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ASPP2对P53家族的调控及其在肿瘤治疗中的意义
P53凋亡激活蛋白2(apoptosis stimulating proteins of P53 2,ASPP2)作为P53家族共同转录激活辅因子能和p53野生型、p63和p73结合,并促进其对下游促凋亡靶基因的转录,促进细胞凋亡.研究表明ASPP2参与细胞生长,凋亡以及损伤应激等一系列的生理反应,对研究肿瘤发生和治疗具有重要意义.
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iASPP和ASPP2在非小细胞肺癌组织中的表达及其与临床特征的关系
目的:检测人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC) 组织中P53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulating protein of P53,ASPP)家族的iASPP、ASPP2以及P53蛋白的表达,并探讨iASPP、ASPP2表达与P53蛋白表达及NSCLC临床病理特征的关系.方法:收集2005年1月至2005年12月贵阳医学院附属医院NSCLC术后的新鲜肺癌组织54例、癌组织边缘2 cm以外的癌旁组织44例用于研究.采用免疫组织化学与Western blotting方法检测肺癌组织、癌旁组织中iASPP、ASPP2和P53的表达情况;比较iASPP、ASPP2在肺癌组织与癌旁组织中表达的差异,并分析其与P53表达及临床病理特征的相关性.结果:P53阴性时,NSCLC组织中iASPP蛋白表达阳性率为71.4%,显著高于癌旁组织的21.7%(P=0.001),NSCLC组织与癌旁组织中ASPP2蛋白表达率的差异无统计学意义;NSCLC组织iASPP表达水平显著高于癌旁组织[(0.57±0.36) vs (0.28±0.24),P=0.001],ASPP2表达水平在癌组织与癌旁组织中差异无统计学意义.P53阳性时,癌组织、癌旁组织中的iASPP、ASPP2蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05).P53阴性时癌组织中iASPP蛋白的表达显著高于P53阳性组织中的表达(P<0.05),P53阴性时癌组织中ASPP2 蛋白表达与P53阳性组织中表达的差异无统计学意义.不同性别、年龄、病理类型、病理分级、临床分期的iASPP、ASPP2蛋白表达差异无统计学意义.结论:人NSCLC 组织中iASPP表达与P53表达状态有关,P53阴性时iASPP高表达.iASPP、ASPP2蛋白表达与NSCLC临床病理特征无明显相关性.
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营养缺乏状况下干扰ASPP2通过调节自噬促进肝癌细胞增殖
目的 观察营养缺乏状况下干扰p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及机制.方法 构建RNA干扰抑制ASPP2的慢病毒载体表达体系并感染肝癌细胞HepG2,通过电镜观察、MTS法检测、流式细胞术检测以及形态学观察,探讨在缺乏氨基酸和血清的培养条件下干扰ASPP2表达对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响,并以自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)进行干预,探讨ASPP2下调后对细胞的作用是否与自噬有关.结果 在缺乏氨基酸和血清的培养系统里,电镜观察显示干扰ASPP2后自噬泡形成明显增加(P＜0.05),荧光显微镜下可见GFP-LC3荧光自噬小体的表达提高(P＜0.05).MTS检测显示干扰ASPP2表达后HepG2细胞的增殖能力明显增强(P＜0.05),而自噬抑制剂3-MA能够抑制其作用(P＜0.05).形态学观察发现干扰ASPP2能够提高HepG2细胞的抗凋亡能力,应用自噬抑制剂3-MA后细胞活性明显降低,出现了细胞内颗粒物增加等一系列早期死亡的症状.Annexin V-PI双染显示干扰ASPP2使细胞凋亡率由(38±5)％下降为(15±4)％(P＜0.05),加入自噬抑制剂3-MA后细胞凋亡率上升至(36±3)％(P＜0.05).结论 在缺乏营养的状态下,下调ASPP2可能通过调节自噬促进肝癌细胞的增殖和存活.
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白藜芦醇诱导乳腺癌细胞凋亡过程中ASPP1、ASPP2基因的表达
目的 检测白藜芦醇作用MCF-7(野生型p53)和MDA-MB-231(突变型p53)乳腺癌细胞后ASPP1和ASPP2的表达.方法 采用MTT法检测白藜芦醇对乳腺癌细胞增殖的影响,采用Western blot法检测经白藜芦醇处理后,MCF-7、MDA-MB-231和MCF-7/Caspase3细胞株PARP的蛋白水平变化.采用RT-PCR、Western blot法检测经白藜芦醇处理后,MCF-7、MDA-MB-231细胞中ASPP1和ASPP2的 mRNA和蛋白表达变化.结果 白藜芦醇对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB231的生长均有抑制作用,呈浓度依赖性.MCF-7和MDA-MB-231细胞中ASPP1和ASPP2的mRNA和蛋白表达均较低,与MDA-MB-231相比,MCF-7细胞中ASPP2的蛋白表达更低.白藜芦醇作用于细胞后,与对照组相比,ASPP1和ASPP2的mRNA和蛋白表达均升高,且随药物浓度增高而表达增高;ASPP1和ASPP2的mRNA和蛋白表达与肿瘤细胞的凋亡呈正相关.结论 白藜芦醇诱导乳腺癌细胞ASPP1、ASPP2基因高表达.
