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FLT3信号通路介导常规树突状细胞启动和调节急性肺损伤早期炎症反应的机制研究
目的 明确FLT3信号通路依赖的肺常规树突状细胞(cDCs)对急性肺损伤(ALI)早期炎症反应和肺损伤的影响及其调控机制.方法 SPF级C57BL/6小鼠30只按随机数字表法分为正常对照组、ALI组、FLT3L预处理组、来他替尼预处理组和DMSO对照组,分别给予FLT3L、来他替尼预处理5d后采用LPS气道内滴入复制ALI模型,6h及24h后处死小鼠留取肺组织,采用流式细胞术检测CD11c+ CD11b+双阳性细胞比例评价肺cDCs的数量,检测肺cDCs的MHCⅡ及CD80表达比例评价肺cDCs的成熟程度;ELISA检测IL-6、TNF-α评价肺部炎症反应的强度;计算肺湿质量/体质量比(LWW/BW)评价肺水肿程度;肺组织HE染色行组织病理学检查评价肺损伤程度;比色法检测肺MPO活性评价中性粒细胞的浸润;qRT-PCR检测转录因子T-bet及GATA-3mRNA的表达比例评价辅助性T细胞Th1/Th2亚群漂移;ELISA检测IFN-γ及IL-4表达评价Th1/Th2细胞因子的平衡.结果 肺cDCs聚集及成熟程度高峰出现于ALI成模后6h(P＜0.05).FLT3L预处理显著增加肺cDCs的聚集和成熟程度(P＜0.05),上调肺部炎症反应并加重肺损伤,同时肺MPO活性、T-bet/GATA-3的表达比例和肺IFN-γ水平均显著上升(P＜0.05).来他替尼预处理显著抑制肺cDCs的聚集和分化成熟(P＜0.05),下调肺部炎症反应并减轻肺损伤,同时肺MPO活性、T-bet/GATA-3的表达比例和肺IFN-γ水平均显著下降(P＜0.05).结论 肺cDCs可通过FLT3信号通路调节中性粒细胞的浸润和Th1/Th2免疫反应的平衡,进而启动和调节ALI早期炎症反应和肺损伤.
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急性肺损伤早期肺常规树突状细胞的动态变化
目的 观察急性肺损伤(ALI)早期肺常规树突状细胞(cDCs)数量及成熟程度的动态改变及其对ALI早期炎症反应和肺损伤的影响.方法 C57BL/6小鼠18只随机(随机数字法)分为健康对照组、6 h-ALI组和24 h-ALI组,气管内注射LPS复制ALI模型后6h及24h分别处死小鼠,留取肺组织,采用流式细胞术检测肺cDCs的数量及成熟程度的动态变化；ELISA检测肺组织IL-6、TNF-α水平评价肺部炎症反应；PCR检测肺组织转录因子T-bet及GATA-3mRNA的表达评价Th1/Th2亚群漂移；ELISA检测肺组织IFN-γ、IL-4水平反映Th1/Th2型细胞因子的平衡；计算肺湿质量/体质量比评价肺水肿程度；肺组织HE染色行组织病理学检查及肺损伤评分反映肺损伤程度.组间比较采用单因素方差分析.结果 ALI组小鼠肺IL-6和TNF-α水平、肺湿质量体质量比及肺损伤评分均较健康对照组显著增高(P＜0.01);6 h-ALI组肺cDCs占肺单个核细胞比例(％)较健康对照组升高[(2.25±0.25)vs(0.93±0.40),P＜0.01],其肺cDCs表达MHC Ⅱ的比例(％)也高于健康对照组[(55.51±11.72) vs.(6.67±0.87),P＜0.01]；而24 h-ALI组肺cDCs占肺单个核细胞比例(％)较6h-ALI组显著降低[(1.01±0.28)vs.(2.25±0.25),P＜0.01],其肺cDCs表达MHC Ⅱ的比例(％)也低于6h-ALI组[(10.94±2.55) vs.(55.51±11.72),P＜0.01]；此外24 h-ALI组肺Th1亚群特异性转录因子T-bet相对表达水平较健康对照组升高[(2.94±0.30)vs(1.00±0.12),P＜0.01],其Th1型细胞因子IFN-γ的水平(Pg·mg-1)也高于健康对照组[(48.17±2.43)vs(16.46±1.68),P＜0.01].结论 ALI早期即存在肺cDCs数量和成熟程度的增加,并可能通过增强Th1型免疫反应及促炎性细胞因子的分泌启动及加剧ALI早期肺部炎症反应.
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肝脏cDCs亚群研究
目的 探究肝脏不同cDCs亚群的特性和抗原递呈能力.方法 分离肝脏非实质细胞和脾脏混合细胞,流式分选得到肝脏CD103+ cDC(脾脏内CD8α+ cDC)和CD11b+ cDC,Q-PCR检测不同cDCs亚群特征性分子的表达.分离OT-I/OT-II转基因小鼠na(i)ve T细胞,并将得到的T细胞进行CFSE标记.将DCs和CFSE标记的T细胞加入特异的OVA肽段,体外共培养3d,收集细胞检测T细胞增殖.结果 稳态下小鼠肝脏内的CD103+ cDC和CD11b+ cDC类似脾脏CD8α+ cDC和CD11b+ cDC,分别负责活化CD8+T细胞和CD4+T细胞.结论 发现了肝脏DCs的分群特性,以及证明了肝脏内cDC不同亚群对不同T细胞的活化作用,为进一步研究肝脏DCs的功能奠定基础.
