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脊髓HMGB1/NF-κB参与雷公藤红素对慢性炎症痛大鼠的镇痛作用
目的:观察雷公藤红素(celastrol,Cel)对慢性炎症痛大鼠热痛敏、脊髓背角HMGB1及相关信号分子表达的影响,探讨Cel参与慢性炎症痛的相关机制.方法:30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、VEH组(腹腔注射DMSO)、Cel 0.25 mg/kg组、Cel 0.5 mg/kg组和Cel 1 mg/kg组.对照组大鼠足底注射0.1 ml生理盐水,其余组大鼠通过足底注射0.1 ml完全弗氏佐剂(complete Freund''s adjuvant,CFA)构建慢性炎症痛模型.造模后10 h Cel组连续14 d给予Cel腹腔注射治疗,各组大鼠分别于造模后的1、3、7、10、14 d进行热痛阈及足趾容积测定,据测定结果筛选出佳药物浓度Cel 1 mg/kg;108只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、VEH组和Cel 1 mg/kg组,造模给药后各组大鼠分别于给药后的1、3、7、14 d进行热痛阈及足趾容积测定,测定后取脊髓腰膨大段,应用Western Blot方法检测HMGB1、COX-2蛋白表达及NF-κB磷酸化水平的变化.qPCR法检测HMGB1,IL-1β,TNF-α,GFAP mRNA的表达.结果:1 mg/kg Cel可明显减轻模型大鼠热痛敏,且明显减轻大鼠足肿胀度.造模后第3 d、7 d、14 d脊髓背角内HMGB1,COX-2蛋白表达及NF-κB的磷酸化水平明显上调,给予Cel治疗显著下调其表达;造模后3 d、7 d、14 d脊髓背角内HMGB1、IL-1β、TNF-α及GFAP mRNA明显上调,Cel可显著抑制其上调水平.结论:1 mg/kg Cel可有效缓解CFA诱导的慢性炎症痛痛敏行为,其机制可能是通过抑制脊髓星形胶质细胞的活化,下调脊髓背角中HMGB1、IL-1β、TNF-α及COX-2表达水平及NF-κB的磷酸化水平来实现.
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RAGE阻断剂FPS-ZM1对糖基化终末产物所致大鼠脑部炎症反应的影响及机制
目的：探讨RAGE受体特异性阻断剂FPS-ZM1对糖基化终末产物（ AGEs）所致大鼠脑部炎症反应及认知功能的影响。方法将40只大鼠随机分为四组：生理盐水组（ NC组） FPS-ZM1对照组、AGEs组和FPS-ZM1组，采用脑立体定位技术，向AGEs组及FPS-ZM1组大鼠两侧海马注射AGEs 5μl，以制造动物损伤模型，用同样方法向 NC组及 FPS-ZM1对照组注射等量生理盐水，以制造模型对照；造模前1 w以1 mg · kg-1· d-1 FPS-ZM1向FPS-ZM1组和FPS-ZM1对照组大鼠进行腹腔注射，并连续4 w给药，AGEs组、NC组则同时注射相同体积生理盐水，造模3 w后对各组大鼠进行Morris水迷宫实验，检测各组大鼠逃逸潜伏期（ EL）；用 Elisa 检测各组大鼠海马区 Aβ1～40， Aβ1～42的水平；用 Western 印迹检测各组大鼠RAGE，p-NF-κB和肿瘤坏死因子（ TNF）-α蛋白的表达；用免疫组织化学法检测各组大鼠海马区TNF-α蛋白的表达强度。结果 AGEs组与其他各组相比，EL显著延长（P＜0.01），且 Aβ1～40、Aβ1～42浓度均显著升高（P＜0.01）；同时 AGEs 组 RAGE、p-NF-κB 和 TNF-α的蛋白表达明显增强（P＜0.01）；FPS-ZM1干预后上述各指标均明显低于AGEs组。结论 FPS-ZM1作为RAGE受体特异性阻断剂，能作用中枢系统减少Aβ1～40，生成从而提高AGEs脑损伤大鼠的智能，并通过抑制脑组织 p-NF-κB上调，减轻脑AGEs损伤引起的炎性反应。该药因能透过血脑屏障有望成为抑制阿尔茨海默样病变的有效措施。
关键词： 高级糖基化终末产物受体 阿尔茨海默病 FPS-ZM1 p-NF-κB Aβ -
雷公藤红素对β淀粉样蛋白诱导SH-SY5Y细胞Tau蛋白异常磷酸化影响的研究
目的 观察雷公藤红素对β淀粉样蛋白1-42导致SH-SY5Y细胞Tau蛋白异常磷酸化的影响及其可能机制.方法 用Aβ1-42刺激SH-SY5Y细胞,建立Tau蛋白异常磷酸化的细胞模型.加入雷公藤红素干预,Western 印迹法检测Aβ142导致Tau蛋白异常磷酸化的变化,同时检测p-NF-κB表达情况;siRNA法下调TLR4表达,Western印迹法检测Aβ1-42导致的Tau蛋白异常磷酸化的变化情况;同时观察下调TLR4后,Aβ1-42刺激对p-NF-κB表达的影响.结果 Aβ1-42刺激SH-SY5Y细胞,导致Tau蛋白Ser199/202、Ser396位点的磷酸化水平增加,而雷公藤红素能降低这两个位点磷酸化水平;Aβ1-42导致细胞p-NF-κB表达增加,雷公藤红素干预后p-NF-κB表达下调,且NF-κβ抑制剂BAY11-7082同样能降低Aβ1-42导致的Tau蛋白异常磷酸化;下调TLR4表达,Aβ1-42导致的Tau蛋白异常磷酸化及p-NF-1B表达下降.结论 雷公藤红素降低Aβ1-42导致的SH-SY5Y细胞Tau蛋白异常磷酸化可能与其抑制TLR4/NF-κB通路活性有关.
