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不同胎龄新生儿肺表面活性蛋白C水平初步调查
目的 探讨不同胎龄新生儿肺表面活性蛋白C(Sp-C)水平.方法 选择2013年1月-2014年1月收集的初生儿的外周血,不同胎龄早产儿的脐带血,羊水标本采集,胚胎胎龄不一.对这118份标本进行蛋白C含量的试验,了解不同胎龄的新生儿肺SP-C的变化.结果 SP-C的含量从25周开始就逐渐升高,新生儿出生时肺SP-C水平可达到(5.28±0.39) ng/L.结论 肺SP-C随着胚胎的成熟逐渐达到高峰,其在新生儿出生时达到极点,并且这也是新生儿肺成熟的标志.
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非小细胞肺癌患者外周血中肺表面活性蛋白C mRNA的表达及临床意义
目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中肺表面活性蛋白C mRNA(SP-C mRNA)在病理确诊后的表达及其意义.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术来检测44例非小细胞肺癌患者外周血中SP-C mRNA的表达,并以20例肺良性病变患者和10名健康人作为对照.结果:44例肺癌患者外周血SP-C mRNA表达阳性率为59.1%;20例肺良性病变患者和10名健康人的外周血中无SP-C mRNA 表达.结论:通过检测非小细胞肺癌患者外周血,SP-C mRNA可能是良好的微转移分子标志物.
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生命早期VitD缺乏及干预对大鼠肺发育及肺SP-C表达的影响
目的：探讨生命早期 Vit D缺乏及适量干预对大鼠肺发育的影响及可能机制。方法将18只成年雌性SD大鼠随机分为正常对照组（对照组）、Vit D缺乏组（缺乏组）、1，25-（OH）2 D3干预组（干预组），每组6只。对照组及干预组予正常饲料、正常光照，缺乏组予不含 Vit D饲料、避光，喂养2周后，与成年雄性 SD大鼠交配，受孕第7日开始干预组予1，25-（OH）2 D3（10μg·kg－1）隔天灌胃，对照组及缺乏组予1 mL生理盐水代替，直到分娩后第21天，各组取新生第1、7、14、21天子鼠肺组织，光镜下观察肺形态结构，免疫组织化学方法检测肺 SP-C蛋白水平表达。结果缺乏组子鼠较同日龄对照组肺组织肺泡数少，肺泡腔小，形态较不规则，肺泡间隔较宽；干预组子鼠较同日龄对照组肺泡数稍增加，肺泡腔大小均匀，肺泡间隔较薄；3组子鼠随着日龄增加，SP-C的表达量逐渐增多，缺乏组子鼠SP-C表达量均低于同日龄对照组及干预组，差异有统计学意义（P＜0．05）；干预组子鼠SP-C表达量均高于对照组，其中第14、21天比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论维生素D在生命早期可影响大鼠肺发育，适量补充1，25-（OH）2 D3有助于大鼠肺发育，其机制可能与影响肺 SP-C的表达有关。
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SFTPC基因rs8192308多态性与新生儿呼吸窘迫综合征发病的相关性
目的 新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)是新生儿出生后早期严重的呼吸系统并发症,肺表面活性物质合成不足会导致进行性加重的呼吸困难,病死率较高.本项目拟研究肺表面活性蛋白SFTPC基因的常见变异位点及与NRDS发病风险的相关性.方法 选择复旦大学附属儿科医院新生儿科2012年1月至2015年3月收治的46例NRDS患儿为病例组,同期收治的44例无NRDS患儿为对照组.采用Sanger直接测序法对SFTPC基因全长及5'UTR区域4000 bp的区域进行全长测序,采用SPSS 20.0统计软件进行统计分析.结果 病例组和对照组的患儿均为汉族,2组间性别、胎龄、体质量及分娩方式差异均无统计学意义(均P＞0.05).本研究未检测到欧洲及非洲已报道NRDS的SFTPC基因变异位点.本研究在病例组检测到3个意义不明的变异,均位于5'UTR的c.-1614C＞A、c.-1504G＞A和c-368A＞G,三者的预测得分为4、5及5分.等位基因频率比较发现,rs8192308位点的变异存在组间差异,预测得分为5分.结论 上海地区汉族人群中,rs8192308位点可能与NRDS的发病有一定相关性.
