,rFliN提纯后仅见单一的蛋白条带.rFliN能与抗血清发生免疫结合反应.结论 本研究成功地构建了高效表达目的 重组蛋白的问号钩体fliN基因原核表达系统,RFliN有良好的免疫反应性,为深入研究FliN致病及免疫保护作用奠定了基础.
