E test测定酵母样真菌药物敏感试验初步应用

酵母样真菌已成为医院内感染的主要病原之一,体外药敏试验对合理筛选抗真菌药物、发现耐药菌株等有重要意义[1].NCCLS的"M27-T"酵母样真菌大量稀释法药敏试验方法比较繁琐[2].近,瑞典的AB.Biodisk公司推出了酵母样真菌药敏试验E test试纸条.我们以"M27-T"为参比方法,对标准菌株和临床菌株进行MIC测定,比较E test 与"M27-T"所测结果的符合程度,并对E test方法学特点和MIC检测的临床意义作了初步评价.

Sensititre Yeastone比色抗真菌药敏试验检测产孢丝状真菌MICs的应用评价

1998年美国临床国家实验室标准化委员会(NCCLS)提出了产孢丝状真菌肉汤稀释法的抗真菌药敏试验参考方案(M38-P).

产孢丝状真菌NCCLS药敏试验方法的应用

美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)于1997年推出了关于酵母菌的液体培养基稀释(多量法与微量法)抗真菌药敏试验方案M27-A，建立了被众多实验室认同的重复性好、准确性较高的标准化体外药敏试验方法。但由于丝状真菌本身的诸多特点如产孢条件难以控制、接种量难以精确量化、孵育时间长等，使其试验方法标准化具有一定难度。近年来NCCLS分会成员以M27-A的微量法为基础进行了多中心广泛深入研究［1，2］，于1998年提出了《产孢丝状真菌的液基稀释抗真菌药敏试验参考方案》(M38-P)。该方案在提出了一些建设性意见的同时，重申了多量法与微量法的一致性。现将其方法简介如下。 一、材料和方法 1.抗真菌药物：测试用药物包括氟康唑(FCZ)，5-氟胞啶(5-FC)、酮康唑(KCZ)、伊曲康唑(ICZ)和两性霉素B(AmB)。药物来源、贮备液的制备等同M-27方案［3］。 2.被检测的真菌：本方案主要针对常见侵袭性真菌感染的菌种：曲霉、镰刀霉、根霉，波氏假阿利什霉及申克孢子丝菌的菌丝相。不包括其他非产孢丝状真菌，也不适应于双相真菌的酵母相。 3.培养基：建议应用RPMI-1640培养基，配制方法要求同M27-A方案。 4.真菌接种液的制备：(1)为保证受试菌的纯度及活性，需在马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）上35℃培养7 d或35℃培养48～72 h后，转至25～28℃至7 d(镰刀菌)。(2)取1 ml无菌0.85%盐水加入培养7 d的培养皿中，用巴氏吸管轻轻抽吸，制备菌悬液(加入1滴吐温20将有利于曲霉的接种)，将菌悬液吸至无菌试管中，静置3～5 min后，取上部匀质液体(含孢子或孢子囊孢子和菌丝片断)，在振荡器上振荡15 s。(3)用分光光度计调整菌悬液浓度，波长530 nm，A值曲霉、申克孢子丝菌0.09～0.11，镰刀霉、波氏假阿利什霉及根霉0.15～0.17。(4)将上述菌悬液用RPMI-1640稀释50倍得2倍终浓度(0.4～5×104)的菌悬液备用。(5)为保证试验准确性应做菌落计数，取0.01 ml终浓度菌悬液接种于改良的沙氏萄葡糖琼脂培养基的平皿中(28～30℃)，每天观察并计数肉眼可见的真菌菌落(尤其是对于镰刀菌)，孵育时间为24 h以内(镰刀菌)至5 d(波氏霉)。 5.液体培养基的接种：在96孔板的1～10列孔中每孔加入0.1 ml的2倍终浓度的菌悬液。每次试验均应包括质控、参考菌株。 6.培养：35℃条件下(不要摇动)大多数菌需46～60 h判定低抑菌浓度(MIC)结果，根霉则需21～26 h，波氏假阿利什霉则需70～74h。

目前真菌药敏试验常用哪些方法?