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全反式维A酸对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖和肺表面活性蛋白C及水通道蛋白5表达的影响
目的 探讨全反式维A酸(at-RA)对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(fAECⅡs)增殖和肺表面活性蛋白C(SPC)、水通道蛋白5(AQP5)表达的影响.方法 分离、纯化孕19d的胎鼠肺组织,得到fAECⅡs.细胞培养1d后,以at-RA作为干预方式,在at-RA作用1、2、3d后,使用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况和活力,应用倒置显微镜观察细胞生长状况,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测SPC mRNA、AQP5 mRNA的表达,Western blot法检测SPC、AQP5蛋白的表达.结果 1.at-RA作用1d对细胞增殖和活力无影响(P＞0.05);而作用2d后,at-RA明显促进细胞增殖、增强细胞活力(P＜0.05),且促进作用在第3天显著(P＜0.05).2.与对照组相比,at-RA使得细胞状态更佳,细胞贴壁更紧,折光性更好.3.与对照组相比,at-RA在第1、2、3天均可上调AQP5 mRNA及AQP5蛋白的表达(t=-19.58、-10.44、-16.01、46.25、12.79、-27.96,P均＜0.05),分别为对照组的281.07％、766.67％、1 163.33％和792.65％、1 310.52％、1 561.56％.4.与对照组相比,at-RA在第1、3天上调SPC mRNA、SPC蛋白的表达(蛋白为对照组的615.480％、369.450％;mRNA为对照组的728.33％、400.83％)(t=-26.34、-25.26、-25.25、-31.71,P均＜0.05),但在第2天,下调SPC mRNA、SPC蛋白(对照组的66.57％,11.269％)的表达(t=9.12、13.80,P均＜0.05).结论 at-RA可促进fAECⅡs增殖,增强细胞活力;促进SPC和AQP5的表达.
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microRNA-646在脂多糖处理后的A549细胞中的表达及功能分析
目的 检测microRNA-646(miR-646)在不同浓度脂多糖处理后的A549细胞中表达量的变化,并探讨其可能机制.方法 实验分为对照组及实验组,对照组以RPMI-1640培养液处理A549细胞24 h,实验组分别以5、10、15 mg/L的脂多糖处理A549细胞24 h.通过免疫细胞化学染色、Western blot法检测各组细胞中的肺表面活性蛋白A(SP-A)、肺表面活性蛋白C(SP-C)的表达量.实时荧光定量PCR法检测各组细胞中miR-646的表达量.结果 实验组不同浓度脂多糖处理细胞的SP-A的表达量较对照组均下降,差异具有统计学意义(P均＜0.05),且SP-A的下降呈药物浓度依赖性；实验组不同浓度脂多糖处理细胞的SP-C的表达量较对照组均下降,差异具有统计学意义(P均＜0.05),其中10 mg/L脂多糖处理组的SP-C表达量低.miR-646在对照组的相对表达量为0.9597±0.0200,5 mg/L脂多糖处理组的相对表达量为1.6319±0.1325,10 mg/L脂多糖处理组的相对表达量为2.4762±0.1380,15 mg/L脂多糖处理组的相对表达量为1.6642±0.0938,实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01).结论 miR-646可能通过抑制SP-C的翻译,在急性呼吸窘迫综合征过程中发挥生物学功能.
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肺表面活性蛋白C exonⅡ基因突变与新生儿呼吸窘迫综合征的关联性
目的 探讨编码肺表面活性蛋白C(SP-C)的基因exonⅡ突变是否与新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)相关联.方法 选取2013年1月至2014年12月在北京军区总医院附属八一儿童医院新生儿科住院治疗并确诊为NRDS的90例汉族患儿作为NRDS组,又根据胎龄分为3个亚组,每组30例.采用观察表收集临床资料;另选取90例汉族其他患儿作为对照组,对照组患儿胎龄、性别、出生体质量等方面与NRDS组相匹配.研究对象在临床确诊后静脉采血1 mL,用DNA试剂盒常规提取DNA,PCR扩增后用ABI 3730XL全自动DNA测序仪进行双向测序,采用Chromas软件和Vector NTI Advanc软件进行分析,所得结果与GenBank的正常SP-C序列进行对比判读.结果 SP-C基因exonⅡ在NRDS组存在c.115G＞T和c.139G＞C 2种杂合错义突变,均属于错义突变;NRDS组c.115G＞T突变的GT基因型频率(0.078)高于对照组(0)(x2=7.283,P＜0.05).具有c.115G ＞T基因突变的NRDS患者,胸片示NRDSⅢ～Ⅳ级改变数较多,患儿死亡率高于对照组.c.139G＞C突变(GC)基因型频率为0.067.NRDS组GC基因型频率(0.067)高于对照组(0)(x2 =6.207,P ＜0.05).NRDS组64例剖宫产患儿中,GC基因型频率低于GG基因型频率(x2=9.276,P＜0.01),55例患儿需要3～4剂肺表面活性物质治疗,GC基因型频率低于GG基因型频率(x2=5.343,P＜0.05).结论 中国汉族呼吸窘迫综合征群体SP-C基因exonⅡ发现c.115G＞T、c.139G＞C 2种前人未发现的基因突变;c.115G ＞T基因突变与所研究的NRDS发病相关,并增加了该病的严重性,且增加了该病死亡风险;c.139G＞C基因突变仅与所研究的NRDS发病相关联,并未增加该病的严重程度和死亡风险.
