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小鼠超声心动图成像方法学的探讨
目的 探讨小鼠超声心动图的基本成像方法.方法 采用彩色超声诊断仪,在小鼠胸骨左缘、胸骨右缘、心尖部及胸骨上窝扫查,采集心脏超声图像,并进行心脏结构、各瓣口血流及时间参数的测量.结果 120只小鼠均成功完成了超声图像的采集,胸骨旁左室长轴观、左室短轴观、主动脉弓长轴观、升主动脉长轴观、主动脉短轴观、肺动脉长轴观、心尖四腔观均可清晰显示,并顺利进行心脏结构、各瓣口血流及时间参数的测量.结论 小动物超声仪能提供清晰的小鼠心脏解剖结构图像,并进行相关心脏功能参数测量,但须注意操作小鼠超声心动图时与人类心脏超声有很大不同.在同一实验中严格掌握统一的图像采集及测量标准至关重要.
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超声生物显微镜成像对正常小鼠心血管的初步研究
目的 探讨超声生物显微镜对小鼠心血管成像的方法及价值.方法 选择8、16、24及32周龄C57BL/6健康成年雄性小鼠32只,每组各8只,采用Visualsonics公司Vevo 770小动物超声成像系统,经胸骨左缘、心尖、胸骨右缘及胸骨上窝等扫查窗口,观察并分析小鼠心脏、大血管的结构及血流频谱,并对左心收缩及舒张功能进行评价.结果 经上述扫查窗口,可获得左心室长轴、左心室短轴、升主动脉长轴、主动脉弓长轴、主动脉短轴、右心室流入道、肺动脉长轴等切面,仅心尖切面显示不满意.通过这些切面能清晰显示左心房、左心室、二尖瓣、主动脉及主动脉弓、室间隔、右心房、右心室、三尖瓣、肺动脉、无名动脉及左颈总动脉等结构,进而测量其内径,并可顺利获得各瓣口的血流频谱.各切面心脏及大血管二维径线测值及各瓣口血流脉冲多普勒测值比较显示,各周龄组相关测量数据间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 超声生物显微镜可很好地应用于小鼠心脏及大血管成像,采用适当的扫查窗口和切面可获得满意的图像.超声医师经过短期培训即可熟练掌握该技术,因而具有很好的应用前景.
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正常小鼠主动脉的超声生物显微镜成像分析
目的 探索超声生物显微镜进行小鼠主动脉的成像方法及其应用价值.方法 采用Visualsonics公司Vevo 770小动物超声成像系统对32只健康成年雄性C57BL/6小鼠进行观察,显示小鼠主动脉及其分支结构,测量升主动脉内膜-中膜厚度(IMT)并与病理结果进行对照.结果 小鼠主动脉IMT的超声生物显微镜成像测值与病理测值相关性良好(r=0.593,P<0.01),超声生物显微镜成像与病理测值的直线回归方程为Y=0.142X+0.076.8、16、24和32周小鼠组间比较,超声及病理所测IMT差异无统计学意义.结论 超声生物显微镜成像能清晰显示正常小鼠主动脉切面,并检测升主动脉IMT,为进一步研究动脉粥样硬化小鼠模型奠定了基础.
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高表达IDO的树突状细胞抑制T细胞增殖的实验研究
目的:研究基因转染后高表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的树突状细胞(DC)对T细胞增殖的抑制作用,以探讨其在器官移植中排斥反应的作用.方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从腹膜炎小鼠的小肠组织中获取IDO全长cDNA片段,将其克隆至真核表达质粒pTracer中.构建真核表达质粒IDO-pTracer,随后用LipofectamineTM 2000介导转染小鼠脾脏DC,分为未转染组、空载体转染组、IDO基因转染组和IDO基因转染并添加1-甲基色氨酸(1-MT)组,以混合淋巴细胞反应的方法检测转染后DC对同种异系T细胞增殖的作用.结果:克隆的小鼠IDO基因全长cDNA大小约1.3 kb,无碱摹突变,以构建的重组真核表达质粒IDO-pTracer转染DC后,混合淋巴细胞反应结果显示IDO基因转染组的刺激指数(SI)低于未转染组、空载体转染组及IDO基因转染并添加1-MT组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:成功构建了IDO基因的真核表达载体IDO-pTracer,且IDO基因转染DC具有抑制异系T细胞增殖的作用.
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D-型丝氨酸、丝氨酸消旋酶及D-型氨基酸氧化酶在小鼠出生后个体发育中的分布变化及相互关系
目的:探讨小鼠个体发育过程中皮层、纹状体、小脑、心脏、肺、肝脏、脾脏、肾脏和骨骼肌中D-型丝氨酸,丝氨酸消旋酶(SR)及D-型氨基酸氧化酶(DA0)的分布特征及相互关系.方法:RT-PCR法检测SR和DAO mRNA水平;Westernblot检测SR蛋白水平;比色法检测DAO酶活力;高效液相法检测游离D-型丝氨酸含量.结果:小鼠出生后早期个体发育过程中皮层、纹状体和小脑内游离D-型丝氨酸含量急剧增加并伴有SR平行增加.在检测组织中,仅小脑和肾脏可检测到DAO酶活力,且随着小脑和肾脏内DAO酶活力的增加,D-型丝氨酸含量急剧下降,并在出生后第三周末降至成年微量水平,但此时DAO酶活力却仍不断增加.结论:哺乳动物体内D-型丝氨酸主要由SR催化生成,但在皮层和纹状体等D-型丝氨酸浓度很高,但缺乏DAO的组织中D-型丝氨酸的降解尚有其它机制参与.小脑和肾脏中的DAO除参与D-型氨基酸代谢外,可能还具有其它的生理功能.
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永久性大脑局灶缺血后angiopoietin-2和血管内皮生长因子在小鼠大脑皮层的表达
目的:研究永久性大脑局灶缺血后血管内皮生长因子(VEGF)、angiopoietin-1(Ang-1)、Ang-2、Tie-1和Tie-2在C57BL/6小鼠大脑皮层的表达.方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)研究VEGF、Ang-1、Ang-2、Tie-1和Tie-2 mRNA表达的变化.采用免疫组织化学法研究VEGF和Ang-2蛋白的表达.结果:在正常小鼠大脑皮层VEGF、Ang-l、Ang-2、Tie-1和Tie-2 mRNA表达水平很低.当大脑中动脉阻断(MCAO)后,在梗塞皮层VEGF、Ang-2和Tie-2 mRNA表达显著增加,并且可维持到第7天.但Ang-1和Tie-1 mRNA表达在梗塞皮层无明显变化.在正常小鼠大脑皮层,几乎观察不到VEGF和Ang-2蛋白的表达.MCAO后8小时Ang-2蛋白表达在皮层梗塞区明显增加,l天后可在梗塞灶周边区看到Ang-2蛋白增加;而VEGF蛋白则在MCAO后2小时在皮层梗塞区即显著升高,1天后在梗塞灶周边区可观察到VEGF蛋白增加.不论在皮层梗塞区还是在梗塞灶周边区,Ang-2和VEGF免疫阳性都限于内皮细胞和胶质样细胞.结论:大脑局灶缺血后Ang-2和VEGF表达增加,可能有利于缺血大脑皮层的血管新生.
