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乙脑病毒prME蛋白编码基因表达分析及不同DNA免疫方法比较
将构建的含流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV) prME蛋白编码基因的重组质粒(pJME)以不同浓度(10μg、5μg以及3μg)分别转染于HepG2细胞中,Western blot法分析重组质粒表达特点,肌肉与基因枪注射方式将pJME免疫BALB/c鼠,二次免疫后3周,腹腔注射乙脑病毒JaGAr-01株,105 PFU/100μl作为病毒攻击观察21 d.
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中药五谷虫抗菌物质的分离纯化及抗菌机制的实验研究
目的:分离纯化五谷虫的有效抗菌物质,同时研究五谷虫抗菌物质对大肠杆菌的杀伤作用,初步探讨其可能的抗菌机制.方法:将五谷虫与大肠杆菌共培养使五谷虫获得二次免疫.用DEAE-Sepharose Fast Flow 离子交换层析柱和sephacryls-200HR凝胶过滤层析柱分离纯化,浊度法检测,获得五谷虫抗菌物质.用荧光探针、琼脂糖凝胶电泳技术分析五谷虫的抗菌机制.结果:五谷虫粗提物浓度＞ 1.0 mg/mL时对大肠杆菌的抗菌效果较强,分子量在10KD左右.荧光探针技术示20 mg/mL的抗生素变化率为35.4％,50 mg/mL的抗生素变化率为40.0％,100 mg/mL的抗生素变化率为42.3％,2 mg/mL的粗提物变化率为1223.1％,80 mg/mL的粗提物变化率为1300.0％.琼脂糖凝胶电泳图示含2 mg/mL和80 mg/mL粗提物的泳道无质粒DNA条带.结论:用DE-AE-Sepharose Fast Flow离子交换层析柱和sephacryls-200HR凝胶过滤层析柱可以纯化得到有效的五谷虫抗菌成分,呈单一蛋白条带.其抗菌机制可能是破坏了大肠杆菌的细胞膜以及影响了质粒DNA的复制.
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母牛分支杆菌菌苗对小鼠INF-γ、IL-4和iNOS影响的研究
目的:从细胞免疫学角度探讨母牛菌苗的免疫调节机理.方法:根据母牛菌苗的注射剂量不同将BALB/c小鼠随机分为以下四组.22.5μg/只组(6只,A),45μg/只组(6只,B),90μg/只组(6只,c),正常对照组(6只,N).A、B、C三组小鼠分别以上述剂量腹腔内注射母牛菌苗,7天后重复注射一次.四组小鼠于第二次免疫后全部脱颈处死.取肺脏组织制成石蜡切片,分别以INF-γ、IL-4和iNOS为一抗进行免疫组织化学染色.结果棕黄色为阳性显色.用图象分析系统分别测定(40×5视野下)单位面积INF-γ、IL-4、iNOS阳性细胞的面积,用面密度表示.结果:22.5μg/只剂量组小鼠肺组织INF-γ、iNOS阳性细胞明显增多,II-4阳性细胞少见.45μg/只和90μg/只剂量组IFN-γ、IL-4阳性细胞同时增多,但iNOS则比22.5μg/只剂量组明显减少.图象结果见下表.结论:细菌菌量的不同可诱导出不同类型的细胞因子产生.常规剂量诱导Th1应答及iNOS的高表达,大剂量诱导Th0应答,同时抑制iNOS表达.