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蛇床子素预处理对大鼠心脏缺血再灌注损伤的作用
目的:探讨蛇床子素(osthole,Ost)预处理对大鼠心脏缺血再灌注损伤的作用及其机制.方法:建立大鼠心脏缺血再灌注损伤模型.30只雄性SD大鼠随机平均分为Ost组、模型组和假手术组.假手术组和模型组手术前1h给予生理盐水(50 mg·kg-,腹腔注射),Ost组缺血前1h给予Ost(50 mg·kg-,腹腔注射),模型组和Ost组血管夹夹闭左冠状动脉前降支,置于32℃温箱30 min后松开血管夹,4h后收集各组大鼠心脏和血清.HE染色后观察心脏病理学形态学变化,Western blotting检测P38,p-P38和p-NF-κB;RT-PCR检测白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-oα)的心脏表达和分泌;ELISA检测乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、心肌型肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)、IL-6、IL-1β和TNF-α的水平.结果:与假手术组比较,模型组病理改变,p-P38、p-NF-κB、LDH、CK-MB、CK、IL-6、IL-1β和TNF-α表达均明显增加(P＜0.05),但P38和NF-κB表达无明显差异.与模型组比较,Ost组病理改变,p-NF-κB、LDH、CK-MB、CK、IL-6、IL-1β和TNF-α表达明显减少(P＜0.05),但p-P38表达进一步增加,而P38和NF-κB表达仍无明显变化.结论:Ost预处理可通过抑制炎症反应发挥对大鼠心脏缺血再灌注损伤的保护作用,其作用机制与促进P38信号通路激活相关.
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Nrf2激活对AGEs诱导大鼠海马损伤的抗炎、抗氧化保护作用
目的 探讨核因子红系2相关因子2(nuclear factor erythroid derived 2-related factor 2,Nrf2)激活剂莱菔硫烷(sulforaphane,SFP)对糖基化终末产物(advanced glycation products,AGEs)诱导大鼠海马氧化应激损伤和炎症反应的保护作用及其机制.方法 40只Wistar大鼠被随机分为4组:生理盐水组(Control 组)、SFP对照组、AGEs组和SFP组,给予AGEs组及SFP组大鼠双侧海马立体定向注射AGEs 5μL,造成AGEs组大鼠海马损伤,Control组及SFP对照组注射等量的生理盐水作为对照;造模前1周给予SFP组和SFP对照组大鼠5 mg· kg-1·d-1SFP腹腔注射,连续4周,AGEs组及Control组则同时给予同体积的生理盐水,造模结束后3周进行Morris水迷宫实验,测定大鼠逃避潜伏期及穿越平台次数;生化试剂盒检测大鼠海马超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)水平;ELISA和Western blot法测定肿瘤坏死因子(TNF-α)以及白介素-1β(Ⅱ-1β)的表达水平.结果 与Control组比较,AGEs组大鼠逃避潜伏期明显延长,穿越平台次数减少;海马氧化应激及炎症反应水平明显升高.SFP组较AGEs组逃避潜伏期显著降低、穿越平台次数明显增加;海马组织抗氧化系统水平升高;炎症因子表达减少.结论 SFP作为Nrf2激动剂,能改善AGEs引起的氧化应激和炎症反应,具有神经保护作用.
