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去透明带方法的选择对小鼠早期胚胎体外培养的影响
目的 探讨去透明带方法的选择对小鼠早期胚胎体外培养的影响.方法 用孕马血清促性腺激素(PMSG)与人绒毛促性腺激素(hCG)对小鼠进行超数排卵后,取单细胞阶段受精卵,将其分为酸性台式液去透明带组(台式液组)、0.5％链霉蛋白酶去透明带组(链霉蛋白酶组)以及未去透明带组.体外培养,分别观察三组单细胞受精卵分裂为2-细胞受精卵的卵裂率.结果 台式液组、链霉蛋白酶组与未去透明带组的第一次卵裂率分别为65.1％、66.7％、66.1％,三组之间比较差异无统计学意义(0.950＞P＞0.900).结论 在体外培养条件下,用酸性台式液去透明带与0.5％链霉蛋白酶去透明带后受精卵均能进行正常分裂,此两种处理方法对受精卵早期发育均没有影响.
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层粘连蛋白在早孕小鼠子宫内膜中的表达
层粘连蛋白(Laminin LN)是细胞外基质中重要的大分子非胶原糖蛋白,由座落于基膜上的上皮细胞、内皮细胞及被基膜包绕的肌细胞、垂体细胞合成并分泌贮存于基质中.研究表明,LN与细胞膜表面受体结合后可产生多种生物学作用,如介导上皮细胞生长、增殖、分化,促进细胞粘附、辅展、移动,并在肿瘤细胞转移过程中起重要作用.有人曾用间接免疫荧光方法对小鼠早期胚胎进行研究,发现LN在桑椹胚和内细胞团及其滋养层均有较强的阳性反应,在外胚层与内胚层之间的细胞外基质中可见LN呈条带状荧光.但有关胚泡植入前后子宫内膜中LN的变化研究报道较少.本实验用免疫组化ABC法,对小鼠子宫内膜腔上皮基膜和腺上皮基膜中LN的表达进行观察,探讨在胚泡植入前后子宫内膜中LN的变化及其作用.
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小鼠早期胚胎H3K4甲基化表达水平研究
目的:研究小鼠早期胚胎各发育阶段组蛋白H3K4单和双甲基化的变化过程.方法:准备受孕母鼠,获取小鼠各阶段正常早期胚胎,通过4%多聚甲醛固定,0.4%triton透膜,0.1%牛血清白蛋白封闭,抗H3K4单双甲基化-抗染色处理.二抗避光孵育后,利用免疫荧光枝术,对各个阶段早期胚胎组蛋白H3K4单和双甲基化表达水平鉴定.结果:成功得到所需要的各发育阶段的正常早期胚胎.发现:从1细胞胚胎到8细胞胚胎组蛋白H3K4单和双甲基化表达水平整体呈下降趋势,在1细胞胚胎达到高,8细胞胚胎表达水平低,桑葚胚和囊胚较8细胞胚胎表达水平又有所回升.结论:在早期胚胎发育过程中,组蛋白H3K4单和双甲基化程度成逐渐下降趋势.
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小鼠早期胚胎与肿瘤细胞共培养下的相互作用
目的 建立小鼠早期胚胎与肿瘤细胞体外共培养模型,以观察共同微环境中胚胎发育情况及肿瘤细胞生物学行为,并探讨两者间的相互作用.方法 获取小鼠2-细胞胚胎,与小鼠肿瘤细胞株体外共培养,观察胚胎的体外发育状况,并观测4-细胞胚胎、桑葚胚、囊胚的形成率.采用插入式细胞培养皿共培养,噻唑蓝法检测肿瘤细胞的增殖活力及流式细胞术检测其凋亡率;通过碘化丙啶染色及免疫组织化学技术,进一步分析肿瘤细胞与早期胚胎共培养时的相互作用.结果 体外共培养下2-细胞胚胎可存活并继续发育,且4-细胞胚胎、桑葚胚、囊胚形成率较阴性及阳性对照组均有显著提高(P＜0.05);插入式共培养24、48、72 h,肿瘤细胞的增殖活力和凋亡率较对照组差异均无统计学意义(P＞0.05);胚胎滋养层周围可形成“无瘤圈”,其周围肿瘤细胞增殖细胞核抗原及B细胞淋巴瘤/白血病-2的表达水平较其他区域未见差异.结论 早期胚胎与肿瘤细胞共培养可显著提高2-细胞胚胎的体外发育效率,局部共培养并未对肿瘤细胞的增殖、凋亡产生影响.
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部分破血活血中药对妊娠早期小鼠流产及死胎的影响
目的:观察部分破血活血中药对妊娠早期小鼠流产及死胎的影响.方法:选用破血药桃仁、红花、三棱,活血药赤芍、川芎、丹参6味中药,分低、中、高剂量组及对照组,单味水煎剂给妊娠早期小鼠灌胃,观察各组用药后的流产数、死胎数、活胎数.结果:桃仁中、高剂量组,三棱高剂量组的流产率与对照组相比有显著性差异;破血药各剂量组均出现死胎;活血药仅川芎高剂量组有仔胎死亡.结论:部分破血活血药可使妊娠早期小鼠流产和出现死胎,与剂量有一定的相关性,为中医药理论及妇科临床用药提供了部分实验研究依据.
