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异丙酚对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞高迁移率族蛋白B1启动子转录活性的影响
目的 探讨异丙酚对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导肺泡巨噬细胞(alveolar maerophages,AM)高迁移率族蛋白B1(high mobility group box l protein,HMGB1)启动子转录激活的影响.方法 以基因重组技术将HMGB1启动子克隆入荧光素酶报告基因表达载体pGl3-Basic,得到重组质粒pGL3-HMGB1P,采用脂质体介导的转染技术将质粒转染AM细胞.根据转染质粒和施加刺激的不同分为以下各组:未转染组;转染pGL3-Basic组;转染pGL3-HMGB1P组;转染pGL3-HMGB1P+LPS(100 mg/L)刺激组;转染pGL3-HMGB1P+LPS(100 mg/L)+异丙酚(5 mg/L)处理组.通过检测荧光素酶活性米观察启动子活性变化,分别采用Western blot和RT-PCR方法检测细胞HMGB1蛋白和mRNA的表达.应用单因素方差分析进行不同组别问的比较.结果 酶切和测序结果证实重组体pGL3-HMGB1P构建止确,荧光素酶活性检测显永pGL3-HMGB1P在AM细胞中有效表达.与转染pGL3-HMGB1P组比较,转染pGL3-HMGB1P+LPS刺激组HMGB1启动子的转录活性(423±27),HMGB1蛋白(0.49±0.03)和mRNA(0.48±0.04)的表达均显著增加(P＜0.05);与转染pGL3-HMGB1P+LPS刺激组比较,转染pGL3-HMGB1P+LPS+异丙酚处理组HMGB1启动子的转录活性(207±13),HMGB1蛋白(0.17±0.02)和mRNA(0.13±0.02)的表达均显著降低(P＜0.05).结论 异丙酚在转录水平通过抑制LPS诱导HMGB1启动子的转录激活而影响HMGB1的表达.
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外周炎症性疼痛刺激诱导丘脑中胶质细胞激活及细胞因子的表达
目的:研究完全弗氏佐剂(CFA)外周刺激后,大鼠丘脑中线核群和板内核群中星形胶质细胞标记物(GFAP)、小胶质细胞标记物(Iba)以及细胞因子(IL-1β,TNF-α)的表达变化.方法:逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),免疫印迹法,免疫组织化学.结果:在炎症刺激后的4 h、3 d和14 d,丘脑中线核群和板内核群中小胶质细胞的标记物CD14、细胞因子IL-1β,TNF-α的mRNA和蛋白均有增加;星形胶质细胞标记物GFAP在炎症后的3 d和14 d,其mRNA和蛋白有显著增加.结论:外周炎症性刺激能够相继激活丘脑中线核群和板内核群的小胶质细胞和星形胶质细胞,并使炎症前细胞因子表达增多.提示该部位的胶质细胞可能通过细胞因子参与对炎症性疼痛的调节.
