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烟台市新生儿先天性甲状腺功能低下症病因学分析研究
目的 通过对先天性甲状腺功能低下症(CH)患儿甲状腺核素扫描和血清学变化分析、对新生儿促甲状腺激素(TSH)升高与母亲孕期甲状腺功能状态变化的比较、对确诊CH 患儿DUOX2 基因测序筛查,探讨新生儿CH 的病因分类.方法 采集1998 ～2010 年烟台市新生儿出生72 h 后血样滴于滤纸上,筛查试验采用时间分辨荧光标记法测定TSH 含量,确诊试验采用化学发光法测定血清TSH、游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)浓度水平,利用放射性核素扫描确定甲状腺形态、位置.对确诊CH 患儿的DUOX2 基因全部外显子进行基因突变筛查,结合测序验证及生物信息学进行分析.结果 523 462 例新生儿中确诊CH 372 例,其中永久性CH 216 例,暂时性CH 151 例,高TSH 血症5 例.在372 例CH 中,只有218 例同意做了甲状腺核素扫描,包括永久性CH162 例,暂时性CH 56 例.甲状腺形态基本正常的CH 血清TSH、FT3、FT4 含量与甲状腺形态和功能异常者有统计学差异(P <0.01),新生儿血TSH 升高与其母亲中孕期间甲状腺功能异常相关(P <0.01).在确诊的CH 患儿中,检测到2 例甲状腺肿大患儿的DUOX2 基因的外显子发生突变.第1例突变发生在DUOX2 基因第三外显子(c.227C >T),第2 例在第13 外显子发生突变(c.1621C >A).结论 CH 患儿的甲状腺形态、位置改变不同,血清TSH、FT3、FT4 表达水平不同;新生儿TSH 升高与其母亲孕期甲状腺功能呈正相关;DUOX2 基因突变可引起CH.此研究不仅有利于CH 患者的早期诊断,而且有利于开展产前诊断,提高出生人口素质.
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甲状腺素合成障碍性甲状腺功能减退症五例分子遗传学分析
目的 分析甲状腺素合成障碍性甲状腺功能减退症分子遗传学基础.方法 对2013年2月至8月经广西壮族自治区新生儿筛查中心疑诊为甲状腺素合成障碍性甲状腺功能减退症患儿5例,提取患儿及父母外周血基因组DNA,采用Sanger测序方法,对DUOX2、TG、TPO及NIS基因所有外显子进行测序.对新变异位点在100名正常人中进行验证.结果 5例中检出3例患儿携带DUOX2基因突变,例1为c.3340delC和p.R683L复合杂合突变;例2为p.K530X纯合突变;例3为p.E879K杂合突变.未找到TG、TPO及NIS基因突变位点.另2例患儿4个基因外显子未检测突变.将新变异位点c.3340delC和p.R683L在100名正常人中进行验证,未发现该2个变异位点存在.3例DUOX2基因突变患儿均表现为暂时性甲状腺功能减退症.结论 基因检测5例甲状腺激素合成障碍性甲状腺功能减退症,发现2个DUOX2新突变位点(c.3340delC和p.R683L),DUOX2单等位基因和双等位基因突变均表现为暂时性甲状腺功能减退症.
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NADPH氧化酶NOX1、NOX2和DUOX2在溃疡性结肠炎中的表达分析
目的 探讨NADPH氧化酶家族(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidases,NOXs)的主要成员NOX1、NOX2和双氧化物酶(dual oxidase,DUOX)2 (人:NOX1、NOX2和DUOX2;小鼠:Nox1、Nox2 和Duox2)在人炎症性肠病和小鼠肠炎模型结肠中的表达.方法 人结肠标本选自于通过结肠镜活检或手术切除的炎症性肠病组织及距离病变组织边缘5 cm以上正常组织;同时选用8~10周龄的C57BL/6雌性小鼠建立结肠炎模型,采用掷硬币法将其随机分为对照组和慢性肠炎组,慢性肠炎组先自由饮用1.0%(质量分数)葡聚糖硫酸钠7 d,然后自由饮水14 d,循环3次;通过体质量变化和HE染色方法评估肠道炎性反应程度.采用实时定量PCR技术和免疫组织化学方法分别检测结肠组织中NOX1、NOX2及DUOX2 mRNA和蛋白表达情况,并分析在人炎症性肠病中三者表达情况与临床特征之间的关系.结果 NOX1、NOX2和DUOX2 mRNA在人炎症性肠病结肠组织中的表达量均显著高于自身正常对照组织,分别增高2.8、2.0和3.3倍(P均<0.01);与人不同,Nox1和Duox2 mRNA在小鼠慢性肠炎结肠组织中的表达量差异无统计学意义,Nox2 mRNA增加2.4倍 (P<0.01).Nox1蛋白在正常结肠上皮细胞刷状缘和胞质中表达;Nox2蛋白主要表达于浸润的吞噬细胞和中性粒细胞;Duox2蛋白在正常结肠黏膜组织中低表达;三者在人炎症性肠病结肠组织中表达均上调(均P<0.01);在小鼠慢性肠炎模型中,Nox2和Duox2蛋白上调(均P<0.01),而Nox1无变化.除了NOX2 mRNA在男性病人表达高于女性病人外,未发现这些氧化酶与病人临床特征之间有关联.结论 NOX1、NOX2和DUOX2不但在维持机体正常生理功能过程中发挥重要作用,而且在炎症性肠病初期阶段的发病中也起一定的作用.
