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犬尿氨酸氨基转移酶和犬尿喹啉酸在自发性高血压大鼠中的变化
目的 犬尿氨酸氨基转移酶(KAT)催化犬尿氨酸(KYN)生成犬尿喹啉酸(KYNA).研究表明中枢KAT及KYNA可能参与血压调节,但外周KAT变化及KYNA生成与血压的关系尚无报道.检测肾脏KATⅡ基因表达,KAT活性,及尿KYNA含量在自发性高血压大鼠(SHR)和WKY大鼠(正常对照组)的变化.方法 采用实时定量PCR技术检测KATⅡ基因表达,高效液相色谱(HPLC)检测尿KYNA及KAT活性(通过测定其酶促反应产物KYNA).结果 虽然肾皮质和肾髓质KATⅡ基因mRNA表达在SHR与WKY之间差异无统计学意义(P>0.05);但SHR肾皮质KAT的活性显著低于WKY[(0.563±0.037) vs (1.037±0.131)μmol/(g·min),P=0.017].同时发现SHR组尿KYNA含量在显著低于WKY组[(7.8±1.8) vs (19.9±3.5)μmol/24 h,P=0.013].相关分析显示,肾皮质KAT的活性(r=-0.418, P=0.023)和尿KYNA含量(r=-0.723,P=0.001)与血压都呈显著负相关.结论 SHR大鼠肾皮质KAT活性降低及尿KYNA含量减少,提示除中枢KAT及KYNA变化外,肾皮质KAT活性变化导致的KYNA改变亦可能影响血压.
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原发性高血压患者血浆色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸浓度的变化
目的 通过测定血浆色氨酸(TRP)、犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)浓度,探讨外周吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)和犬尿氨酸氨基转移酶(KAT)活性与原发性高血压(EH)的关系.方法 采用高效液相色谱法(HPLC)测定100例EH患者和80名健康体检者(对照组)血浆TRP、KYN和KYNA浓度,计算产物/底物的百分比来评价酶活性,即IDO活性=KYN/TRP×100%,KAT活性=KYNA/KYN×100%.结果 EH组血浆TRP浓度为(59.85±9.89) μmol/L,明显高于对照组[(48.19±7.72) μmol/L,P<0.001];KYN浓度为(2.01±0.48) μmol/L,明显低于对照组[(2.17±0.43) μmol/L,P<0.05].EH组和对照组血浆KYNA浓度分别为(24.10±9.12)、(23.59±7.27) μmol/L,二者差异无统计学意义(P>0.05).EH组IDO活性为3.40%±0.85%,明显低于对照组(4.54%±0.81%,P<0.001);而KAT活性为1.20%±0.36%,明显高于对照组(1.09%±0.27%,P<0.05).EH组血浆TRP浓度与年龄呈负相关(r=-0.316,P=0.001),而对照组二者之间无明显相关性(r=-0.208,P=0.064).EH组和对照组血浆IDO活性均与年龄呈正相关(EH组:r=0.264,P=0.008;对照组:r=0.305,P=0.006).2组血浆KYN、KYNA浓度及KAT活性与年龄均无明显相关性.结论 EH组血浆TRP浓度明显增高而KYN浓度明显降低,提示外周TRP-KYN代谢途径的IDO活性可能与EH有关.
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高效液相色谱——紫外、荧光双检测器同时测定人尿中犬尿氨酸和犬尿喹啉酸
目的 建立高效液相色谱(HPLC)同时测定人尿中犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)方法.用KYNA/KYN比值评价人体犬尿氨酸氨基转移酶(KAT)活性.方法 采用HPLC测定KYN、KYNA,分析柱为安捷伦HC C18反相色谱柱;流动相为10 mmol/L乙酸钠-乙酸缓冲液:7%乙腈=93:7;流速1 mL/min;检测器波长:紫外365 nm,荧光344 am(激发)/398 mm(发射).结果 KYN和KYNA保留时间分别为6.9和11.5 min.水溶液标准与标准加入工作曲线斜率差异无统计学意义(KYN:P=0.406 8;KYNA:P=0.646 2).KYN和KYNA的平均回收率分别为98.74%±7.53%、95.17%±8.17%;稳定性试验的变异系数(CV)分别为3.35%和0.88%;精密度CV分别为2.73%和2.79%;低检测限分别为0.4和0.2μmol/L.30份健康成年人尿样的KYNA/KYN比值为2.45±1.54.尿中KYNA与KYN含量呈正相关关系(r2=0.375 8,P＜0.001).结论测定方法灵敏、准确、稳定.KYNA/KYN比值评测KAT活性具有简便、实用等特点,可用于相关疾病的临床辅助诊断和基础研究.
