首页 > 文献资料
-
原癌基因c-myc内部核糖体进入序列研究进展
原癌基因c-myc被认为是具有激活和抑制双重作用的转录调节子,在细胞的增殖、分化和凋亡过程中发挥着重要的作用.人c-myc mRNA的5'-非翻译区含有一个内部核糖体进入序列(internal ribosome entry segement,IRES)元件.Chappell等发现c-myc的IRES中一个C变为U的核苷酸替换在42%的多发性骨髓瘤(multiple myeloma)患者骨髓样本中可以检出,而这种核苷酸的变化在对照样本中没有检出.带突变的c-myc的IRES比野生型的c-myc的IRES的功能要更强.表明c-myc IRES中单个的点突变足以引起内部核糖体进入从而指导的翻译起始增强,此现象代表了一种新的癌变机制[1].
-
肿瘤基因疫苗免疫增效载体pVAX1-IRES-GM/B7的构建与表达
目的:构建上游可以表达肿瘤抗原复合物,下游表达人GM-CSF和B7.1免疫协同增效分子的双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES-GM/B7.方法:通过搭桥PCR获得人GM-CSF和B7.1融合基因,插入已构建好的DNA疫苗载体pVAX1-IRES的下游,瞬时转染293T细胞,通过流式细胞术和间接免疫荧光检测融合基因的表达.此外,还在载体上游插入肿瘤抗原复合物,进一步验证该载体对肿瘤抗原的表达情况.结果:酶切鉴定和序列分析表明,GM/B7融合基因与设计完全一致,在体外细胞检测中获得表达,而且上游的抗原基因也可以顺利表达.结论:该载体的构建成功可以为肿瘤基因疫苗研制提供免疫增效载体.
-
人白细胞介素12双亚基共表达pVAX1-IRES-hIL12载体的构建与表达
目的 构建下游可以共表达人白细胞介素12(hIL12)双亚基的双顺反子真核表达载体pVAX1一IRES-hIL12.方法 通过搭桥PCR获得人白细胞介素12 P35及P40双亚基的融合基因P35-F2A-P40,插入DNA疫苗载体pVAX1-IRES的下游,瞬时转染293-T细胞,ELISA检测融合基因的表达.结果 酶切鉴定和序列分析表明融合基因与设计完全一致,融合基因在体外细胞培养液检测中获得分泌表达.结论 该载体的成功构建可以为肿瘤基因疫苗研制提供免疫增效载体.
-
Endostatin、FHIT和EGFP串联表达载体的构建
本研究将内皮抑素基因插入到包含人脆性组氨酸三联体基因的pIRES2-EGFP-FHIT中构建真核多基因表达载体pEF1-FHIT-EGFP-ES,脂质体法转染Hela细胞后,用G418筛选出稳定转染的细胞.RT-PCR、RT-PCR southern blot分析,结果证明单顺反子和三顺反子在RNA水平都得到表达.在蛋白表达水平上,荧光观察结果显示EGFP在Hela细胞中得到表达.本研究为基因药物和肿瘤多基因治疗奠定了基础.
关键词： 多基因 IRES endostatin FHIT EGFP -
多顺反子载体构建的策略及进展
多顺反子载体在基因治疗中具有重要的应用价值.目前常用的构建策略有多启动子载体,融合蛋白,插入内切蛋白酶位点,内部核糖体插入位点IRES等,但是这些构建方法往往有载体容量有限,受细胞类型限制,不能表达多个蛋白等缺点.自裂解多肽2A可应用在多顺反子载体构建中,并且具有结构短小,上下游基因表达平衡性好,可用于共表达多个蛋白等优点,是一种构建多顺反子载体的有效工具.
-
Delta1-IRES-EGFP双顺反子逆转录病毒表达载体的构建及鉴定
目的构建并鉴定人Delta1和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子逆转录病毒表达载体.方法利用基因重组技术将人Delta1基因构建到含IRES-EGFP逆转录病毒载体中;电穿孔法将重组质粒pDelta1-IRES-EGFP分别转入单、双嗜性包装细胞GP+E86和PA317,嘌呤霉素(puromycin)筛选获得阳性表达克隆;"乒乓球"法提高病毒滴度;重组病毒感染NIH3T3细胞,流式细胞仪(FACS)及RT-PCR法分别检测细胞荧光和Delta1 mRNA表达变化;C2C12共培养实验检测蛋白的功能.结果酶切、PCR鉴定及DNA测序证实逆转录病毒表达载体pDelta1-IRES-EGFP构建正确;经体外包装,获得高滴度9.7×105 CFU/ml的重组病毒液;重组病毒液感染NIH3T3细胞,FACS检测部分细胞荧光强度显著提高;RT-PCR证实细胞内有外源基因Delta1表达;C2C12共培养实验证实外源蛋白Delta1可抑制C2C12细胞的分化.结论逆转录病毒基因转移系统安全,效率较高,可获得外源基因长期、稳定的表达.
-
真核翻译起始因子家族在真核细胞翻译中的研究进展
真核翻译起始因子在真核细胞蛋白翻译起始过程中起到了至关重要的作用，在细胞发育、分化乃至基因表达等众多方面发挥深远的影响。本文将对其家族中的六位重要成员eIF1，eIF1 A，eIF2，eIF3，eIF4E，eIF5等，在真核细胞蛋白翻译中的作用研究作一综述，以期浅析eIFs家族对真核细胞发生发展的重要意义。