美国临床实验室标准化委员会2003年版产孢丝状真菌药敏试验方案简介

美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)1997年版推出了关于酵母菌的液体培养基稀释法(全量法与微量法)抗真菌药物敏感性试验方案M27-A .该方案准确性高、重复性好,实验室间结果的一致性可以与抗细菌的药物敏感试验相媲美.之后,NCCLS 1998年版又提出了关于产孢丝状真菌的抗真菌药敏试验倡导方案M38-P.该方案包括微量液基稀释法与多量液体培养基稀释法,适用于曲霉菌、镰刀菌、波氏霉菌等丝状真菌,一致性好.近年来,NCCLS在该方案的基础上,又在某些药物的低抑菌浓度(MIC),即MIC值的判定等因素方面进行了广泛深入的多中心研究,加上新型三唑类药物的问世和临床应用的逐渐增多,于是NCCLS在2003年新版中又推出了产孢丝状真菌抗真菌药物敏感性试验方案,即M38-A,简介如下.

杭州地区220株外阴阴道念珠菌病的菌种鉴定及药敏试验分析

目的了解杭州地区外阴阴道念珠菌病的菌种类别及药物敏感性.方法采用常规念珠菌培养方法和API 20CAUX方法进行鉴定.药敏试验采用ATB FUNGUS方法.结果220例外阴阴道念珠菌病以白念珠菌为主,检出172例,占78.18%,其次光滑念珠菌17例,占7.73%.念珠菌对伊曲康唑、氟康唑、制霉菌素、两性霉素B、咪康唑、酮康唑、益康唑、5-氟胞嘧啶的敏感性分别为97.73%、96.82%、94.09%、88.64%、73.64%、66.82%、42.32%、23.64%.结论外阴阴道念珠菌病以白念珠菌感染为主,但与以往相比比率有所下降.检测的220株念珠菌对伊曲康唑、氟康唑、制霉菌素、两性霉素B敏感性高,对咪康唑、酮康唑、益康唑、5-氟胞嘧啶的耐药率高.

黄连解毒汤体外抗真菌活性及其与西药的联合药敏试验研究

目的:观察经典方黄连解毒汤的体外抗真菌活性及与特比萘芬、伊曲康唑、氟康唑联合应用的相互作用方式.方法:应用美国临床和实验室标准协会(CLSI)的产孢丝状真菌微量液基稀释法(M38-A)和M27-A2微量液体稀释法测定特比萘芬、伊曲康唑、氟康唑、黄连解毒汤、黄连解毒汤/特比萘芬、黄连解毒汤/伊曲康唑、黄连解毒汤/氟康唑对须癣毛癣菌和白念珠菌的MIC值,计算两药联合应用后的分数抑菌浓度(FIC).结果:特比萘芬、伊曲康唑、氟康唑、黄连解毒汤对须癣毛癣菌和白念珠菌的MIC值分别为:0.040、4.23;0.80、0.50;33.82、7.16μg/mL;0.0034、0.017g/mL.黄连解毒汤与特比萘芬、伊曲康唑、氟康唑联用对须癣毛癣菌和白念珠菌的平均FIC值分别为0.84、0.87;0.90、0.47;1.60、0.74.结论:黄连解毒汤具有良好的抗真菌作用,并且对须癣毛癣菌的抑菌作用优于白念珠菌,同时与西药联合应用显示出了良好的协同作用.黄连解毒汤可应用于临床真菌感染性疾病的治疗.