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人AS PP2重组腺病毒质量控制研究
目的对人ASPP2重组腺病毒制剂进行质量分析，并针对其关键质量特性建立质控方法。方法采用PCR法对重组腺病毒的载体结构特征基因E2B和目的基因ASPP2进行扩增，琼脂糖电泳进行分子量鉴定；采用UV-SDS 法测定重组腺病毒的病毒颗粒数；采用组织培养半数感染剂量法（TCID50）测定重组腺病毒的感染滴度；采用Western blot法对重组腺病毒感染靶细胞后目的蛋白ASPP2的表达情况进行检测；通过MTT实验观察重组腺病毒对肝癌细胞的生物学效应；采用A549细胞进行重组腺病毒的复制型病毒检测。结果腺病毒载体E2B基因和目的基因ASPP2的鉴定结果与理论值相符；重组腺病毒的病毒颗粒数为每毫升5.6×1012 VP，病毒滴度为每毫升2×1011 IU，比活性为3.5％；病毒感染靶细胞24 h后可检测出ASPP2蛋白的表达；重组腺病毒对肝癌细胞具有生长抑制作用；复制型腺病毒（RCA）水平小于1 RCA／3.0×1010 VP，符合中国食品药品监督管理局（SFDA）的标准。结论建立了人ASPP2重组腺病毒的关键特征的质量控制方法，为该重组腺病毒质量标准的建立及相关应用奠定了基础。
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胰腺癌组织中iASPP和ASPP2的表达及其与临床特征的关系
目的 检测人胰腺癌组织中p53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族ASPP2及iASPP蛋白的表达,并探讨野生型p53癌株中ASPP2和iASPP表达与胰腺癌临床病理特征的关系.方法 选取潍坊市人民医院病理科2005年～2010年66例胰腺腺癌及35例癌旁组织标本进行研究.利用免疫组化方法检测胰腺癌组织和癌旁组织的iASPP,ASPP2和p53的表达情况.对p53阴性的45例标本进行研究,比较ASPP2,iASPP在癌组织及癌旁组织表达中的差异,并分析其与临床病理特征的关系.结果 在p53阴性的胰腺癌组织中,iASPP蛋白表达水平显著高于癌旁组织(P＜0.01),ASPP2蛋白表达率的差异无统计学意义.不同性别、年龄、病理类型、病理分级及临床分期胰腺癌组织中,iASPP,ASPP2蛋白表达差异无显著性.结论 p53阴性的胰腺癌组织中,ASPP2蛋白表达无明显变化,iASPP蛋白表达水平升高,iASPP与胰腺癌的发生密切相关.
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iASPP,ASPP2在食管鳞癌组织中的表达及其与临床特征的关系
目的 检测食管癌中iASPP,ASPP2的表达并探讨其临床意义.方法 应用免疫组化PV-6000法对32例食管鳞状细胞癌组织中iASPP,ASPP2进行检测.结果 ASPP2在食管癌组织中的阳性表达率比在正常组织明显降低(P＜0.05),而iASPP在食管癌组织中的阳性表达率明显高于正常食管组织(P＜0.05);ASPP2在食管癌组织中的表达情况与临床病理特征无相关性(p＞0.05),而iASPP在食管癌中的表达与肿瘤的组织分化、浸润深度、淋巴结转移和临床分期相关(P＜0.05).结论 ASPP2和iASPP在食管癌组织中有不同程度地表达,iASPP可作为判定患者预后的重要指标.
