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大鼠细胞外信号调节激酶1基因3'非编码区双荧光素酶报告载体的构建及rno-miR-15b-5p对其活性的影响
目的 以大鼠细胞外信号调节激酶1(ERK1)基因3'非编码区(UTR)为研究对象,构建含有ERK1基因3'UTR区的野生型以及突变型重组双荧光素酶报告载体,通过分析双荧光素酶报告载体的活性,明确rno-miR-15b-5p对报告载体的调节作用.方法 采用miRNeasy Mini Kit提取大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞的总RNA,以PC12细胞的cDNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)将ERK1基因3'UTR克隆到pmiR-RB-ReportTM vector中.利用重叠延伸PCR,将ERK1基因3'UTR中的rno-miR-15b-5p潜在的靶序列TGCTGCT分别突变成CGAACGT和GTACACG,并将突变的ERK1基因3'UTR克隆到pmiR-RB-ReportTM vector中.结果 成功构建了包含ERK1基因3'UTR区的野生型报告载体pmiR-ERK13'UTR和突变型报告载体pmiR-ERK1-mut 3'UTR.利用荧光素酶活性检测系统,发现rno-miR-15b-5p mimic可以降低野生型报告载体的活性(P<0.001),但不影响突变型报告载体的活性.结论 成功构建ERK1基因3'UTR区野生型和突变型双荧光素酶报告载体,初步证明ERK1基因3'UTR区是rno-miR-15b-5p的结合靶点.
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血管性痴呆小鼠海马细胞外信号调节激酶免疫组化表达及其意义
目的 探讨血管性痴呆小鼠海马CA1区锥体细胞细胞外信号调节激酶1(extracellular signal-regulated kinase 1,ERK1)的免疫组化表达及其意义.方法 采用双侧颈总动脉线结反复缺血-再灌注法制备血管性痴呆(VaD)小鼠模型,共设健康对照组、假手术组及VaD模型组,利用跳台试验和水迷宫试验观测其行为学改变,应用免疫组化技术观测其海马CA1区锥体细胞ERK1的表达变化,对小鼠学习成绩和记忆成绩与ERK1免疫反应阳性锥体细胞免疫组化评分进行相关性分析.结果 VaD模型组小鼠学习、记忆成绩低于健康对照组和假手术组 (P<0.05).VaD模型组小鼠ERK1免疫反应阳性锥体细胞免疫组化评分 (13.38±3.32) 较健康对照组(21.21±9.15)和假手术组(21.00±7.21)明显减少(P<0.01),而且各组小鼠海马ERK1免疫反应阳性锥体细胞免疫组化评分与小鼠学习、记忆的各项参数存在相关关系.结论 VaD小鼠海马CA1区锥体细胞ERK1表达减少可能是VaD小鼠学习、记忆成绩下降的分子机制之一.
关键词： 血管性痴呆 细胞外信号调节激酶1 免疫组化 -
组织芯片技术探讨ERK1和p16在胃肠间质瘤中的表达及意义
目的:应用组织芯片技术探讨细胞外信号调节激酶1(ERK1)与p16在胃肠间质瘤中的表达情况及两种蛋白间的相关性.方法:采用免疫组化Maxvision法检测40例胃肠间质瘤和40例正常对照组中ERK1和p16的表达情况.结果:ERK1在胃肠间质瘤组中的表达水平高于正常对照组,而p16表达情况相反(P<0.032);未发现ERK1与p16之间有明确相关关系.结论:ERK1与p16可能参与了胃肠间质瘤的发生、发展过程;组织芯片技术可用于大规模高效检测临床样本,具快速、方便、经济、准确的特点.
关键词： 胃肠间质瘤 细胞外信号调节激酶1 p16 组织芯片 -
CD133在甲状腺乳头状癌中的表达及其与细胞外信号调节激酶1表达的关系
目的：检测肿瘤干细胞标志物CD133在甲状腺乳头状癌(PTC)组织中表达及其与细胞外信号调节激酶1(ERK1)的关系及其临床病理意义。方法：采用免疫组织化学EliVisionTM plus法检测68例PTC组织和40例结节性甲状腺肿组织中CD133和ERK1的表达情况。结果：在结节性甲状腺肿组织和PTC组织中,CD133和ERK1的阳性率分别为10.0%与50.0%和12.5%与63.2%,2组差异均有统计学意义(P<0.01)。 CD133的表达水平在PTC组织的不同分化程度、淋巴结转移和临床分期间差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01)；PTC组织的分化越差,淋巴结发生转移及临床分期越高,ERK1的阳性率亦越高(P<0.01)。 CD133与ERK1的表达呈正相关关系(P<0.05)。结论：CD133和ERK1的异常表达参与了PTC的发生、发展、浸润及转移；早期联合检查CD133和ERK1对PTC的进展及预后判断均有临床意义。
关键词： 甲状腺肿瘤 CD133 细胞外信号调节激酶1 肿瘤干细胞 -
Aβ1～42致老年性痴呆大鼠海马神经元细胞外信号调节激酶1,2的表达
目的:建立老年性痴呆大鼠模型,观察老年性痴呆大鼠海马神经元细胞外信号调节激酶1,2表达的变化,探讨其在老年性痴呆发病机制中的作用.方法:采用立体定向下双侧海马注射Aβ1～42,建立老年性痴呆动物模型,经Y型电迷宫试验测试其行为学,采用免疫组织化学、蛋白印迹等方法观察细胞外信号调节激酶1,2表达变化.结果:模型组大鼠学习记忆能力较对照组显著下降,免疫组化显示海马CA1区细胞外信号调节激酶1,2的免疫反应阳性神经元数目及细胞平均光密度值均显著减少,蛋白印迹显示模型组较对照组条带变细,灰度值变小,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:海马神经元细胞外信号调节激酶1,2表达的减少可能参与了老年性痴呆的发病机制.