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连理汤调控溃疡性结肠炎NADPH氧化酶Nox1和Duox2表达临床研究
[目的]观察治疗前、后溃疡性结肠炎患者NADPH氧化酶Nox1和Duox2表达变化,探讨连理汤干预溃疡性结肠炎的机制研究.[方法]60例符合诊断标准、纳入标准、排除标准的溃疡性结肠炎患者,按就诊顺序随机分为2组,对照组30例,予美沙拉嗪治疗12周,治疗组30例,予连理汤治疗12周,记录患者治疗前后主要症状变化,应用实时荧光定量PCR技术检测治疗前、后NADPH氧化酶Nox1和Duox2表达变化.[结果]全部病例完成临床观察,治疗组总有效率为83.33％.对照组总有效率为86.67％,2组治疗后患者主要症状较治疗前明显改善,2组患者治疗前NADPH氧化酶Nox1和Duox2 mRNA表达呈上升趋势;治疗后NADPH氧化酶Nox1和Duox2 mR-NA表达呈下降趋势,2组治疗前后比较差异有统计学意义(P＜0.05),2组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).[结论]连理汤可能通过阻断NADPH氧化酶Nox1和Duox2的表达,抑制炎症因子激活,发挥治疗溃疡性结肠炎的效用.
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先天性甲状腺功能减退症患儿DUOX2基因突变的研究
目的：研究先天性甲状腺功能减退症（congenital hypothyroidism, CH）患儿DUOX2基因突变类型和特点，并初步探讨基因型-表现型的关系，为CH患儿的基因诊断和基因治疗提供理论依据。方法从10例CH伴甲状腺肿大患儿外周血白细胞中提取基因组DNA，采用PCR扩增和直接测序的方法对DUOX2全部外显子进行基因突变检测。结果在1例患儿中发现DUOX2基因第28外显子cDNA的3632位点发生了G>A的突变（c.G3632A），导致第1211密码子的精氨酸变为组氨酸（p.R1211H）。在3例患儿中发现DUOX2基因第17外显子cDNA的2033位点发生了T>C的突变（c.T2033C），导致第678密码子的组氨酸变为精氨酸（p.H678R）。此两种突变均为杂合型的错义突变。结论 CH患儿存在DUOX2基因杂合突变，该杂合突变可能引起蛋白质功能的改变从而导致CH；基因型与表现型的关系尚不明确，需要进一步的研究。
关键词： 先天性甲状腺功能减退症 DUOX2 甲状腺肿大 基因突变 儿童 -
DUOX2在银屑病及特应性皮炎皮损表达的研究
目的 探讨双功能氧化酶(dual oxidase,DUOX)2在寻常型银屑病患者皮肤、特应性皮炎(atopicdermatitis,AD)患者皮肤及正常人皮肤中的表达定位及差异,探讨其在皮肤抗感染机制中的作用.方法 免疫组化法检测银屑病皮损区、银屑病非皮损区、AD皮损区、AD非皮损区皮肤及正常皮肤DUOX2蛋白的表达.以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测寻常型银屑病患者皮损区、AD皮损区及正常皮肤中DUOX2 mRNA表达水平.结果 免疫组化法检测结果显示,DUOX2蛋白在银屑病皮损区、银屑病非皮损区、AD皮损区、AD非皮损区皮肤及正常皮肤标本中均有表达,并主要分布在表皮基底层、棘层与真皮乳头层.银屑病皮损组较银屑病非皮损组及正常皮肤组表达增加(P＜0.01)；AD皮损组较AD非皮损组及正常皮肤组表达增加(P＜0.01)；AD皮损组较银屑病皮损组表达增加(P＜0.01).RT-PCR法检测到DUOX2 mRNA在银屑病皮损及AD皮损中有表达,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 DUOX2在寻常型银屑病皮损、AD皮损及正常皮肤中表达,提示DUOX2可能参与皮肤抗感染机制,发挥抗菌屏障功能及氧化防御作用.