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ASPP1和ASPP2基因高表达对白藜芦醇诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡能力的影响
目的 观察ASPP1和ASPP2基因高表达对白藜芦醇诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡能力的影响.方法 采用瞬时转染法将pcDNA3/ASPP1和pcDNA3/ASPP2质粒分别转染入乳腺癌细胞MCF-7中,经G418筛选获得高表达ASPP1和ASPP2的MCF-7阳性克隆细胞株MCF-7/ASPP1与MCF-7/ASPP2.MCF-7、MCF-7/ASPP1与MCF-7/ASPP2细胞分别加入0、25、50 μmol/L白藜芦醇,采用MTT法检测细胞增殖情况,RT-PCT法检测细胞p53下游基因bax与p21mRNA表达情况;3种细胞分别加入0、100、200 μmol/L白藜芦醇,采用ELISA法检测细胞凋亡率.结果 MTT结果显示,25、50 μmol/L白藜芦醇处理后,MCF-7/ASPP1与MCF-7/ASPP2细胞存活细胞吸光度值均明显低于MCF-7细胞(P＜0.05);RT-PCR结果显示,25、50 μmol/L白藜芦醇处理后,MCF-7/ASPP1与MCF-7/ASPP2细胞中Bax和p21mRNA表达水平高于MCF-7细胞;细胞凋亡试验结果显示,100、200 μmol/L白藜芦醇处理后,MCF-7/ASPP1与MCF-7/ASPP2细胞凋亡细胞吸光度值均明显高于MCF-7细胞(P＜0.05).结论 ASPP1和ASPP2高表达可增强乳腺癌细胞对白藜芦醇的敏感性,且随浓度增高而敏感性增强.
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垂体腺瘤组织中ASPP2 mRNA和Ki-67蛋白的表达
目的:研究垂体腺瘤组织中ASPP2基因mRNA和Ki-67抗原的表达情况.方法:收集垂体腺瘤手术标本71例(其中侵袭性垂体腺瘤36例,非侵袭性垂体腺瘤35例; 病理分型包括生长激素腺瘤14例,泌乳素腺瘤13例,促肾上腺皮质激素腺瘤5例,促性腺腺瘤7例,无功能腺瘤10例,多激素腺瘤22例),采用RT-PCR方法检测垂体腺瘤标本中ASPP2基因mRNA的表达情况,采用免疫组织化学方法检测垂体腺瘤石蜡切片中Ki-67抗原的表达情况,并分析二者的相关性.结果:71例垂体腺瘤手术标本均有ASPP2基因mRNA和Ki-67表达,不同病理类型间ASPP2基因mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);但不同病理类型间Ki-67 LI差异有统计学意义(P<0.05).非侵袭垂体腺瘤和侵袭性垂体腺瘤组织中ASPP2 mRNA的表达和Ki-67 LI差异均有统计学意义(P<0.05);ASPP2基因表达水平与Ki-67 LI呈负相关(r＝-0.256,P<0.05).结论:人垂体腺瘤组织中ASPP2基因的表达与其细胞增殖活性和侵袭性行为有关,可以作为判断垂体腺瘤侵袭性和预测复发的有效临床检测指标.
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p53凋亡刺激蛋白家族对自噬调控作用的研究进展
p53凋亡刺激蛋白家族(apoptosis stimulating proteins of p53 family，ASPPs)由ASPP1、ASPP2和iASPP (inhibitory member of the ASPP family)3个成员组成，该家族可通过与p53家族(p53/p63/p73)结合，调控细胞凋亡。自噬是细胞通过溶酶体溶解并回收利用胞内物质，藉此以维持自我稳态的一种方式。目前认为，自噬功能紊乱与肿瘤、神经退行性病变等多种疾病的发生和发展密切相关。本综述总结了近期关于ASPPs对自噬调控作用的研究进展，这些研究证明ASPPs能调控细胞内的自噬水平，并提示ASPPs可能成为多种疾病的潜在治疗靶点。
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P53未突变型大肠癌组织中ASPP2和iASPP的表达及意义
目的 探讨P53凋亡刺激蛋白家族ASPP2、iASPP蛋白在P53未突变型(P53阴性)大肠癌组织中的表达及临床意义.方法 应用免疫组化分别检测ASPP2、iASPP蛋白在P53阴性大肠腺癌及正常大肠组织中的表达情况,并分析ASPP2、iASPP蛋白表达与临床病理特征之间关系.结果 ASPP2蛋白在大肠腺癌组织中的阳性表达率明显低于正常大肠组织(P＜0.01),iASPP蛋白在大肠腺癌组织中的阳性表达率显著高于正常大肠组织(P＜0.01).iASPP蛋白在大肠腺癌组织中的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位无关(P＞0.05),而与低分化程度和Dukes分期有关(P＜0.05);ASPP2蛋白表达与大肠腺癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、分化程度、Dukes分期均无关(P＞0.05).ASPP2与iASPP在大肠腺癌组织中的表达具有相关性(C =0.697,P＜0.05).结论 在P53未突变大肠癌患者,肿瘤的发生、发展与iASPP蛋白水平升高、ASPP2蛋白水平降低有关,且两者表达密切相关.通过抑制iASPP或激活ASPP2来提高诱导细胞凋亡功能成为大肠癌治疗的新方法.