关键词： 肺表面活性蛋白C 基因突变 新生儿呼吸窘迫综合征 -
肺表面活性蛋白C基因异常与婴幼儿肺间质性疾病
肺表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)基因是目前被发现的唯一仅在肺泡Ⅱ型上皮细胞中表达的肺表面活性蛋白基因,其蛋白表达产物SP-C是构成肺表面活性物质的小分子疏水性蛋白之一,具有调节肺泡液.气界表面张力、维持肺表面活性膜的稳定及参与肺器官局部防御体系等重要的生理功能.SP-C基因异常可造成SP-C结构变化和功能丧失,从而导致各种婴幼儿肺疾病,其中,肺间质性疾病(interstitial lung disease,ILD)的发病与SP-C基因突变的关系尤为密切.
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骨髓间充质干细胞向肺泡细胞转化的实验研究
目的 通过观察外源性骨髓间充质干细胞( MSC)的肺脏迁移及分化情况,探讨MSC治疗肺纤维化的细胞学机制.方法 体外分离、培养雄性Wistar大鼠的MSC.将60只雌性Wistar大鼠随机分为4组,A组制备博莱霉素致肺纤维化模型；B组和C组分别于博莱霉素注射后,立即和7d后通过尾静脉注入5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)标记的雄鼠MSC液0.5 mL(含细胞数2.5×106个)；D组造模后,立即注入未标记的等量雄鼠MSC液,作为阴性对照.提取肺组织的DNA,通过聚合酶链反应(PCR)检测雄性鼠的性别决定基因(sry基因),以判断外源性MSC是否存在于雌性鼠肺组织中；留取肺组织、新鲜提取的骨髓干细胞和培养至第5代的MSC行BrdU和肺表面活性蛋白C(SP-C)的双重免疫荧光染色,通过逆转录PCR (RT-PCR)检测其是否表达SP-C mRNA和水通道蛋白5(AQP-5)的mRNA,观察MSC移植前后的分化情况.结果 造模后立即和7d后移入雄性MSC的雌性鼠肺组织均可表达sry基因,且肺组织中的MSC可转化为Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ),并具备AECⅡ的形态学特征和分子生物学表型,但立即移入组明显好于7d后移入组(P＜0.01).新提取的骨髓干细胞和培养至第5代的MSC表达SP-C mRNA,而不表达AQP-5 mRNA,且SP-C的免疫荧光染色阴性.结论 外源性MSC可移入到损伤的肺组织内并转化为AECⅡ,而且早期移入更显著.这种分化潜能在骨髓阶段已具备,但要到损伤的微环境下才能发生转化.
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肺表面活性物质蛋白C研究新认识
肺表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)是肺表面活性蛋白之一,对髓磷脂合成和表面活性物质形成不可缺少,在肺表面活性物质正常功能发挥中起着关键作用.SP-C对生后呼吸的适应和调节至关重要,且能减轻炎症反应.SP-C缺陷与肺部疾病发病相关联.越来越多的研究表明,SP-C参与了多种肺部疾病的发生、发展,包括新生儿期严重的肺疾病,如肺间质性病变、新生儿呼吸窘迫综合征等,这些疾病直接影响新生儿患病率与生存率.目前有关SP-C遗传缺陷研究更是少见,本文就SP-C的功能,正常分子结构、遗传缺陷及分子病理,遗传缺陷与肺部疾病发病的关系,肺组织的形态学改变以及SP-C调节等方面的研究做一综述,以期加深人们对SP-C的认识.