外阴阴道念珠菌感染与耐药性的研究

目的 了解女性外阴阴道的感染情况,研究临床分离的真菌种类及其对药物的敏感性.方法 对3 133例标本进行回顾性分析,并对其中的344例阳性标本的菌株用API真菌鉴定板条(API 20C AUX)鉴定,用Rosco纸片法对益康唑、克霉唑、氟康唑、伊曲康唑、咪康唑、酮康唑、制霉菌素、两性霉素B进行药物敏感性试验.结果 3 133例临床标本共检出念株菌1 122株,阳性率为35.8%,阳性标本中白念珠菌占71.5%,克柔念珠菌占6.1%、光滑念珠菌占2.5%,其他念珠菌占19.9%.念珠菌对两性霉素B、制霉菌素和酮康唑的敏感性较高,分别为98.5%、97.1%、96.2%;对咪康唑、伊曲康唑、氟康唑的耐药率较高,分别为15.4%、19.5%、15.4%.结论 由于不同菌种对药物的敏感性不同,对感染的念珠菌进行菌种鉴定和药敏试验对临床治疗有重要意义.

获得性免疫缺陷综合征患者白假丝酵母分离株基因型及耐药性分析

目的 研究获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者白假丝酵母分离株的基因型及耐药性.方法 对分离自上海市公共卫生中心AIDS住院患者的40株白假丝酵母,应用微卫星核心序列引物M13进行聚合酶链反应(PCR)指纹分型.用微量稀释法分析白假丝酵母抗真菌药物敏感性.结果 PCR指纹分型将所有白假丝酵母分离株分为A、B、C、D 4种基因型,其中A型14株(35.0%),B型16株(40.0%),C型9株(22.5%),D型1株(2.5%).白假丝酵母对抗真菌药物的耐药率为:两性霉素B 2.5%,氟康唑22.5%,伊曲康唑15.0%,氟胞嘧啶20.0%,;不同基因型白假丝酵母菌株间耐药性差异无统计学意义.结论 上海市AIDS住院患者分离的白假丝酵母主要由3种克隆组成,但无明显优势流行株.

Neo-Sensitab纸片法与微量稀释法检测常见酵母菌对酮康唑敏感性的比较

目的探讨Neo-Sensitab纸片法检测酵母菌对酮康唑的敏感性及与美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)的微量稀释法的符合率.方法采用Rosco酵母真菌药敏纸片对42株常见临床分离的酵母菌作了检测,同时根据NCCLS的M-27A方案采用微量稀释法测定了对酮康唑的小抑菌浓度(MIC),并对结果作比较分析.结果 Neo-Sensitab抗真菌药敏纸片法与微量稀释法检测的42株致病酶母菌对酮康唑的敏感性符合率为95.24%.结论 Neo-Sensitab抗真菌药敏纸片法具有操作简便、观察时间短、成本低廉等优点,在临床具有良好的实用性,能及时为临床医生在选择治疗方案时提供参考.

中国5所医院念珠菌属对氟康唑和伏立康唑的耐药性监测

目的 了解临床分离念珠菌属和其他酵母对氟康唑和伏立康唑的耐药性及耐药性变迁.方法 按CLSI/NCCLS M44-A推荐的纸片扩散法对2001年至2005年8000株念珠菌属和其他酵母临床分离株进行氟康唑和伏立康唑的药敏试验;并通过BIOMIC软件换算出相应的MIC(mg/L).结果 白念珠菌及非白念珠菌如光滑念珠菌等在临床分离真菌中的分布自2001-2005年未见有明显的上升趋势.2001-2005年白念珠菌对氟康唑和伏立康唑的耐药率变化不大,但光滑念珠菌等非白念珠菌对氟康唑和伏立康唑的耐药率有不同程度的上升.结论 伏立康唑较氟康唑具有更广的抗菌谱和更强的抗菌活性;光滑念珠菌等非白念珠菌的耐药率正在逐年上升;提示对念珠菌属开展耐药性监测的重要性.