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人脑胶质瘤中ASPP1和ASPP2蛋白的表达及其与细胞凋亡的相关性
目的 研究P53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulating protein of P53,ASPP)家族成员ASPP1、ASPP2蛋白在神经胶质瘤中的表达及其与细胞凋亡情况的相关性.方法 通过免疫组化的方法联合检测60例人脑胶质瘤组织和10例正常脑组织中ASPP1、ASPP2蛋白表达.采用TUNEL法检测胶质瘤组织与正常脑组织标本中的细胞凋亡情况,分析ASPP1、ASPP2蛋白表达与细胞凋亡情况的相关性.结果 ASPP1和ASPP2蛋白在正常脑组织和胶质瘤组织中均有表达,且它们在不同级别胶质瘤中的阳性表达率比较差异有统计学意义(P<0.05);所有的正常脑组织和胶质瘤组织中均可见到不同程度标记的凋亡细胞,Spearman等级相关分析显示凋亡细胞的表达与肿瘤的恶性程度呈负相关(rs=-0.320,P<0.05).ASPP2蛋白在人脑神经胶质瘤组织中的表达与细胞凋亡的发生呈正相关(rs=0.596,P<0.05),而ASPP1蛋白在人脑神经胶质瘤组织中的表达与细胞凋亡的发生无相关性(rs=0.197,P>0.05).结论 联合检测ASPP1、ASPP2蛋白及细胞凋亡情况可较准确评价人脑神经胶质瘤的病理特征,对判断神经胶质瘤的恶性程度有重要的临床价值,为探讨人脑神经胶质瘤的可能发病机制提供分子实验依据,以ASPP1、ASPP2蛋白或其亚型为靶点的胶质瘤治疗研究将具有广阔的前景.
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ASPP2及P16INK4a在食管癌中的表达及其与凋亡的关系
目的 探讨ASPP2、P16INK4a在食管癌的表达与患者临床病理特征及凋亡的相关性.方法 SP免疫组化染色法检测112例食管癌及31例正常食管黏膜ASPP2、P16INK4a的表达,分析它们与患者临床病理特征的相关性;在上述蜡块中随机选取37例食管癌及12例正常食管黏膜,采用原位缺口末端标记技术(TUNEL)检测上皮细胞的凋亡情况,分析凋亡阳性率与以上二标记物在食管癌表达的相关性.结果 ASPP2、P16INK4a在食管癌与正常食管黏膜的表达差异有统计学意义,且二者异常表达均与食管癌组织学分级、淋巴结转移相关(P<0.05).TUNEL检测显示正常食管黏膜与食管癌的凋亡阳性率差异有统计学意义,且其与ASPP2、P16INK4a在食管癌的表达相关(P<0.05).结论 ASPP2、P16INK4a参与食管癌发生、发展及凋亡等过程,联合检测二者可辅助食管癌诊断并指导临床治疗.
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RT-PCR对原发性肝癌中ASPP2基因检测的意义
目的 探讨逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对原发性肝癌中ASPP2基因检测的意义.方法 选择原发性肝癌手术患者36例,所有患者手术切除30 min内收集癌组织和癌旁组织,另选20例正常肝组织作为对照.各组患者行RT-PCR半定量检测ASPP2水平,患者术后进行为期1年的随访,观察ASPP2 mRNA表达与患者年龄、性别、肿瘤直径、临床分期、癌栓形成、淋巴结转移以及术后复发等病理指标的相关性.结果 肝癌组织中的ASPP2水平为(0.53±0.19),显著高于癌旁组织(0.71±0.15)和正常肝组织(0.85±0.19)中的ASPP2含量,差异有统计学意义(P＜0.05).ASPP2 mRNA表达水平与肿瘤的临床分期、肿瘤直径以及术后复发情况密切相关(P＜0.05).结论 ASPP2在肝癌组织中呈现低表达,ASPP2表达的降低预示着肿瘤患者的不良预后,对ASPP2的检查能够对肝癌的早期诊断及确定治疗方案提供可靠依据.
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Aspp2与肿瘤相关性的研究
p53凋亡刺激蛋白2（apoptosis stimulating of p532，Aspp2）是 p53凋亡刺激蛋白家族（apoptosis stimulating of p53，Aspp）中的重要成员。作为一个重要的抑癌基因，Aspp2常与 p53结合，对肿瘤产生抑制作用。此外，基因启动的甲基化修饰、部分转录因子的激活作用等也能调节 Aspp2的表达，从而对多种肿瘤产生不同程度的影响。本文对 Aspp2基因与多种肿瘤相关性的研究作一综述。
