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缺营养状况下培美曲塞对小鼠肺癌细胞系 LLC 化疗的影响
目的观察小鼠肺癌细胞系 LLC 分别在全营养和缺营养（无氨基酸无血清培养）情况下，使用化疗药物培美曲塞的效果。方法噻唑蓝（MTT）方法检测培美曲塞对小鼠肺癌细胞 LLC 细胞的半抑制浓度（IC50），决定培美曲塞干预浓度。将小鼠肺癌细胞系（LLC）培养在全营养和无氨基酸无血清培养基中，分别用培美曲塞处理12 h，用 MTT法检测细胞活性，用采用凯基活细胞/凋亡细胞/坏死细胞鉴别试剂盒（AO/ EB 荧光显微镜法）检测细胞凋亡。结果培美曲塞对 LLC 的 IC50为28.67 mM。将0、3.58 mM、7.16 mM、14.33 mM、28.67 mM 和57.34 mM 做为培美曲塞的干预浓度，培美曲塞浓度在以上干预浓度下，无营养培养基中（NF），对 LLC 的抑制率分别为0，17.4%，26.6%，37.7%，39.0%，45.8%；全营养组（FN）中的抑制率为0，23.7%，30.2%，48.9%，57.4%，67.4%。缺营养的状况下，培美曲塞对小鼠肺癌细胞 LLC 的杀伤作用明显下降（ P ﹤0.05）。缺营养和全营养的情况下，LLC 细胞的凋亡率分别为24.9%，22.6%；缺营养情况下和全营养情况下，肺癌细胞在化疗药物作用下的死亡率分别为25.3%，34.2%。结论缺营养的情况下，小鼠肺癌细胞对化疗药物培美曲塞的敏感性降低。
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营养缺乏状况下干扰ASPP2通过调节自噬促进肝癌细胞增殖
目的 观察营养缺乏状况下干扰p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及机制.方法 构建RNA干扰抑制ASPP2的慢病毒载体表达体系并感染肝癌细胞HepG2,通过电镜观察、MTS法检测、流式细胞术检测以及形态学观察,探讨在缺乏氨基酸和血清的培养条件下干扰ASPP2表达对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响,并以自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)进行干预,探讨ASPP2下调后对细胞的作用是否与自噬有关.结果 在缺乏氨基酸和血清的培养系统里,电镜观察显示干扰ASPP2后自噬泡形成明显增加(P＜0.05),荧光显微镜下可见GFP-LC3荧光自噬小体的表达提高(P＜0.05).MTS检测显示干扰ASPP2表达后HepG2细胞的增殖能力明显增强(P＜0.05),而自噬抑制剂3-MA能够抑制其作用(P＜0.05).形态学观察发现干扰ASPP2能够提高HepG2细胞的抗凋亡能力,应用自噬抑制剂3-MA后细胞活性明显降低,出现了细胞内颗粒物增加等一系列早期死亡的症状.Annexin V-PI双染显示干扰ASPP2使细胞凋亡率由(38±5)％下降为(15±4)％(P＜0.05),加入自噬抑制剂3-MA后细胞凋亡率上升至(36±3)％(P＜0.05).结论 在缺乏营养的状态下,下调ASPP2可能通过调节自噬促进肝癌细胞的增殖和存活.
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甲基强的松龙对星形胶质细胞作用的研究
目的 研究甲基强的松龙(MPSS)对体外培养的星形胶质细胞的作用.方法 采用出生3d内的SD大鼠的新生鼠的大脑制成细胞悬浊液后,应用含15%胎牛血清的DMEM培养液中培养,通过摇床和逐渐传代纯化星形胶质细胞,通过PBS缓冲液代替培养基模拟缺营养模型3h后即刻应用甲基强的松龙(10umol/1),然后继续培养3d,免疫荧光技术鉴定星形胶质细胞;MTT法检测细胞的增殖活性和凋亡;PCR技术测定细胞GFAP表达的变化.结果 星彤胶质细胞摇床后传至第三代,经鉴定其星形胶质细胞纯度达95%以上;缺氧3h后部分细胞形态变圆甚至死亡漂浮在正常细胞表面;正常组和损伤组分别加入MPSS 3d后,损伤组细胞活性与GFAP表达均明显升高,但是正常则没有明显变化.结论 适当剂量的MPSS对缺营养损伤的星形胶质细胞有显著的保护作用,而对正常的星形胶质细胞无显著性保护作用.
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缺营养诱导结直肠癌LoVo细胞自噬对5-FU敏感性的影响
目的:研究缺营养结直肠癌LoVo细胞自噬对5-FU化疗敏感性的影响.方法:结直肠癌LoVo细胞培养在全营养或缺营养培养基中,5-FU作用后CCK-8法、AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞活性和病死率,电子透射显微镜、MDC染色检测自噬反应,reahime RT-PCR检测Beclin 1、P53基因,并引入自噬抑制剂3-MA,比较上述指标变化.结果:5-FU对缺营养LoVo细胞的抑制率低于全营养细胞(P＜0.01);缺营养LoVo细胞的病死率低于全营养细胞;缺营养组出现自噬小体,自噬泡细胞百分率(30.03％)明显大于全营养组(8.21％);缺营养LoVo细胞自噬相关基因Beclin 1、P53基因表达上调.3-MA抑制缺营养组自噬作用后,细胞病死率明显增高(P＜0.01),自噬小体减少,自噬泡百分率降为13.38％,差异有统计学意义(P＜0.01),Beclin 1和P53基因表达量均下降.结论:缺营养结直肠癌LoVo细胞对5-FU化疗敏感性降低,抑制自噬可提高细胞病死率;缺营养细胞Beclin 1和P53基因表达上调,3-MA抑制自噬后二者表达均下降,提示P53可能参与缺营养诱导的自噬.
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促红细胞生成素与甲基强的松龙对星形胶质细胞的作用研究
目的：研究甲基强的松龙（MPSS）与促红细胞生成素（EPO）联合应用对体外培养的原代星形胶质细胞的作用。方法采用出生3 d内SD新生鼠的大脑制成细胞悬浊液后，以含15%胎牛血清的DMEM培养液培养，摇床后逐渐传代、纯化星形胶质细胞，磷酸盐缓冲液（PBS）代替培养基模拟缺营养模型3 h后即刻分别加入MPSS 10μmol/L，EPO 10 U/L，MPSS 10μmol/L﹢EPO 10 U/L，分别继续培养3 d，采用免疫荧光技术鉴定星形胶质细胞，MTT法检测细胞的增殖活性和凋亡，聚合酶链式反应（PCR）技术测定细胞胶质纤维酸性蛋白( GFAP ) mRNA表达水平。结果星形胶质细胞摇床后传至第3代，经鉴定细胞纯度达95%以上；缺营养3 h后部分细胞形态变圆甚至死亡漂浮于正常细胞表面；正常组和损伤组分别加入MPSS，EPO，MPSS﹢EPO 3 d后，损伤组细胞活性与GFAP mRNA表达水平均明显升高（ P﹤0.05），且MPSS和EPO联合应用与单用MPSS、单用EPO相比，细胞活性与GFAP mRNA表达水平明显升高（ P﹤0.05），但正常组无明显变化（ P﹥0.05）。结论适当剂量的MPSS与EPO联合应用对缺营养损伤星形胶质细胞有显著的保护作用，且与单用MPSS、单用EPO相比有显著性差异，但对正常星形胶质细胞无显著的保护作用。