丝状真菌的快速鉴定及药敏试验

目的 评估基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术在丝状真菌鉴定中的作用,分析常用抗菌药物对丝状真菌的药敏试验结果.方法 收集100株丝状真菌,采用MALDI-TOF MS进行快速鉴定,并与显微镜检查结果进行比对;用E-test法进行丝状真菌药敏试验.结果 MALDI-TOF MS对100株丝状真菌鉴定达到种鉴定水平的有61株(得分≥2.000),达到属鉴定水平的有36株(1.700～1.999),未能鉴定的有3株(＜1.700);与镜检结果不一致的有1株.两性霉素B对絮状表皮癣菌的90％低抑菌浓度(MIC90)为0.19 μg/mL,而对黄曲霉的MIC90＞ 32 μg/mL.伊曲康唑对断发毛癣菌、犬小孢子菌和絮状表皮癣菌的MIC90均＜0.38 μg/mL,而对黑曲霉的MIC90＞ 32 μg/mL.氟康唑对大部分受试菌株的MIC90均＞256μg/mL.伏立康唑和卡泊芬净对烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、红色毛癣菌、断发毛癣菌和犬小孢子菌的MIC90分别≤0.38μg/mL和≤1μg/mL.结论 MALDI-TOF MS技术可快速、准确、高通量检测临床分离的丝状真菌.伏立康唑和卡泊芬净对丝状真菌具有较好的抗菌活性.

Neo-Sensitab抗真菌药敏试验与其他方法的比较

我们采用丹麦Rosco公司的Neo-Sensitab抗真菌药敏纸片对常见临床分离的50株致病酵母作了检测,并同时与法国梅里埃生物公司的ATB FUNGUS真菌药敏试剂条及美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)认可的BD BBLTMSensi-Disc的氟康唑药敏纸片作了对照,取得了满意的符合率.

流式细胞术在真菌药敏试验中的应用

随着广谱抗生素、糖皮质激素、免疫抑制剂、抗肿瘤化疗药物等的广泛应用以及器官移植的广泛开展,真菌感染的发病率和病死率在不断上升[1,2],其中酵母样真菌已成为医院深部真菌感染的主要病原菌之一.

呼吸道真菌感染和药敏结果分析

目的 了解我院下呼吸道真菌感染和药敏测试情况.方法 收集我院呼吸道标本1020株,对其检出的271株真菌进行5种常用抗真菌药的体外敏感性检测.结果 通过痰液涂片结合分离培养,菌种分布以白色念珠菌为主,占59.6%.对5种常用药物(5氟胞嘧啶、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B)进行耐药性分析,发现除克柔念珠菌外,其他真菌对5氟胞嘧啶、两性霉素B和唑类比较敏感,克柔念珠菌对氟康唑耐药.结论 对痰液标本进行涂片和培养,发现真菌感染仍以白色念珠菌为主,除克柔念珠菌外,其他真菌对5氟胞嘧啶、两性霉素B和唑类比较敏感,克柔念珠菌对氟康唑耐药,重视真菌分离鉴定和药敏测试.

Rosco纸片扩散法在生殖器念珠菌病体外药敏试验中的应用

目的:研究Rosco纸片扩散法在生殖器念珠菌病药敏试验中的临床应用.方法:采用Rosco纸片扩散法和美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)M27-A大量肉汤稀释法测定性病门诊分离的98株不同酵母样真菌菌株对氟康唑、伊曲康唑的药敏情况,并以3株酵母样菌株作质量控制.结果:两种方法所测酵母菌对氟康唑的总敏感率分别是87.8%和88.7%,完全符合率是95.9%.两种方法所测酵母菌对伊曲康唑的总敏感率分别是83.7%和84.7%,完全符合率是95.9%.结论:Rosco纸片扩散法具有操作简便,观察时间短、成本低廉等优点,在临床具有良好的实用性,能及时为临床医生在选择方案时提供参考.

念珠菌性阴道炎病人阴道菌群变化研究

目的:研究念珠菌性阴道炎病人阴道菌群的变化.方法:采用直接镜检和各种选择培养基,常规和厌氧培养,对阴道主要菌群进行定量检测;并对分离出的白色念珠菌进行真菌药物敏感试验.结果:念珠菌性阴道炎其菌群变化以白色念珠菌,棒状杆菌显著增多,伴有类杆菌,葡萄球菌增多,而乳杆菌显著减少为特征;所分离的白色念珠菌对抗真菌药物体外实验其抑菌作用.结论:对念珠菌性阴道炎的治疗,除采用敏感的抗真菌药物外,可辅以微生态制剂以调整阴道菌群.

口腔念珠菌病患者口内菌株的检出和药敏性观察

目的 通过对健康人和口腔念珠菌病患者口内假丝酵母菌(即念珠菌)株的检测和药物敏感性试验,探讨假丝酵母菌的种类及药敏性,并结合制霉菌素局部疗效的观察,初步探讨小抑菌浓度(MIC)值与临床疗效的关系,为临床用药提供参考.方法 选择61例口腔念珠菌病患者为试验组,43例健康自愿者为对照组,含漱法收集口腔假丝酵母菌标本,采用CHROMagar假丝酵母菌显色培养基对其进行分离鉴定,然后采用NCCLSM27-A微量稀释法测定假丝酵母菌分离株对制霉菌素、酮康唑和氟康唑的MIC值.试验组中选择31例进行制霉菌素治疗,1周后观察临床疗效,并与患者的MIC值作比较.结果 ①试验组和对照组假丝酵母菌检出率分别为78.69%和30.23%,其中白色假丝酵母菌分别占80.70%和92.31%.②白色假丝酵母菌对氟康唑和酮康唑的MIC值均数间无统计学差异(P＞0.05),但唑类药物的MIC值小于制霉菌素.③白色假丝酵母菌对氟康唑、酮康唑和制霉菌素的敏感率分别为95.65%、80.43%和89.13%,少数菌株存在耐药现象.④制霉菌素局部治疗口腔念珠菌病有效率为87.10%,存在少数MIC值与临床疗效结果不一的病例.结论 目前口腔假丝酵母菌感染患者口内菌株的耐药现象并不突出,白色假丝酵母菌对氟康唑、酮康唑、制霉菌素的敏感率均较高;酮康唑和氟康唑MIC值较小,提示临床上用制霉菌素治疗疗效欠佳时可换用唑类药物.MIC值与临床疗效存在一定相关性,但MIC值高低与临床疗效并非完全一致.

TR与MIC在酵母菌的体外药敏试验中的临床应用

目的对TR和MIC值在酵母菌的体外药敏试验中的临床应用进行评价.方法应用常规方法及VITEK YBC鉴定酵母菌,采用微量稀释法测定MIC值,分析酵母菌对7种抗真菌药物耐药性.并计算TR值,对TR、MIC、血药峰值、给药途径进行综合分析.结果所分离的酵母菌以白色念珠菌多,共214株,占78.1%.其对5-氟胞嘧定高度敏感,其TR与MIC的几何均数之比亦高,为619.82 μg/ml(口服2 000 mg)和1 033.04 μg/ml(静滴2 000 mg).结论应用TR与MIC联合报告对指导临床选用有效的抗菌药物和佳给药途径具有重要意义,可使小的用药剂量和药物副作用达到佳杀菌效能.

复发性外阴阴道念珠菌病致病菌药敏检测

1资料与方法本院皮肤性病科和妇科门诊2002年8月～2003年10月的复发性外阴阴道念珠菌病(RVVC)患者,取其阴道分泌物(采集标本前1周内全身及局部停用抗真菌治疗).采用梅里埃VITEK-32全自动微生物分析系统分离念珠菌110株,其中白念珠菌79株(71.8%),光滑念珠菌13株(11.8%),近平滑念珠菌2株(1.82%),热带念珠菌3株(2.73%),季也蒙念珠菌2株(1.82%),酵母样菌7株(6.36%),无名酵母菌4株(3.64%).采用梅里埃ATB.FUNGUS真菌药敏试验系统检测110株临床试验菌株对6种抗真菌药物的敏感性,检测过程严格按要求操作.